阅读说明：本技术 一种燕窝肽及其制备方法与应用 (Bird's nest peptide and preparation method and application thereof ) 是由 范群艳 连建梅 李鸿铭 陈小玲 谢加凤 叶淑贤 于 2020-05-09 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种燕窝肽及其制备方法与应用,属于食品加工技术领域。通过二次酶解与蛋白酶种类、剂量优选最终得到低分子量、风味佳的燕窝肽,本发明公开保护的燕窝肽的制备方法,工艺流程简便,通过控制酶解工艺条件而制备的燕窝肽,既保留了燕窝的原有风味,又无明显酶味或肽味,口感柔和、无涩感,以及因所述燕窝肽的分子量低易吸收、粘度小,可作为原料适用于食品或护肤品中,所以本发明公开提供的燕窝肽制备方法适于市面推广与应用,适于工业化生产。(The invention discloses an edible bird's nest peptide and a preparation method and application thereof, and belongs to the technical field of food processing. The invention discloses a preparation method of the protected cubilose peptide, which has simple and convenient process flow, maintains the original flavor of cubilose, has no obvious enzyme or peptide flavor, has soft mouthfeel and no astringent feeling, and can be used as a raw material for food or skin care products because the cubilose peptide prepared by controlling the enzymolysis process conditions has low molecular weight, is easy to absorb and has small viscosity, so the preparation method of the cubilose peptide is suitable for market popularization and application and industrial production.)

一种燕窝肽及其制备方法与应用

技术领域

本发明属于食品加工技术领域，具体涉及一种燕窝肽及其制备方法与应用。

背景技术

燕窝作为古老的滋补珍品和养颜圣品，具有滋阴润肺，滋补养颜，同时能促进人体新陈代谢等作用。近年来，随着保健食品市场的日益活跃，燕窝制品也越来越受到消费者的青睐。燕窝主要成分有水溶性蛋白质、碳水化合物、钙、磷、铁、钠、钾等微量元素以及氨基酸，其中，燕窝中蛋白质含量较高，每100克干燕窝中含有蛋白质49.9g左右，且主要以糖蛋白的的形式存在，随着年龄的增长，人体分泌的蛋白酶逐渐下降，人体摄入蛋白后存在难以消化及蛋白质生物利用度不高等问题，在直接食用燕窝的过程中易造成对其中的营养吸收率较低，影响食用效果。因此为提高燕窝中蛋白多肽的吸收率，现阶段已有对燕窝小分子肽提取技术的研究，但风味并不理想，且工艺相对复杂。

并且现有燕窝肽的制备方法主要有酶法、酸法，其中虽然酶法提取因具有专一性而使其具有高效率，但最终制备的燕窝肽易有酶的风味残留及涩感，从而影响产品的应用范围；且酸法提取过程中，因与蛋白的反应激烈及操作过程复杂而导致效率低，同时具有脱酸不干净的现象。

因此，如何提供一种制备流程简单、风味佳的燕窝肽制备方法是本领域技术人员亟待解决的技术难题。

发明内容

针对上述问题，本发明提供了一种燕窝肽的制备方法，该制备工艺流程简单、易操作，且风味佳，保留了燕窝炖煮后的口感及风味；最终制备的燕窝肽可直接应用于传统即食燕窝产品中，增加唾液酸含量，以提高产品营养价值。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种燕窝肽的制备方法，所述方法具体包括如下步骤：

(1)燕窝浸泡、挑拣：干燕窝用纯化水浸泡后去除杂质，搓碎、沥干备用；

(2)炖煮、磨浆：将步骤(1)浸泡后的燕窝加纯化水炖煮，随后细磨得到燕窝浆；

需要说明的是，将浸泡后的燕窝加水炖煮至燕窝呈透明、软糯、无硬芯状态，且将燕窝浸泡、挑拣过程中产生的碎末、短条用于酶解提取燕窝肽后，再添加到燕窝产品中，能够有效提高燕窝的利用率。

