阅读说明：本技术 一种甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒及其制备方法 (Glycylproline dipeptide aminopeptidase detection kit and preparation method thereof ) 是由 黄信用 吕崇翔 金鑫 于 2019-12-15 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒,包括R1试剂和R2试剂,所述R1试剂包括甘氨酸缓冲液5-20g/L、双甘肽80-150mmol/L、甲苯酸钠30-50mmol/L、枸盐酸钠0.1-0.2mol/L、海藻糖0.2g-0.5g/L、IgG1.5-2g/L,其余为纯净水；所述R2试剂包括甘氨酸缓冲液5-8g/L、甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸120-200mmol/L、聚乙二醇10-15mol/L、明胶0.5-1mol/L,其余为纯净水；制成一种甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒及其制备方法,其具有抗干扰能力强,同时具有抑制自身非特异性反应以及灵敏度高的效果。(The invention discloses a glycylproline dipeptide aminopeptidase detection kit, which comprises an R1 reagent and an R2 reagent, wherein the R1 reagent comprises 5-20g/L of glycine buffer solution, 80-150mmol/L of diglycine, 30-50mmol/L of sodium toluate, 0.1-0.2mol/L of citric acid sodium hydrochloride, 0.2-0.5 g/L of trehalose, 1.5-2g/L of IgG1, and the balance of purified water; the R2 reagent comprises 5-8g/L glycine buffer solution, 200mmol/L glycylprolyl p-nitroaniline p-toluenesulfonic acid, 10-15mol/L polyethylene glycol, 0.5-1mol/L gelatin and the balance of purified water; the glycylproline dipeptide aminopeptidase detection kit and the preparation method thereof have the advantages of strong anti-interference capability, self-nonspecific reaction inhibition and high sensitivity.)

一种甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶主要来自鼠肝和鼠肾、猪肾、人和各种动物血清、人唾液腺和唾液、牛和人的牙髓和牙龈等组织中，主要用于肝胆疾病、胃肠疾病、慢性肾小球肾炎患者和急性淋巴细胞性白血病、淋巴肉瘤和淋巴网状细胞瘤病人检测。

在血清AFP阴性和阳性的原发肝癌病人中，血清GPDA升高的阳性率基本一致，而肝血管瘤病人的血清GPDA活性在正常范围。70％以上的胃癌病人的血清 GPDA明显下降，胃癌切除后，病人血清GPDA呈回升趋势。血清GPDA测定对鉴别肝脏良恶性病变，监测癌的肝转移和胃癌的检测，均具有意义。

在甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶的检测中，其底物的稳定性至关重要，对其底物酶反应直接关系到实验所涉及到的准确性和特异性，而市面上所涉及到的底物一般采用甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸，其稳定性对于试剂要说比较苛刻，因此，特申请一种甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒及其制备方法来对底物甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸进行稳定性的控制，用以提高实验准确性。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种抗干扰能力强，同时具有稳定性以及灵敏度高的甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒及其制备方法。

为解决上述问题，本发明采用如下技术方案：一种甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒，包括R1试剂和R2试剂，所述R1试剂包括甘氨酸缓冲液5-20g/L、双甘肽80-150mmol/L、甲苯酸钠30-50mmol/L、枸盐酸钠 0.1-0.2mol/L、海藻糖0.2g-0.5g/L、IgG1.5-2g/L，其余为纯净水；所述R2 试剂包括甘氨酸缓冲液5-8g/L、甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸120-200 mmol/L、聚乙二醇10-15mol/L、明胶0.5-1mol/L，其余为纯净水。

进一步的方案为：所述R1试剂和R2试剂中甘氨酸缓冲液为25±1°，PH 为6.6的溶液。

进一步的方案为：所述R1试剂和R2试剂体积比为3:1。

进一步的方案为：所述甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒的波长为 410nm。

进一步的方案为：所述IgG为驴或兔IgG。

本发明还公开了一种甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

1)、将甘氨酸缓冲液和双甘肽进行搅拌混合，先静至10分钟，静至时温度控制在50-60℃，然后加入甲苯酸钠、枸盐酸钠和海藻糖和纯净水，然后再缓慢滴加IgG边搅拌，滴加的时候温度控制在25℃-30℃，制得R1试剂；

2)、先把甘氨酸缓冲液和甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸混合，并放入到搅拌器内搅拌20分钟，去掉上清液后静置半小时，再把聚乙二醇、明胶以及纯净水进行混合，再把两者混合液倒入到一起制得R2试剂；

3)、把R1试剂和R2试剂混合后即可制得甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒。

本发明的有益效果是：

本发明采用R1试剂和R2试剂，R1试剂中加入了甲苯酸钠、枸盐酸钠和海藻糖，其可以有效提高双甘肽在甘氨酸缓冲液中的稳定性，而在甘氨酸缓冲液和甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸混合的混合液中，加入了聚乙二醇、明胶，同样也可以使甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸的稳定性有效提升，使制得的甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒在稳定和抗干扰能力上有着显著的提升，可在相关生化试剂领域进行推广使用。

说明书附图

图1为本发明产品与对比产品相关性曲线图。

具体实施方式

下面对本发明的优选实施例进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。

实施例一

一种甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒，包括R1试剂和R2试剂，所述R1试剂包括甘氨酸缓冲液15g/L、双甘肽120mmol/L、甲苯酸钠35mmol/L、枸盐酸钠0.2mol/L、海藻糖0.3g/L、IgG 2g/L，其余为纯净水；所述R2试剂包括甘氨酸缓冲液7g/L、甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸180mmol/L、聚乙二醇15mol/L、明胶1mol/L，其余为纯净水。

实施例二

一种甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒，R1试剂和R2试剂，所述R1 试剂包括甘氨酸缓冲液15g/L、双甘肽80mmol/L、甲苯酸钠30mmol/L、枸盐酸钠0.2mol/L、海藻糖0.5g/L、IgG 1.5g/L，其余为纯净水；所述R2试剂包括甘氨酸缓冲液6g/L、甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸150mmol/L、聚乙二醇15mol/L、明胶0.5mol/L，其余为纯净水。

实施例三

一种甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒，包括R1试剂和R2试剂，所述R1试剂包括甘氨酸缓冲液18g/L、双甘肽130mmol/L、甲苯酸钠50mmol/L、枸盐酸钠0.2mol/L、海藻糖0.4g/L、IgG 2g/L，其余为纯净水；所述R2试剂包括甘氨酸缓冲液7g/L、甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸130mmol/L、聚乙二醇15mol/L、明胶0.5mol/L，其余为纯净水。

特取以实施例一为例，并取40组样品进行检测，采用不同液体包括人唾液、血清和血浆，前后相隔60S进行检测，并采用连续监测法实施，对比产品X也采用连续监测法实施，和为前两侧监测数据的中间值，DX_i和DY_i为前两侧监测的相差值，如下表所示：

结果所得线性方程式为y＝0.9946X+1.4992，图1为本发明产品与对比产品相关性曲线图，本表以及图1能体现出本发明的产品稳定性更好。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何不经过创造性劳动想到的变化或替换，都应涵盖在本实用新保护范围为准。