一种红景天配方颗粒的质量标准检测方法
阅读说明：本技术 一种红景天配方颗粒的质量标准检测方法 (Quality standard detection method for rhodiola rosea formula granules ) 是由 李刚 周云雷 孟瑞 王新灵 刘远 李冬梅 于 2020-05-11 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种红景天配方颗粒的质量标准检测方法,包括红景天配方颗粒的鉴别、红景天配方颗粒的检查、红景天配方颗粒相关物质的含量测定。本发明针对红景天配方颗粒提供了系统化,科学化的质量标准检测方法,包括其鉴别、各项理化指标的检查以及相关成分含量的测定,测定方法使用参数精准控制,能完全反应出红景天配方颗粒的质量,更有效地控制产品质量,并可作为大规模生产的红景天配方颗粒疗效一致性的评价依据,具有较高的科学指导和产业调控价值。(The invention discloses a quality standard detection method of rhodiola rosea formula granules, which comprises the steps of identifying the rhodiola rosea formula granules, checking the rhodiola rosea formula granules and measuring the content of related substances of the rhodiola rosea formula granules. The invention provides a systematic and scientific quality standard detection method aiming at rhodiola rosea formula granules, which comprises the steps of identification, check of various physical and chemical indexes and determination of related component content, and the determination method adopts accurate control of parameters, can completely reflect the quality of the rhodiola rosea formula granules, more effectively controls the product quality, can be used as an evaluation basis for the consistency of the curative effect of the rhodiola rosea formula granules produced in large scale, and has higher scientific guidance and industrial regulation and control values.)
技术领域
本发明属于中药检测技术领域，尤其涉及一种红景天配方颗粒的质量标准检测方法。
背景技术
红景天配方颗粒为景天科植物大花红景天Rhodiola crenulata(Hook.f.etThoms.)H.Ohba的干燥根和根茎制成的配方颗粒，其味甘、苦，平，归肺、心经，具有益气活血，通脉平喘的功能，可用于治疗气虚血瘀，胸痹心痛，中风偏瘫，倦怠气喘。
在近几年的时间里面，国内外都分别针对红景天这种药材的功效和作用，进行不断的开发和研究，希望可以找到更加多配合治疗的方案，因为只有这样才可以充分的帮助有需要的患者解决健康上面的问题。但是研究表明，红景天的主要有效成份红景天苷的性质均不稳定，所以传统的红景天配方颗粒不仅杂质含量较大，携带服用不方便、而且稳定性不高，不易贮存。同时，尚无相关的质量标准检测方法，其有效成分得不到相应的保证，难以保证患者用药安全有效。