(3)第一次生物酶解：调节步骤(2)制备的燕窝浆浓度与pH，随后在调配好的燕窝浆中加入中性蛋白酶，搅拌酶解后灭酶、冷却并过100～200目筛得到第一次酶解液；

且酶解后灭酶、冷却工艺为：将酶解液继续加热至85℃以上开始灭酶，时间15～20min，待灭酶结束后冷却至50℃以下过筛得到第一次酶解液。

(4)均质、过滤：将步骤(3)制备的第一次酶解液均质、粗滤得到酶解均质液；

(5)第二次生物酶解：调节步骤(4)制备的酶解均质液浓度与pH，随后在调配好的酶解均质液中加入复合蛋白酶，搅拌酶解后灭酶、冷却，得到第二次酶解液；

(6)精制、喷雾干燥：将步骤(5)制备的第二次酶解液经精滤、RO膜反渗透浓缩后喷雾干燥，即得到燕窝肽。

具体的，将第二次酶解液经0.1-5μm微孔滤膜精滤处理，得澄清透明的燕窝精滤液；随后将燕窝精滤液经RO膜反渗透浓缩2～7倍，并进行喷雾干燥，其中喷雾进口温度为130℃～180℃，出口温度为70℃～100℃，压力为30～40Mpa，喷出粉末即为燕窝肽。

并且，上述生物酶解工艺中，需保持酶解罐中的搅拌速率为30～70r/min，以使燕窝浆在生物酶解过程中呈现搅动状态，便于酶解均匀，提高酶解效率。

本发明公开保护的燕窝肽的制备方法，工艺流程简便，通过以上流程及控制条件制备出的燕窝肽，保留了燕窝的原有风味，且无明显酶味或肽味，口感柔和、无涩感。

进一步的，因本发明公开制备的燕窝肽具有较佳的口感、风味，除喷雾干燥制备肽粉外，浓缩后可直接使用或真空冻干成粉末状以作为其他食品添加的健康配料。

优选的，所述步骤(1)中，添加干燕窝的质量为纯化水质量的1～8％，浸泡时间为30～60min，浸泡温度为50℃～60℃。

优选的，所述步骤(2)中，加纯化水量为燕窝质量的20～60倍，炖煮时间为0.5～1h；并将炖煮后的燕窝过胶体磨2～3次，控制所述燕窝浆颗粒的细度在10μm以内。

需要说明的是，本发明在将燕窝生物酶解前进行胶体细磨，并控制胶体细磨后的燕窝浆颗粒细度以增加燕窝与生物酶的接触表面积，提高酶解效率，缩短酶解时间及降低能耗。

优选的，所述步骤(3)中，第一次生物酶解前燕窝浆的质量浓度为1～8％，pH为6.0～8.0。

进一步的，所述中性蛋白酶的添加质量为所述干燕窝质量的0.02～0.07％，及酶解温度为50℃～60℃，酶解时间为30～60min。

优选的，所述步骤(4)中，均质压力为20～35MPa，均质温度为40℃～80℃，及经300目滤网粗滤后得到酶解均质液。

优选的，所述步骤(5)中，第二次生物酶解前酶解均质液的质量浓度为1～8％，pH为6.0～8.0。

进一步的，所述复合蛋白酶按照如下质量百分比的蛋白酶组成：

中性蛋白酶0.04～0.3％、碱性蛋白酶0.05～0.4％、风味蛋白酶0.1～0.5％和胰蛋白酶0.1～0.5％；

且所述蛋白酶均基于所述干燕窝的质量配比，及酶解温度为50℃～60℃，酶解时间为4～10h。

以及本发明还请求保护一种通过上述公开的方法制备的燕窝肽及其在燕窝食品及护肤品中的应用。

一种燕窝肽，所述燕窝肽分子量低、粘度小，适于在即食燕窝食品及护肤品中应用。

经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种燕窝肽及其制备方法与应用，具有如下优异效果：

(1)本发明采用一次生物酶解、均质、过滤、二次生物酶解、精滤、浓缩和喷雾干燥工艺，利用生物技术有效提高燕窝利用率，不仅萃取了燕窝营养与精华，而且将大分子燕窝变为小分子肽，提高了燕窝在人体内吸收和利用率，同时通过本发明工艺处理及复合酶优选，规避了现有酶解技术存在的气味不良、溶解性差、色泽不良等问题。

(2)本发明公开保护的燕窝肽的制备方法，工艺流程简便，通过以上流程及控制条件制备出的燕窝肽，保留了燕窝的原有风味，且无明显酶味或肽味，口感柔和、无涩感，以及因所述燕窝肽的分子量低、粘度小，可适用于燕窝食品与护肤品中，所以本发明公开提供的燕窝肽制备方法适于市面推广与应用。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。

图1为本发明实施例1制备的燕窝肽分子量色谱图。

图2为本发明对比例1制备的燕窝肽分子量色谱图。

图3为本发明不同酶水解的蛋白含量对比图。

图4为本发明不同酶水解燕窝的水解度对比图。

图5为本发明不同酶水解唾液酸对比图。

图6为本发明风味蛋白酶不同添加量对水解分子量影响图。

图7为本发明碱性蛋白酶不同添加量对水解分子量影响图。

图8为本发明中性蛋白酶不同添加量对水解分子量影响图。

图9为本发明胰蛋白酶不同添加量对水解分子量影响图。

具体实施方式

下面将结合说明书附图及本发明实施例提供的技术方案，对本发明进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

