阅读说明：本技术 一种猪苓薄层鉴别方法 (Thin layer identification method for polyporus umbellatus ) 是由 齐晓丹 刘海滨 张淹 孔令梅 周祥山 李士栋 王春艳 孙阳恩 于 2020-05-14 设计创作，主要内容包括：本发明公开一种猪苓的薄层鉴别方法,包括步骤如下：(1)制备猪苓供试品溶液；(2)在硅胶薄层板上,以环己烷-乙酸乙酯-甲酸,体积比为8:1:0.02～0.2为展开剂展开,(3)直接置紫外灯下检视,或喷以硫酸乙醇,晾干,置紫外灯下检视。本发明操作简单,快速,能展示多个猪苓特征薄层斑点；提供一种以猪苓药材为对照的薄层鉴别方法,填补《中国药典》中无猪苓对照药材的空白；同时该方法可应用于猪苓药材、饮片、猪苓汤的定性鉴别,对猪苓中成分在药材、猪苓水提物中的相关性研究具有重要意义。(The invention discloses a thin-layer identification method of polyporus umbellatus, which comprises the following steps: (1) preparing a polyporus umbellatus test solution; (2) spreading on a silica gel thin layer plate by using a developing agent of cyclohexane-ethyl acetate-formic acid with the volume ratio of 8:1: 0.02-0.2, and (3) directly viewing under an ultraviolet lamp, or spraying sulfuric acid ethanol, drying in the air, and viewing under the ultraviolet lamp. The method is simple and quick to operate, and can display a plurality of characteristic thin layer spots of the polyporus umbellatus; provides a thin-layer identification method taking grifola as a reference, fills the blank that no grifola reference medicinal material exists in Chinese pharmacopoeia; meanwhile, the method can be applied to qualitative identification of the polyporus umbellatus medicinal materials, decoction pieces and the polyporus umbellatus soup, and has important significance for research on correlation of components in the polyporus umbellatus in the medicinal materials and the polyporus umbellatus aqueous extract.)

一种猪苓薄层鉴别方法

技术领域

本发明属于中药质量检测技术领域，涉及一种猪苓薄层鉴别方法。

背景技术

猪苓为多孔菌科真菌猪苓Polyporusumbellatus(Pers.)Fries的干燥菌核。具有利水渗湿的作用，用于小便不利，水肿，泄泻，淋浊，带下。目前，猪苓的标准中仅有麦角甾醇的薄层鉴别，但麦角甾醇水溶性差，在猪苓水提物中难以检测，无法定性考察猪苓成分在药材、饮片、水提物中的传递性。本研究提供了一种猪苓薄层鉴别方法，以猪苓药材为对照，不仅能展示多个的猪苓薄层斑点，而且能同时检测猪苓药材、饮片及水提物中的猪苓成分，便于在研究猪苓药材—猪苓水提物定性指标的相关性。

发明内容

本发明提供了一种猪苓薄层鉴别方法，不仅能在薄层图谱中展示多个的猪苓特征斑点，而且可同时检测猪苓药材饮片及水提物中的猪苓成分，便于考察猪苓在药材饮片、含猪苓组方的水煎煮提取物中定性成分的传递性。

为实现以上目的，本发明采用如下技术方案。

一种猪苓的薄层鉴别方法，包括步骤如下：

(1)制备猪苓供试品溶液；

(2)在硅胶薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸，体积比为8:1:0.02～0.2为展开剂展开，其中甲酸为展开系统调节剂；