发明内容
本发明目的就是为了弥补已有技术的缺陷，提供一种红景天配方颗粒的质量标准检测方法。
为了实现上述的目的，本发明提供以下技术方案：
一种红景天配方颗粒的质量标准检测方法，包括以下步骤：
(1)红景天配方颗粒的鉴别；
(2)红景天配方颗粒的检查；
(3)红景天配方颗粒相关物质的含量测定。
进一步的，所述鉴别方法包括以下步骤：
(1)性状：应为红棕色至棕褐色颗粒，气芳香，味微苦涩，后甜；
(2)取红景天苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，得到对照品溶液备用；
(3)取红景天配方颗粒适量，研细，取0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，得到供试品溶液备用；
(4)照薄层色谱法，吸取对照品溶液和供试品溶液各10μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以展开剂展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点。
优选的，所述步骤4中的展开剂为三氯甲烷、甲醇、丙酮、水按体积比6：3：1：1形成的混合液的下层溶液。
进一步的，所述检查方法包括以下步骤：
(1)粒度检查：照粒度和粒度分布测定法，不能通过一号筛与能通过五号筛的总和，不得超过15％；
(2)水分检查：中药颗粒剂照水分测定法，不得超过8.0％；
(3)溶化性检查：取供试品10g，加热水200ml，搅拌5分钟，立即观察，应全部溶化或轻微浑浊，并不得有焦屑等异物；
(4)微生物限度检查：照微生物限度检查法，规定需氧菌数不得过103cfu/g，霉菌和酵母菌数不得过102cfu/g，大肠埃希菌不得检出；
(5)重金属及有害元素的检查：照铅、镉、砷、汞、铜测定法测定，铅不得过5mg/kg、镉不得过0.3mg/kg、砷不得过2mg/kg、汞不得过0.2mg/kg、铜不得过20mg/kg；
(6)浸出物的检查：照醇溶性浸出物测定法的热浸法测定，用乙醇作溶剂，不得少于18.0％。
进一步的，所述含量测定包括以下步骤：
(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水(15：85)为流动相，检测波长为275nm，柱温30℃，流速1.0ml/min，理论板数按红景天苷峰计算应不低于2000；
(2)对照品溶液的制备：取红景天苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得；
(3)供试品溶液的制备：取红景天配方颗粒适量，研细，取0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
(4)测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，本品按干燥品计算，每1g含红景天苷(C14H20O7)不得少于10.8mg。
本发明的优点是：
本发明针对红景天配方颗粒提供了系统化，科学化的质量标准检测方法，包括其鉴别、各项理化指标的检查以及相关成分含量的测定，测定方法使用参数精准控制，能完全反应出红景天配方颗粒的质量，更有效地控制产品质量，并可作为大规模生产的红景天配方颗粒疗效一致性的评价依据，具有较高的科学指导和产业调控价值。
附图说明
图1所示为薄层板1为硅胶G板的耐用性试验结果。
图2所示为薄层板2为硅胶G板的耐用性试验结果。
图3所示为薄层板于温度16.5℃、湿度46％下的耐用性试验结果。
图4所示为薄层板于温度40.0℃、湿度75％下的耐用性试验结果。
图5所示为不同浓度的铅标准品吸光度标准曲线图。
图6所示为不同浓度的镉标准品吸光度标准曲线图。
图7所示为不同浓度的砷标准品吸光度标准曲线图。
图8所示为不同浓度的汞标准品吸光度标准曲线图。
图9所示为不同浓度的铜标准品吸光度标准曲线图。
图10所示为红景天苷含量测定中对照品、样品、辅料、空白样品HPLC对比图谱。
图11所示为红景天苷标准曲线图。
图12所示为LoT15497色谱柱耐用性考察。