须知，下列实施例中未具体注明的工艺设备或装置均采用本领域内的常规设备或装置；所有压力值和范围都是指绝对压力。

此外应理解，本发明中提到的一个或多个方法步骤并不排斥在所述组合步骤前后还可以存在其他方法步骤或在这些明确提到的步骤之间还可以插入其他方法步骤，除非另有说明。而且，除非另有说明，各方法步骤的编号仅为鉴别各方法步骤的便利工具，而非为限制各方法步骤的排列次序或限定本发明可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更技术内容的情况下，当亦视为本发明可实施的范畴。

本发明实施例公开了一种制备流程简单、风味佳的燕窝肽制备方法，具体包括以下步骤：

1)清洗：将干燕窝用医用级纯化水保温50℃～60℃泡发30～60min，搓碎、清洗、沥干，加20～60倍的医用级纯化水炖煮30～60min至燕窝呈透明、软糯、无硬芯状态；

2)磨浆：将炖煮后的燕窝过胶体磨2～3次，将燕窝浆颗粒的细度控制在10μm以内，得燕窝浆；

3)第一次生物酶解：将燕窝浆倒入酶解罐中，加入纯化水，料液比为(1～8)：100，并调整pH至6.0～8.0，开启搅拌，转速30～70rpm(保持燕窝浆有搅动状态)，并加热升温至罐内物料温度至50℃～60℃后，加入中性蛋白酶(干燕窝量的0.02％～0.07％)进行一道酶解，酶解时间30～60min，恒温过程温度控制50℃～60℃；

4)灭酶、过滤：待第一次生物酶解结束后，将酶解液继续加热至85℃以上开始灭酶，时间15～20min，灭酶结束后冷却至50℃以下，过100～200目筛得第一次酶解液；

5)均质：将第一次酶解液过均质机1～2遍，均质压力20～35Mpa，温度40℃～80℃，经300目滤网粗滤后得均质液；

6)第二次生物酶解：将均质液导入酶解罐中，用医用级纯化水进行定容至干燕窝浓度1％～8％，调整pH值6.0～8.0，开启搅拌，转速30～70rpm(保持燕窝浆有搅动状态)，并加热升温至罐内物料温度至50℃～60℃后，加入中性蛋白酶(干燕窝量的0.04％～0.3％)、碱性蛋白酶(干燕窝重的0.05％～0.4％)、风味蛋白酶(干燕窝重的0.1％～0.5％)、胰蛋白酶(干燕窝重的0.1％～0.5％)进行第二次酶解，酶解时间4～10h，恒温过程温度控制50～60℃，随后灭酶、冷却得到第二次酶解液；

7)精滤：将第二次酶解液经0.1-5μm微孔滤膜二次精滤处理，得澄清透明的燕窝精滤液；

8)浓缩、喷雾干燥：将精滤液经RO膜反渗透浓缩2-7倍，进行喷雾干燥，喷雾进口温度130℃～180℃，出口温度70℃～100℃，压力30～40Mpa，喷出粉末即得燕窝肽。

下面结合具体实施例进一步阐述本发明公开保护的燕窝肽制备方法的优异结果，但本发明的内容不仅仅局限于下面的实施例。

实施例1

一种燕窝肽的制备方法，包括以下步骤：

1)将干燕窝用医用级纯化水保温50℃泡发40min，搓碎、清洗、沥干，加30倍的医用级纯化水炖煮30min至燕窝呈透明、软糯、无硬芯状态；

2)将炖煮后的燕窝过胶体磨2次，将燕窝浆颗粒的细度控制在10μm以内，得燕窝浆；

3)将燕窝浆倒入酶解罐中，加入医用级纯化水定量至干燕窝浓度5％，调整pH至7.5，开启搅拌，转速40rpm，并加热升温至罐内物料温度为50℃后，加入中性蛋白酶0.03％，进行第一次酶解，酶解时间40min，恒温过程温度控制50℃；