(3)直接置紫外灯下检视，或喷以硫酸乙醇，晾干，置紫外灯下检视。

优选的，环乙烷-乙酸乙酯-甲酸体积比为8:1:0.1。

进一步的，检测波长为365nm；所述的硫酸乙醇的体积百分比为10％。

所述的猪苓的薄层鉴别方法用于含有猪苓的组合物。

所述的猪苓的薄层鉴别方法用于猪苓药材、或猪苓汤。

本发明的创新点：

1、本发明建立了一种猪苓薄层鉴别方法，操作简单，快速，相比于药典中猪苓薄层鉴别方法，本方法能展示猪苓中多个特征斑点，反应猪苓更多薄层信息。

2、填补《中国药典》中无猪苓对照药材空白，提供一种直接以猪苓药材为对照的薄层鉴别方法。

3、本方法能同时应用于猪苓药材饮片、猪苓汤中猪苓成分的定性鉴别，可应用于考察猪苓药材、猪苓汤定性成分的相关性。

附图说明

图1为猪苓薄层鉴别方法展开系统优化考察试验色谱图；A:环己烷-乙酸乙酯-甲酸(4:1:0.1)；B:环己烷-乙酸乙酯-甲酸(8:1:0.1)；1、5：猪苓饮片(由北京仟草中药饮片有限公司提供)；2：产于陕西省汉中市佛坪县；3：产于河南省南阳市栾川县；4：产于河南省南阳市西峡县；

图2为猪苓薄层鉴别方法展开系统甲酸用量考察试验色谱图；A:环己烷-乙酸乙酯-甲酸(8:1:0.02)；B:环己烷-乙酸乙酯-甲酸(8:1:0.1)；C:环己烷-乙酸乙酯-甲酸(8:1:0.2)；1、5：猪苓饮片(由北京仟草中药饮片有限公司提供)；2：产于陕西省汉中市佛坪县；3：产于河南省南阳市栾川县；4：产于河南省南阳市西峡县；

图3为猪苓薄层鉴别方法提取剂考察试验及与药典方法比较色谱图；A：药典方法；B：本发明方法；1：麦角甾醇(111845-201604)；2：猪苓(甲醇提取)3：猪苓(乙醚提取)；

图4为猪苓薄层鉴别方法显色方式考察试验色谱图；A:置365nm下检视；B：喷以10％硫酸乙醇后置365nm下检视；1、5：猪苓饮片(购于北京仟草中药饮片有限公司)；2：产于陕西省汉中市佛坪县；3：产于河南省南阳市栾川县；4：产于河南省南阳市西峡县；

图5为猪苓汤薄层鉴别色谱图；A：置365nm下检视；B：喷以10％硫酸乙醇后置365nm下检视；1：猪苓(购于北京仟草中药饮片有限公司)；2：猪苓汤1；3：猪苓汤2；4：猪苓汤3；5：缺猪苓猪苓汤。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，但本发明不仅限于此。

实施例1：猪苓薄层鉴别方法展开系统优化试验

(1)猪苓供试品制备：称取猪苓约1g，加入乙醚50ml，超声处理10分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，得供试品溶液。

(2)精密吸取供试品溶液5μl，点于硅胶G薄层板上，分别以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(4:1:0.1)、环己烷-乙酸乙酯-甲酸(8:1:0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯下(365nm)检视。结果见图1，通过调整环己烷与乙酸乙酯的比例，使猪苓色谱图中的两个斑点比移值(Rf)均达到合适的范围(0.3～0.7)。确定展开系统为环己烷-乙酸乙酯-甲酸(8:1:0.1)。

实施例2：猪苓薄层鉴别方法展开系统甲酸用量考察试验

(1)猪苓供试品制备：称取猪苓约1g，加入乙醚50ml，超声处理10分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，得供试品溶液。

(2)吸取供试品溶液5μl，点于硅胶G薄层板上，分别以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(8:1:0.02)、环己烷-乙酸乙酯-甲酸(8:1:0.1)、环己烷-乙酸乙酯-甲酸(8:1:0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯下(365nm)检视。结果见图2，在色谱图中，不同产地猪苓供试品在相同位置呈现相同颜色的荧光斑点。不同甲酸用量对薄层色谱图中上面的斑点的显示情况略有影响，用量越大，上面的斑点越明显。因甲酸用量过大会导致展开系统分层，经过试验，确定甲酸的用量范围为环己烷-乙酸乙酯-甲酸(8:1:0.02～0.2)，最佳甲酸用量为环己烷-乙酸乙酯-甲酸(8:1:0.1)。