图13所示为S/N 4DG70770色谱柱耐用性考察。
图14所示为LN B18123色谱柱耐用性考察。
具体实施方式
以下结合具体的实例对本发明的技术方案做进一步说明：
实施例
炮制：红景天饮片按《中国药典》2015年版一部红景天项下炮制标准及药材炮制通则0213中的净制、切制、炮制标准进行炮制。
制法：取红景天饮片3030g加水煎煮二次，加水量分别为10倍、8倍，每次2h、1.5h，滤过，合并煎液，浓缩至相对密度1.10-1.15(55-60℃)，喷雾干燥成浸膏粉，加入糊精辅料适量，混匀，干法制粒，制成颗粒1000g，分装，得到红景天配方颗粒。
性状：对三批试生产红景天配方颗粒样品进行性状查，结果见表1。
表1三批次红景天配方颗粒性状描述
根据上述三批试生产产品性状检查结果，本品为红棕色至棕褐色颗粒；气芳香，味微苦涩，后甜。
一、鉴别
本实验以红景天苷对照品为对照，本方法根据《中华人民共和国药典》2015年版一部红景天药材的薄层鉴别方法，建立了红景天配方颗粒的薄层鉴别方法。实验结果表明：该红景天配方颗粒的薄层鉴别方法稳定、可行。
1、仪器与试药
仪器：SONY DSC-HX400照相机、JA2003N千分之一天平(上海佑科科学仪器仪表有限公司)、DZKW型水浴锅(上海科恒仪器有限公司)、DHG电热鼓风干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司)、BPS-1000CL恒温恒湿箱(上海一恒科技有限公司)、Cary数控超声波清洗器(合肥金尼克机械制造有限公司)、展开缸、硅胶G薄层板。
试药：
红景天配方颗粒(批号：201711012、201711022、201711032)
对照品：红景天苷对照品(中国食品药品检定研究院提供，批号：110818-201708)
三氯甲烷、甲醇、丙酮、甲醇均为分析纯。
2、溶液的制备
2.1取本品适量，研细，取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2对照品溶液的制备：
取红景天苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
2.3阴性样品溶液的制备：
取(缺红景天药材)阴性样品0.2g，照供试品制备方法制得阴性对照溶液。
3、薄层色谱条件
薄层板：硅胶G薄层板；
点样量：供试品溶液、阴性样品溶液及对照品溶液各10μl；
展开剂：三氯甲烷-甲醇-丙酮-水(6：3：1：1)的下层溶液；
显色剂：碘蒸气中熏；
检视：日光下检视。
4、耐用性考察：按照薄层鉴别方法进行耐用性试验，考察了硅胶G薄层板不同厂家、不同展开温度(16.5℃和40.0℃)、相对湿度(46％和75.0％)等影响因素，结果此展开条件耐用性好，主斑点清晰。
4.1薄层板1为硅胶G板(青岛谱科分离材料有限公司20191109)，如图1所示。
4.2薄层板2为硅胶G板(青岛海洋化工有限公司20190902)，如图2所示。
4.3薄层板3，于温度16.5℃、湿度46％，展开，显色，检视，如图3所示。
4.4薄层板4，于温度40.0℃、湿度75％，展开，显色，检视，如图4所示。
结论：采用上述薄层鉴别方法对三批红景天的配方颗粒进行鉴别，实验结果表明，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品在与对照品色谱相应的位置上，不显相同颜色的斑点。
二、检查
1、粒度：照粒度和粒度分布测定法《中国药典》2015年版四部(通则0982第二法双筛分法测定)，不能通过一号筛与能通过五号筛的总和，不得超过15％。本品三批检测结果见表2，均符合规定。
2、水分：中药颗粒剂照水分测定法《中国药典》2015年版四部(通则0832)测定，规定水分不得超过8.0％。本品3批检测结果见表2，均符合规定。
3、溶化性：根据颗粒剂项下有关的各项规定《中国药典》2015年版四部(通则0104)检查，取供试品10g，加热水200ml，搅拌5分钟，立即观察，应全部溶化或轻微浑浊，并不得有焦屑等异物。本品3批检测结果见表2，均符合规定。