4)待第一次酶解结束后，将酶解液继续加热至85℃开始灭酶，时间15min，灭酶结束后冷却至45℃，过滤200目得第一次酶解液；

5)将第一次酶解液过均质机2遍，均质压力25Mpa，温度45℃，经300目滤网粗滤后得均质液；

6)将均质液导入酶解罐中，用医用级纯化水进行定容至干燕窝浓度2.5％，调整pH值7.5，开启搅拌，转速40rpm，并加热升温至罐内物料温度为50℃后，加入中性蛋白酶0.05％、碱性蛋白酶0.3％、风味蛋白酶0.1％、胰蛋白酶0.1％进行第二次酶解，酶解时间6h，恒温过程温度控制50℃，灭酶、冷却，得到第二次酶解液；

7)将第二次酶解液进行1μm微孔滤膜二次精滤处理，得澄清透明的燕窝精滤液；

8)将精滤液经RO膜反渗透浓缩至5倍，进行喷雾干燥，喷雾进口温度135℃，出口温度80℃，压力30Mpa，喷出粉末即得燕窝肽。

实施例2：

一种燕窝肽的制备方法，包括以下步骤：

1)将干燕窝用医用级纯化水保温60℃泡发60min，搓碎、清洗、沥干，加40倍的医用级纯化水炖煮50min至燕窝呈透明、软糯、无硬芯状态；

2)将炖煮后的燕窝过胶体磨3次，将燕窝浆颗粒的细度控制在10μm以内，得燕窝浆；

3)将燕窝浆倒入酶解罐中，加入医用级纯化水定量至干燕窝浓度8％，调整pH至7.0，开启搅拌，转速50rpm，并加热升温至罐内物料温度为60℃后，加入中性蛋白酶0.07％，进行第一次酶解，酶解时间50min，恒温过程温度控制60℃；

4)待第一次酶解结束后，将酶解液继续加热至85℃以上开始灭酶，时间20min，灭酶结束后冷却至40℃，过滤150目得第一次酶解液；

5)将第一次酶解液过均质机2遍，均质压力33Mpa，温度50℃，经300目滤网粗滤后得均质液；

6)将均质液导入酶解罐中，用医用级纯化水进行定容至干燕窝浓度5.0％，调整pH值7.0，开启搅拌，转速50rpm，并加热升温至罐内物料温度为60℃后，加入中性蛋白酶0.3％、碱性蛋白酶0.08％、风味蛋白酶0.5％、胰蛋白酶0.4％进行第二次酶解，酶解时间10h，恒温过程温度控制60℃，灭酶、冷却得到第二次酶解液；

7)将第二次酶解液进行0.5μm微孔滤膜二次精滤处理，得澄清透明的燕窝精滤液；

8)将精滤液经RO膜反渗透浓缩至7倍，进行喷雾干燥，喷雾进口温度175℃，出口温度100℃，压力40Mpa，喷出粉末即得燕窝肽。

对比例1：

一种燕窝肽的制备方法，包括以下步骤：

1)将干燕窝用水常温泡发30min，20倍的水炖煮30min至燕窝呈透明、软糯、无硬芯状态；

2)将炖煮后的燕窝过胶体磨2次，将燕窝浆颗粒的细度控制在10μm以内，得燕窝浆；

3)将燕窝浆倒入酶解罐中，加入水定量至干燕窝浓度2.5％，调整pH至7.0，开启搅拌，转速50rpm，并加热升温至罐内物料温度为55℃后，加入中性蛋白酶0.4％、动物蛋白酶0.5％、风味蛋白酶0.05％、胰蛋白酶0.6％进行酶解，酶解时间6h，恒温过程温度控制55℃；

4)酶解结束后，将酶解液继续加热至85℃以上开始灭酶，时间20min，灭酶结束后冷却至40℃，过滤150目得酶解液；

5)将酶解液进行5μm微孔滤膜二次精滤处理，得澄清透明的燕窝精滤液；

6)将精滤液经RO膜反渗透浓缩10倍，进行喷雾干燥，喷雾进口温度120℃，出口温度101℃，压力40Mpa，喷出粉末即得燕窝肽。

对比分析与结果

分别将实施例1～实施例2与对比例1制备得到的燕窝肽进行分子量对比，对比结果见附图1～附图2和下述表1、表2。

表1实施例1分子量数据

表2对比例1分子量数据

由附图1～附图2与表1、表2可以看出，在实施例1中，分子量＜8000Da的占比＞60％，分子量＜1000Da的占比＞40％；而在对比例1中，分子量＞10000的占比＞70％。因此，由本发明实施例1、2公开采用二次酶解制备的燕窝肽酶解程度明显优于对比例1采用单次酶解程度。

