一种检测粽子中微生物的方法
阅读说明：本技术 一种检测粽子中微生物的方法 (Method for detecting microorganisms in rice dumplings ) 是由 张国强 李江华 陈坚 堵国成 于 2020-05-28 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种检测粽子中微生物的方法,属于微生物检测领域。本发明的方法包括以下步骤：(1)菌落总数的测定；(2)霉菌和酵母计数；(3)大肠菌群计数。本发明的检测方法,具备一定操作经验的技术人员、或具备实验室均可进行操作。可将固体中不同的菌株快速分离并检测出来,操作简便、快速、误差小,可用于多种场景的菌株分离检测及数量检测,具有良好的应用前景。(The invention relates to a method for detecting microorganisms in rice dumplings, and belongs to the field of microorganism detection. The method of the invention comprises the following steps: (1) measuring the total number of colonies; (2) mold and yeast counts; (3) coliform counts. The detection method of the present invention can be performed by a technician having a certain operation experience or a laboratory. The method can quickly separate and detect different strains in the solid, is simple and convenient to operate, is quick, has small error, can be used for strain separation detection and quantity detection in various scenes, and has a good application prospect.)
技术领域
本发明涉及一种检测粽子中微生物的方法，属于微生物检测领域。
背景技术
在食品和饮料的生产过程中，伴随着检测是否存在某些微生物以确保最终产品的质量。菌落总数、霉菌和酵母以及大肠菌群的检测是食品质量的重要证据。在许多国家和地区都规定了允许在某些食品(例如乳品)中的微生物菌群，其中包括霉菌和酵母、大肠菌群的含量。
目前的检测方法通常都需要非常熟练的技术人员来观察和解释检验结果，检测步骤繁复杂繁琐，且由于操作产生的误差较大。因而需要简单、准确的方法来测定固体样品中微生物的数量。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供一种可检测粽子中含有的微生物菌群、霉菌和酵母菌群和大肠菌群的检测方法。
本发明提供一种粽子中微生物的检测方法，包括如下步骤：
A.菌落总数的测定；B.霉菌和酵母计数；C.大肠菌群计数。
在本发明的一种实施方式中，所述步骤A包含如下步骤：
A1：从样品的不同部位取一定量的样品，分别加生理盐水均质，制成样品匀液；
A2：逐步按适当倍数进行稀释；
A3：选择2-3个稀释度适宜的样品均液，分别取1mL加入无菌培养皿中，每皿中加15-20mL融化并恒温至46℃的平板计数琼脂培养基(PCA)，混匀。同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照；
A4：待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1培养48±2h；
A5：计数各平板菌落数，计算平行板菌落数的平均值，再乘以相应的稀释倍数，作为每g样品中菌落总数的结果。
在本发明的一种实施方式中，所述步骤B包含如下步骤：
B1：从样品的不同部位取一定量的样品，分别加生理盐水均质，制成样品匀液；
B2：逐步按适当倍数进行稀释；
B3：选择2-3个稀释度适宜的样品均液，分别取1mL加入无菌培养皿中，每皿中加20-25mL融化并恒温至46℃的马铃薯葡萄糖琼脂培养基，混匀。同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照；
B4：待琼脂凝固后，将平板翻转，28℃±1培养5d；
B5：计数各平板菌落数，计算平行板菌落数的平均值，再乘以相应的稀释倍数，作为每g样品中菌落总数的结果。
在本发明的一种实施方式中，所述步骤C包含如下步骤：
C1：从样品的不同部位取一定量的样品，分别加生理盐水均质，制成样品匀液；
C2：逐步按适当倍数进行稀释；
C3：选择2-3个稀释度适宜的样品均液，分别取1mL加入无菌培养皿中，每皿中加15-20mL融化并恒温至46℃的结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)，混匀，同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照；
C4：待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1培养18-24h；
C5：计数各平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落(如菌落直径较典型菌落小)；典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5mm或更大。
在本发明的一种实施方式中，在所述C5步骤中从VRBA平板上挑取不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤管内，36℃±1培养24-48h，观察产气情况；具体操作步骤如下：
(a)检查平板上有无呈紫红色，周围有红色的胆盐沉淀环的典型菌落；
(b)如有典型菌落，则从每个平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，少于10个菌落的挑取全部典型和可疑菌落分别移种于BGLB肉汤管内，36℃±1培养24-48h；
(c)观察产气情况，凡BGLB肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性；
(d)经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以平板菌落数的平均值，再乘以稀释倍数，即为每g样品中大肠菌群数。
本发明的有益效果：本发明的检测方法，具备一定操作经验的技术人员、或具备实验室均可进行操作。可将固体中不同的菌株快速分离并检测出来，操作简便、快速、误差小，可用于多种场景的菌株分离检测及数量检测，具有良好的应用前景。
附图说明
图1为菌落总数的检验流程图。
图2为霉菌和酵母平板计数的检验流程图。
图3为大肠菌群平板计数的检验流程图。
具体实施方式
实施例1
A菌落总数的测定：
(a)从样品的不同部位取一定量的样品，分别加生理盐水均质，制成样品匀液；
(b)逐步按适当倍数进行稀释；
(c)选择2-3个稀释度适宜的样品均液，分别取1mL加入无菌培养皿中，每皿中加15-20mL融化并恒温至46℃的平板计数琼脂培养基(PCA)，混匀，同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照；
(d)待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1培养48±2h；
(e)计数各平板菌落数，计算平行板菌落数的平均值，再乘以相应的稀释倍数，作为每g样品中菌落总数的结果。
B霉菌和酵母计数：
(a)从样品的不同部位取一定量的样品，分别加生理盐水均质，制成样品匀液；
(b)逐步按适当倍数进行稀释；
(c)选择2-3个稀释度适宜的样品均液，分别取1mL加入无菌培养皿中，每皿中加20-25mL融化并恒温至46℃的马铃薯葡萄糖琼脂培养基，混匀，同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照；
(d)待琼脂凝固后，将平板翻转，28℃±1培养5d；
(e)计数各平板菌落数，计算平行板菌落数的平均值，再乘以相应的稀释倍数，作为每g样品中菌落总数的结果。
C大肠菌群计数：
(a)从样品的不同部位取一定量的样品，分别加生理盐水均质，制成样品匀液；
(b)逐步按适当倍数进行稀释；
(c)选择2-3个稀释度适宜的样品均液，分别取1mL加入无菌培养皿中，每皿中加15-20mL融化并恒温至46℃的结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)，混匀，同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照；
(d)待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1培养18-24h；
(e)计数各平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落(如菌落直径较典型菌落小)。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5mm或更大。
其中，在所述步骤C中的(e)步骤中从VRBA平板上挑取不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤管内，36℃±1培养24-48h，观察产气情况。具体操作步骤如下：
(a)检查平板上有无呈紫红色，周围有红色的胆盐沉淀环的典型菌落；
(b)如有典型菌落，则从每个平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，少于10个菌落的挑取全部典型和可疑菌落分别移种于BGLB肉汤管内，36℃±1培养24-48h；
(c)观察产气情况，凡BGLB肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性；
(d)经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以平板菌落数的平均值，再乘以稀释倍数，即为每g样品中大肠菌群数。
以上实施方式仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通工程技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明的权利要求书确定的保护范围内。