4、装量：根据颗粒剂项下有关的各项规定《中国药典》2015年版四部多剂量包装的颗粒剂，照最低装量检查法(通则0942)检查。本品3批检测结果见表2，均符合规定。
表2粒度、水分、溶化性、装量检查结果表
5、微生物限度检查：根据颗粒剂项下有关的各项规定《中国药典》2015年版四部(通则0104)检查，照微生物限度检查法(中国药典2015年版四部通则1105)检查，规定需氧菌数不得过103cfu/g，霉菌和酵母菌数不得过102cfu/g，大肠埃希菌不得检出。
表3微生物限度检验结果
6、重金属及有害元素：
铅
6.1、仪器与试药
仪器：原子吸收分光光度计(安捷伦科技有限公司)、BSA224S万分之一天平(赛多利斯科学仪器有限公司)、微波消解仪(南京先欧仪器制造有限公司)、赶酸器(北京莱伯泰科仪器股份有限公司)；
试药：红景天配方颗粒(批号：201711011、201711021、201711031)；
标准品：铅单元素标准溶液(中国计量科学研究院，批号：GBW08619-13115)；
硝酸(优级纯)、双氧水。
6.2、溶液的制备
6.2.1供式品溶液的制备：取50g样品粉碎，存于塑料袋中。称取供试品0.5g于消解罐内罐中，加入浓硝酸8mL，双氧水2mL，盖上盖子，放置过夜。次日将装有供式品的内罐套上外罐，放入微波消解仪中。按照微波消解仪的操作规程操作，消解完毕，取出，将消解罐内罐放电热板上加热驱酸，至无黄烟溢出，取下，放凉。用硝酸(2.0％)定量转移并定容至50mL；同时做试剂空白。
6.2.2铅标准使用液的制备：吸取1.0mL铅标准溶液，置于1000mL容量瓶中，加2％硝酸稀释至刻度。如此多次稀释成每毫升含10.0、20.0、30.0、40.0、50.0ng铅的标准吸收液。
6.2.3仪器条件：波长283.3nm，狭缝0.5nm，灯电流10mA,干燥温度100℃持续10s，灰化温度600℃持续20s，原子化温度2100℃持续3s，背景校正为氘灯。
6.2.4标准曲线绘制：吸取上面配置的铅标准使用液10.0、20.0、30.0、40.0、50.0ng/mL各10uL，注入石墨炉，测得吸光值并求得吸光值与浓度关系的一元线性回归方程。
6.2.5试样测定：分别吸取样液和空白液各10uL，注入石墨炉，测得其吸光值，代入标准系列的一元线性回归方程中求得样液中铅的含量。
6.3、方法学考察
6.3.1线性关系考察
吸取上面配置的铅标准使用液10.0、20.0、30.0、40.0、50.0ng/mL各10uL，注入石墨炉，测得吸光值并求得吸光值与浓度关系的一元线性回归方程。结果见表4及图5。
表4不同浓度标准品的吸光度
6.4、红景天配方颗粒样品铅的测定
取红景天配方颗粒3批，照铅测定项下测定，结果见表5。
表5样品铅的测定结果
镉
6.1、仪器与试药
仪器：原子吸收分光光度计(安捷伦科技有限公司)、BSA224S万分之一天平(赛多利斯科学仪器有限公司)、微波消解仪(南京先欧仪器制造有限公司)、赶酸器(北京莱伯泰科仪器股份有限公司)；
试药：红景天配方颗粒(批号：201711011、201711021、201711031)；
标准品：镉单元素标准溶液(国家有色金属及电子材料分析测试中心，批号：GSB04-1721-2004：163041-1)
硝酸(优级纯)、双氧水。
6.2、溶液的制备
6.2.1供式品溶液的制备：取50g样品粉碎，存于塑料袋中。称取供试品0.5g于消解罐内罐中，加入浓硝酸8mL，双氧水2mL，盖上盖子，放置过夜。次日将装有供式品的内罐套上外罐，放入微波消解仪中。按照微波消解仪的操作规程操作，消解完毕，取出，将消解罐内罐放电热板上加热驱酸，至无黄烟溢出，取下，放凉。用硝酸(2.0％)定量转移并定容至50mL；同时做试剂空白。
6.2.2镉标准使用液的制备：吸取1.0mL镉标准溶液，置于1000mL容量瓶中，加2％硝酸稀释至刻度。如此多次稀释成每毫升含0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ng镉的标准吸收液。
6.2.3仪器条件：波长228.8nm，狭缝0.5nm，灯电流4mA，干燥温度100℃持续10s，灰化温度600℃持续20s，原子化温度1800℃持续3s，背景校正为氘灯。