此外，为进一步验证本申请公开保护的燕窝肽制备方法中的生物酶解工艺相较现有技术存在的非显而易见性，发明人还进行了如下实验：

实验1：生物酶种类的优选方法，

一种燕窝肽的制备方法，具体包括以下步骤：

1)将干燕窝用医用级纯化水保温50℃泡发40min，搓碎、清洗、沥干，加30倍的医用级纯化水炖煮35min至燕窝呈透明、软糯、无硬芯状态；

2)将炖煮后的燕窝过胶体磨2次，将燕窝浆颗粒的细度控制在10μm以内，得燕窝浆；

3)将燕窝浆过均质机1～2遍，均质压力20～35Mpa，温度40℃～80℃，经300目滤网粗滤后得均质液；

4)在3)中分别加入测试胃蛋白酶0.05-0.2％、碱性蛋白酶0.05-0.2％、木瓜蛋白酶0.05-0.2％、胰蛋白酶0.05-0.2％、风味蛋白酶0.05-0.2％、中性蛋白酶0.04-0.2％进行水解条件与酶活力的测定；

5)在3)中分别加入测试胃蛋白酶0.1-0.25％、碱性蛋白酶0.1-0.25％、木瓜蛋白酶0.1-0.25％、胰蛋白酶0.1-0.25％、风味蛋白酶0.1-0.25％、中性蛋白酶0.1-0.25％，上清液利用考马斯亮蓝与凯氏定氮测试燕窝蛋白溶出率；

6)在3)中分别加入胃蛋白酶0.15-0.35％、碱性蛋白酶0.15-0.35％、木瓜蛋白酶0.15-0.35％、胰蛋白酶0.15-0.35％、风味蛋白酶0.15-0.35％、中性蛋白酶0.15-0.35％对燕窝蛋白水解度影响进行测试；

7)在3)中分别加入胃蛋白酶0.25-0.4％、碱性蛋白酶0.25-0.4％、木瓜蛋白酶0.25-0.4％、胰蛋白酶0.25-0.4％、风味蛋白酶0.25-0.4％、中性蛋白酶0.25-0.4％，对燕窝唾液酸的水解释放效果进行测试，对水解后的上清液进行游离唾液酸的检测；

8)在3)中分别加入胃蛋白酶0.35-0.55％、碱性蛋白酶0.35-0.55％、木瓜蛋白酶0.35-0.55％、胰蛋白酶0.35-0.55％、风味蛋白酶0.35-0.55％、中性蛋白酶0.35-0.55％，对水解多肽分子量的变化进行测试，将燕窝水解后的上清液进行检测。筛选结果如下表3及附图3～附图5所示，结果表明胰蛋白酶，碱性蛋白酶和风味蛋白酶水解后上清液的低聚肽含量、蛋白含量与游离唾液酸均较高。

9)结合4)、5)、6)、7)、8)筛选结果，选取中性蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶四种生物酶作为复合酶作为燕窝肽酶解用生物酶。

表3不同酶水解多肽分子量占比

实验2：生物酶剂量的优选方法

一种燕窝肽的制备方法，包括以下步骤：

1)将干燕窝用医用级纯化水保温50℃泡发40min，搓碎、清洗、沥干，加30倍的医用级纯化水炖煮35min至燕窝呈透明、软糯、无硬芯状态；

2)将炖煮后的燕窝过胶体磨2次，将燕窝浆颗粒的细度控制在10μm以内，得燕窝浆；

3)将燕窝浆倒入酶解罐中，加入医用级纯化水定量至干燕窝浓度5％，调整pH至7.0，开启搅拌，转速40rpm，并加热升温至罐内物料温度为50℃。

4)在步骤3)中加入中性蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶四种生物酶复合，进行四因素三水平正交实验，酶解8h即得酶解液。

5)通过对步骤4)进行正交测试，如表4与表5可知，影响燕窝多肽分子量的生物酶主次顺序胰蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶，且选用中性蛋白酶0.04-0.3％、碱性蛋白酶0.05-0.4％、风味蛋白酶0.1-0.5％、胰蛋白酶0.1-0.5％作为燕窝酶解复合酶的最佳配比。其中不同蛋白酶种类的不同添加量对水解分子量影响图参见图6～图9，依次为风味蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶与胰蛋白酶不同添加量对水解分子量影响图。

表4正交实验因素水平表

水平	风味蛋白酶	碱性蛋白酶	中性蛋白酶	胰蛋白酶
					1	0.1％	0.1％	0.1％	0.1％
2	0.3％	0.3％	0.3％	0.3％
					3	0.5％	0.5％	0.5％	0.5％

表5L₉(3⁴)正交实验结果

对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。