实施例3：猪苓薄层鉴别方法提取溶剂考察试验

(1)猪苓供试品制备：称取猪苓约1g，加入乙醚50ml，超声处理10分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，得供试品溶液①。

(2)猪苓供试品制备：称取猪苓约1g，加入甲醇20ml，超声处理30分钟，过滤，取续滤液得供试品溶液②。

(3)吸取供试品溶液①5μl，供试品溶液②20μl，点于硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(8:1:0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯下(365nm)检视。结果见图3，通过色谱图比较，乙醚提取物色谱图中呈现斑点比甲醇提取物色谱图多，这是因为乙醚的极性较甲醇小，能提取出更多的小极性成分。

实施例4：与药典方法的比较

药典方法：参考《中国药典》2015年版一部猪苓鉴别(2)

(1)供试品制备：称取猪苓约1g，加入甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。

(2)对照品制备：取麦角甾醇对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

(3)吸取供试品溶液20μl、对照品溶液4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60℃～90℃)-乙酸乙酯(3:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，呈现相同颜色的斑点。

本发明方法：(4)猪苓供试品制备：称取猪苓约1g，加入乙醚50ml，超声处理10分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，得供试品溶液。

(5)吸取供试品溶液5μl，点于硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(8:1:0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯下(365nm)检视。猪苓供试品色谱图在相同位置均呈现相同颜色斑点。

结果见图3，药典方法中供试品色谱中仅有一个麦角甾醇斑点，本发明方法中供试品色谱中有多个荧光斑点。

实施例5：猪苓薄层鉴别显色方式考察

(1)猪苓供试品制备：称取猪苓约1g，加入乙醚50ml，超声处理10分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，得供试品溶液。

(2)吸取供试品溶液5μl，点于硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(8:1:0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯下(365nm)检视，或喷以10％硫酸乙醇，晾干，置紫外灯下(365nm)检视。结果见图4，在色谱图中，不同产地猪苓供试品色谱相同位置均呈现相同颜色的荧光斑点。

实施例6：多批次猪苓药材薄层鉴别

(1)猪苓供试品制备：称取不同产地(河南省南阳市栾川县、河南省南阳市西峡县、陕西省汉中市佛坪县)猪苓约1g，加入乙醚50ml，超声处理10分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，得供试品溶液。

(2)吸取供试品溶液5μl，点于硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(8:1:0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯下(365nm)检视，或喷以10％硫酸乙醇，晾干，置紫外灯下(365nm)检视。结果见图4，在色谱图中，不同产地，不同批次猪苓供试品色谱相同位置均呈现相同颜色荧光斑点。

实施例7：猪苓汤薄层鉴别试验

(1)猪苓供试品制备：称取猪苓粉末约1g，加入乙醚50ml，超声处理10分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，得供试品溶液。

(2)猪苓汤样品制备：称取猪苓、茯苓、泽泻、滑石、各1份，煮沸后，再煎煮30-60min，过滤，得到滤液；滤液加阿胶1份，烊化，得猪苓汤，经冷冻干燥，得猪苓汤冻干粉样品。

(3)猪苓汤供试品制备：称取猪苓汤样品2.0g，加入乙醚50ml，超声处理10分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，得供试品溶液。

(4)照薄层色谱法(《中国药典》2015版四部通则0502)，精密吸取猪苓供试品溶液5μl，猪苓汤供试品30μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(8:1:0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯下(365nm)检视，或喷以10％硫酸乙醇，晾干，置紫外灯下(365nm)检视。结果见图5，在色谱图中，在与猪苓药材相对应位置呈现相同颜色荧光斑点。

以上已对本发明基本原理及实施过程进行了描述，且对创造的部分实施例进行了具体说明，但本发明不限于所述实施例，熟悉本领域技术人员在不违背本发明创造精神的前提下还可做出种种的等同的变化或替换，这些等同的变化或替换均包含在本申请权利要求的所限的范围内。