6.2.4标准曲线绘制：吸取上面配置的镉标准使用液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ng/mL各10uL，注入石墨炉，测得吸光值并求得吸光值与浓度关系的一元线性回归方程。
6.2.5试样测定：分别吸取供式液和空白液各10uL，注入石墨炉，测得其吸光值，代入标准系列的一元线性回归方程中求得样液中镉的含量。
6.3、方法学考察
6.3.1线性关系考察
吸取上面配置的镉标准使用液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ng/mL各10uL，注入石墨炉，测得吸光值并求得吸光值与浓度关系的一元线性回归方程。结果见表6及图6。
表6不同浓度标准品的吸光度
6.4、红景天配方颗粒样品镉的测定
取红景天配方颗粒3批，照试样测定项下测定，结果见表7。
表7样品镉的测定结果
砷
6.1、仪器与试药
仪器：原子吸收分光光度计(安捷伦科技有限公司)、BSA224S万分之一天平(赛多利斯科学仪器有限公司)、微波消解仪(南京先欧仪器制造有限公司)、赶酸器(北京莱伯泰科仪器股份有限公司)；
试药：红景天配方颗粒(批号：201711011、201711021、201711031)；
标准品：砷单元素标准溶液(中国计量科学研究院，批号：GBW08611-15083)
硝酸(优级纯)、双氧水、硼氢化钾、氢氧化钾。
6.2、溶液的制备
6.2.1供式品溶液的制备：取50g样品粉碎，存于塑料袋中。称取供试品0.5g于消解罐内罐中，加入浓硝酸8mL，双氧水2mL，盖上盖子，放置过夜。次日将装有供式品的内罐套上外罐，放入微波消解仪中。按照微波消解仪的操作规程操作，消解完毕，取出，将消解罐内罐放电热板上加热驱酸，至无黄烟溢出，取下，放凉。用硝酸(2.0％)定量转移并定容至50mL；同时做试剂空白。
6.2.2砷标准使用液的制备：吸取1.0mL砷标准溶液，置于1000mL容量瓶中，加2％硝酸稀释至刻度。如此多次稀释成每毫升含5.0、10.0、15.0、20.0、25.0ng砷的标准吸收液。
6.2.3仪器条件：波长193.7nm，狭缝0.5nm，灯电流10mA，氢化物发生装置。
6.2.4标准曲线绘制：吸取上面配置的砷标准使用液5.0、10.0、15.0、20.0、25.0μg/L,注入氢化物发生装置，测得吸光值并求得吸光值与浓度关系的一元线性回归方程。
6.2.5试样测定：分别吸取样液和空白液注入氢化物发生装置，测得其吸光值，代入标准系列的一元线性回归方程中求得样液中砷的含量。
6.3、方法学考察
6.3.1线性关系考察
吸取上面配置的砷标准使用液5.0、10.0、15.0、20.0、25.0μg/L，注入氢化物发生装置，测得吸光值并求得吸光值与浓度关系的一元线性回归方程。结果见表8及图7。
表8不同浓度标准品的吸光度
6.4、红景天配方颗粒样品砷的测定
取红景天配方颗粒3批，照试样测定项下测定，结果见表9。
表9样品砷的测定结果
汞
6.1、仪器与试药
仪器：原子吸收分光光度计(安捷伦科技有限公司)、BSA224S万分之一天平(赛多利斯科学仪器有限公司)、微波消解仪(南京先欧仪器制造有限公司)、赶酸器(北京莱伯泰科仪器股份有限公司)；
试药：红景天配方颗粒(批号：201711011、201711021、201711031)；
标准品：汞单元素标准溶液(中国计量科学研究院，批号：GBW08617-15034)
硝酸(优级纯)、双氧水、硼氢化钾、氢氧化钾。
6.2、溶液的制备
6.2.1供式品溶液的制备：取50g样品粉碎，存于塑料袋中。称取约0.4g试样于消解罐内罐中，加入浓硝酸8ml，双氧水2ml，盖上盖子，放置过夜。次日将装有供试品的内罐套上外罐，放入微波消解仪中。按照微波消解仪的操作规程操作，消解完毕，取出，将消解罐内罐放电热板上加热驱酸，至无黄烟溢出，并继续浓缩至2～3ml，放冷，加20％硫酸溶液2ml、5％高锰酸钾溶液0.5ml，摇匀，滴加5％盐酸羟胺溶液至紫红色恰消失，转入50ml量瓶中，用水洗涤容器，洗液合并于量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，必要时离心，取上清液，即得。同法同时制备试剂空白溶液。
6.2.2汞标准使用液的制备：精密量取汞单元素标准溶液适量，用2％硝酸溶液稀释，制成每1ml含汞(Hg)0.1μg的溶液，即得(0-5℃贮存)。分别精密量取汞标准贮备液0ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，置50ml量瓶中，加20％硫酸溶液10ml、5％高锰酸钾溶液0.5ml，摇匀，滴加5％盐酸羟胺溶液至紫红色恰消失，用水稀释至刻度，摇匀如此多次稀释成每毫升含2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ng汞的标准吸收液。
6.2.3仪器条件：波长253.6nm，狭缝0.5nm，灯电流4mA，氢化物发生装置。
6.2.4标准曲线绘制：吸取上面配置的汞标准使用液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μg/L,注入氢化物发生装置，测得吸光值并求得吸光值与浓度关系的一元线性回归方程。
6.2.5试样测定：分别吸取样液和空白液注入氢化物发生装置，测得其吸光值，代入标准系列的一元线性回归方程中求得样液中汞的含量。
6.3、方法学考察
6.3.1线性关系考察
吸取上面配置的汞标准使用液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μg/L，注入氢化物发生装置，测得吸光值并求得吸光值与浓度关系的一元线性回归方程。结果见表10及图8。
表10不同浓度标准品的吸光度
6.4、红景天配方颗粒样品汞的测定
取红景天配方颗粒3批，照试样测定项下测定，结果见表11。
表11样品汞的测定结果
铜
6.1、仪器与试药
仪器：原子吸收分光光度计(安捷伦科技有限公司)、BSA224S万分之一天平(赛多利斯科学仪器有限公司)、微波消解仪(南京先欧仪器制造有限公司)、赶酸器(北京莱伯泰科仪器股份有限公司)
试药：红景天配方颗粒(批号：201711011、201711021、201711031)；
标准品：铜单元素标准溶液(中国计量科学研究院，批号：GBW08615-16032)
硝酸(优级纯)、双氧水。
6.2、溶液的制备
6.2.1供式品溶液的制备：取50g样品粉碎，存于塑料袋中。称取0.5g试样于消解罐内罐中，加入浓硝酸8mL，双氧水2mL，盖上盖子，放置过夜。次日将装有供式品的内罐套上外罐，放入微波消解仪中。按照微波消解仪的操作规程操作，消解完毕，取出，将消解罐内罐放电热板上加热驱酸，至无黄烟溢出，取下，放凉。用硝酸(2.0％)定量转移并定容至50mL；同时做试剂空白。
6.2.2铜标准使用液的制备：吸取1.0mL铜标准溶液，置于1000mL容量瓶中，加2％硝酸稀释至刻度。如此多次稀释成每毫升含0.2、0.4、0.6、0.8、1.0μg铜的标准吸收液。
6.2.3仪器条件：波长324.7nm，狭缝0.2nm，灯电流4mA，火焰检测器检测。
6.2.4标准曲线绘制：吸取上面配置的铜标准使用液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0μg/mL,注入火焰检测器，测得吸光值并求得吸光值与浓度关系的一元线性回归方程。
6.2.5试样测定：分别吸取样液和空白液注入火焰检测器，测得其吸光值，代入标准系列的一元线性回归方程中求得样液中铜的含量。
6.3、方法学考察
6.3.1线性关系考察
吸取上面配置的铜标准使用液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0μg/mL，注入火焰检测器，测得吸光值并求得吸光值与浓度关系的一元线性回归方程。结果见表12及图9。
表12不同浓度标准品的吸光度
6.4、红景天配方颗粒样品铜的测定
取红景天配方颗粒3批，照试样测定项下测定，结果见表13。
表13样品铜的测定结果
结论：根据上述3批样品测定结果，红景天配方颗粒中铅的含量为0.269-0.374mg/kg考虑到不同批次之间的差异，定本品每1kg含铅不得过5mg，镉的含量为0.014-0.022mg/kg考虑到不同批次之间的差异，定本品每1kg含镉不得过0.3mg，砷的含量为0mg/kg考虑到不同批次之间的差异，定本品每1kg含砷不得过2mg，汞的含量为0mg/kg考虑到不同批次之间的差异，定本品每1kg含汞不得过0.2mg，铜的含量为0mg/kg考虑到不同批次之间的差异，定本品每1kg含铜不得过20mg。
7、浸出物：照醇溶性浸出物测定法(通则2201)项下的热浸法，用乙醇作溶剂，不得少于18.0％。本品3批检测结果见表14，均符合规定。
表14浸出物检验结果
三、含量测定
本品主要化学成份有红景天苷、酪醇及红景天多糖，并且含有黄酮类化合物、酚类化合物、蛋白质、脂肪、微量挥发油及微量元素、氨基酸等。红景天苷是红景天的主要有效成分，具有调节神经系统，改善学习记忆力，镇静等作用；红景天苷及其衍生物在体外能有效地清除自由基，因此，具有抗衰老的作用；多元酚类化合物和黄酮类化合物具有抗氧化作用，因而能调节心脑血管系统，并且对心血管有保护作用；红景天多糖可通过胃肠吸收、肌肉注射、静脉吸收等方式增加血液中胰岛素水平，从而产生明显的降血糖的作用，此外，红景天多糖还具有增强免疫力。红景天配方颗粒是红景天药材饮片经加工制成的配方颗粒，具有用药安全、有效、方便以及易于贮藏和运输等特点。本方法参考《中国药典》2015年版一部红景天药材项下的含量测定方法制订，并对该方法进行了方法学验证，实验结果表明，该方法操作方便、可行，准确度高。
1、仪器与试药
高效液相色谱仪：Agilent VWD,安捷伦科技有限公司；
色谱柱：Agilent C18(4.6*250mm，5μm)，LN B18123；Thermo C18(4.6*250mm，5μm)，LoT15497；岛津C18(4.6*250mm，5μm)，S/N 4DG70770。
电子分析天平：BSA224S(万分之一),赛多利斯科学仪器有限公司；MCM36(百万分之一)，赛多利斯科学仪器有限公司
甲醇：色谱纯，TEDIA(天地)科技有限公司；
甲醇：分析纯，国药集团化学试剂有限公司；
水：娃哈哈纯净水，杭州娃哈哈集团；
红景天苷对照品(批号：110818-201708，纯度98.8％)，购自中国食品药品检定研究院。
2、含量测定方法的初步确定
参照《中国药典》2015年版一部中红景天【含量测定】项下条件进行实验，所得图谱基线平稳，峰形、分离度良好，故沿用红景天含量测定方法，并进行方法的考察。
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(15：85)为流动相；检测波长为275nm；柱温30℃；流速1.0ml/min。理论板数按红景天苷峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备：取红景天苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取本品适量，研细，取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.1供试品溶液制备方法考察
2.1.1提取方式考察
取本品(批号：201711011)约0.2g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟、回流提取30分钟，取出，放冷，称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。结果见表15。
表15提取方式考察结果
结果表明，超声提取方式对应的每克取样量下红景天苷峰面积大于回流提取方式对应的每克取样量下红景天苷峰面积，故确定提取方式为超声处理。
2.1.2提取溶剂考察
取本品(批号：201711011)0.2g(共3组)，精密称定，置具塞锥形瓶，分别精密加入甲醇25ml、50％甲醇溶液25ml、水25ml，称定重量，超声30分钟，取出，放冷，称重，以对应溶剂补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜滤过，即得。结果见表16。
表16红景天配方颗粒提取溶剂
由此可知，甲醇为提取溶剂时，每克取样量下红景天苷峰面积最大，综合考虑，确定提取溶剂为甲醇。
因此确定供试品制备方法为：取本品适量，研细，取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
3、方法学考察
3.1专属性试验
红景天配方颗粒中含有红景天苷，为考察辅料是否干扰红景天苷的测定，按处方比例称取辅料同法制成辅料样品溶液，记录色谱图。结果表明，辅料糊精溶剂色谱中在与红景天苷相应的保留时间没有色谱峰，表明辅料对红景天苷的测定无干扰，以本法同时测定本品中红景天苷的含量具有专属性(如图10所示)。
3.2线性关系的考察
精密称取红景天苷对照品22.859mg(110818-201708，98.8％)置50ml量瓶，加甲醇适量，超声溶解，加甲醇至刻度线，摇匀，作为储备液。分别精密量取上述储备液2ml至5ml、10ml，1ml至10ml，5ml至10ml容量瓶，加甲醇至刻度线，混匀，即得对照品溶液。
分别精密吸取对照品溶液5μl，注入液相色谱仪，照液相色谱法(2015年版中国药典四部通则0512)测定。以浓度(μg/ml)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。红景天苷回归方程：
y＝1.4579x+1.5812，相关系数：R2＝0.9999
如表17和图11所示，结果表明，红景天苷在45.17μg/ml-451.69μg/ml范围内线性良好。
表17红景天苷线性关系
3.3仪器精密度试验
精密吸取红景天苷对照品溶液(浓度为451.69ug/ml)5μl，按上述“含量测定”项下的色谱条件和测定法项下进行操作，连续进样6次，测定结果见表18。
表18仪器精密度试验结果(n＝6)
结果表明，RSD<2.0％，仪器精密度良好。
3.4稳定性试验
取本品(批号：201711011)，研细，取约0.2g，精密称定，按正文供试品溶液的制备和测定法项下操作，分别在制备后放置0、2、4、8、12、18、24h进样测定，测定结果见表19。
表19稳定性试验结果
结果表明，RSD<2.0％，供试品溶液在24h内稳定性良好。
3.5耐用性验证
取样品溶液，分别连接Thermo C18(4.6*250mm，5μm)，LoT15497；岛津C18(4.6*250mm，5μm)，S/N 4DG70770；Agilent C18(4.6*250mm，5μm)，LN B18123；三个不同品牌色谱柱，在同一色谱条件下对同一红景天配方颗粒样品进行进样，结果如图12、13、14所示，色谱峰型良好，分离度良好，结果表明该色谱条件具有普适性。
3.6重复性试验
取本品(批号：201711011)，研细，取约0.2g(共6份)，精密称定，按上述供试品溶液制备和测定法项下进行操作，结果见表20。
表20重复性试验结果(n＝6)
结果表明，RSD<2.0％，说明本方法的重复性良好。
3.7加样回收率试验
采用加样回收法，取本品(批号：201711011)，研细，取约0.1g(共6份)，精密称定，分别添加浓度为451.69μg/mL的对照品溶液5mL(批号：110818-201708，纯度98.8％)，按供试品溶液制备方法提取处理。结果见表21。
根据红景天配方颗粒(批号：201711011)中红景天苷含量为21.50mg/g。
表21红景天苷准确度试验结果(n＝6)
结果，平均回收率为104.12％，RSD<2.0％，表明本方法准确度较好。
4、红景天配方颗粒样品的含量测定
取红景天配方颗粒3批，照标准含量测定项下测含红景天苷(C14H20O7)，结果见表22和表23。
表22样品的含量测定结果
表23三批样品红景天苷含量测定结果
结论：根据上述3批样品测定结果，三批配方颗粒中含红景天苷(C14H20O7)的含量测定结果为2.16-2.18％；转移率为120.8-121.9％。
5、含量限度的制定
由于配方颗粒在生产中加入了辅料，故在计算中需扣除辅料量，再结合标准汤剂中含量限度范围与出膏率，暂定本品每克含红景天苷(C14H20O7)不少于10.8mg。
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