阅读说明：本技术 一种艾日布林及含艾日布林的制剂中有关物质的检测方法 (Eribulin and detection method of related substances in eribulin-containing preparation ) 是由 付丙月 张雯 王金虎 张宁 孙玲 孙青� 王颖超 吴伟山 于 2019-07-11 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种艾日布林及含艾日布林的制剂中有关物质的检测方法。本方法具体采用反相高效液相色谱法,迅速准确的检测出艾日布林的杂质及降解产物情况,解决了其合成和制剂过程中产生的各类杂质对产品纯度的干扰,能全面可靠地控制原料药和制剂的质量。该方法操作简捷,灵敏度高,分离度好,为控制产品质量提供了一种有效的分析方法。(The invention discloses eribulin and a detection method of related substances in a preparation containing eribulin. The method specifically adopts reversed-phase high performance liquid chromatography, rapidly and accurately detects the impurity and degradation product conditions of eribulin, solves the problem that various impurities generated in the synthesis and preparation processes interfere with the product purity, and can comprehensively and reliably control the quality of the raw material medicine and the preparation. The method has the advantages of simple operation, high sensitivity and good separation degree, and provides an effective analysis method for controlling the product quality.)

一种艾日布林及含艾日布林的制剂中有关物质的检测方法

技术领域

本发明涉及一种艾日布林及含艾日布林的制剂中有关物质的检测方法，属于药物分析检测领域。

背景技术

艾日布林(化学名：Eribulin，商品名：Halaven)，化学结构式如下：

2010年11月，由美国FDA批准用于治疗转移性乳腺癌，是第一款获批用于脂肪肉瘤并证明对生存期有改善的药物。艾日布林其抗癌作用机制与紫杉醇类似，可通过微管蛋白抗有丝***途径来阻断G2/M细胞回路，影响有丝***的纺锤体，而不影响微管缩短期和微管蛋白分割成非分泌性的聚合体,最后有丝***过程被阻碍，导致细胞死亡。现临床用于不能通过手术移除的(不可切除)或晚期(转移性)脂肪肉瘤(一种特定形式的软组织肉瘤)治疗。

目前国内该药物也没有统一的检测标准，因此，为了更好地控制艾日布林产品的质量，需要建立一套简单可靠并稳定有效的方法来进行本品的有关物质进行检测，解决合成工艺引入的或者降解及制剂加工过程产生的各类已知或未知杂质对产品纯度测定的干扰。

本发明采用等度洗脱方式，有效地对艾日布林及含艾日布林的制剂进行含量和有关物质检测，可快速准确的检测出艾日布林的杂质及其降解产物，操作简捷，灵敏度高，可较好地控制产品质量。本发明实现了艾日布林及含艾日布林的制剂有关物质的测定，保证了艾日布林的质量控制，在合成和制剂过程的质量控制方面具有重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的在于建立一种能够控制艾日布林及含艾日布林的制剂中有关物质的检测方法。该方法克服了该药物没有统一的药物标准的问题，解决合成工艺引入的或者降解及制剂加工过程产生的各类已知或未知杂质对产品纯度测定的干扰，更好地控制艾日布林产品的质量。考虑到正相色谱调节不适用于液质联用仪，无法进一步开展艾日布林及含艾日布林的制剂有关物质的分离和结构定性检测，因此研究了反相高效液相色谱法。该方法的优点：1、能够将有关物质有效分离、并且能够量化控制；2、该方法具有普遍实用性；3、足够的灵敏度，可对杂质进行有效的控制。

本发明提供了一种艾日布林及含艾日布林的制剂中有关物质检测方法，步骤如下：(1) 取艾日布林原料药或含艾日布林的制剂样品，用流动相溶解，配制供试液；(2)采用反相高效液相色谱法，色谱柱为C18柱，柱温15℃～40℃，流速为0.5～1.5ml/min，以极性有机溶剂-无机盐缓冲液为流动相，采用等度洗脱；(3)采用紫外检测器，检测波长230～260nm，记录色谱，完成艾日布林及含艾日布林的制剂中有关物质的检测。

进一步地，本发明所述的检测方法中，取艾日布林及含艾日布林的制剂样品用流动相溶解并稀释，制成每1ml含艾日布林0.01～5mg的供试品溶液。

其中，以乙腈-醋酸盐缓冲液的混合溶液或甲醇-醋酸盐缓冲液的混合溶液为流动相，二者的体积比为95％：5％～80％：20％。

更进一步地，醋酸盐缓冲液浓度为0.001～0.1mol/L，pH值为3.5～7.0，其中，浓度优选0.001～0.05mol/L，pH值为5.0～6.5，最优浓度为0.01mol/L，最优pH为5.0或6.0。醋酸盐缓冲液的盐种类包括：醋酸铵、醋酸钠、醋酸钾、醋酸钙、醋酸锌、醋酸镁等，其中经过实验优选醋酸铵、醋酸钠、醋酸钾，最优选醋酸铵缓冲液。

本发明所述的检测方法中，色谱柱为Eclipse XDB-C18。

本发明所述的检测方法中，色谱柱温度在15℃～40℃。

本发明所述的检测方法中，检测波长为254nm。

本发明与已有技术相比的积极效果在于：

1、本发明中液相色谱条件的优越性更强，适用于原料药及其各种剂型有关物质的检测，可快速准确的检测出艾日布林的杂质和降解产物情况。在艾日布林原料及其制剂的有关物质检测中，各峰形对称，分离度高，避免了出现前沿峰、个别峰分离度不够等问题。

2、本发明使用紫外检测器对产品进行有关物质检测，建立了一种快速直观的评价色谱峰纯度的有效防范。可直观的判断色谱峰的纯度，并判断存在干扰费的位置，能够获得“在流”的全部光谱信息，快速得到色谱组分的吸收光谱，优点在于不仅能依靠色谱的保留时间进行定性，而且能够根据其提供的光谱信息进行定性，大大提高了定性的可信度和检测灵敏度。

3、本发明检测方法准确，操作简捷，重现性好，灵敏度高，可以充分满足有关物质检测和分解产物测定的要求，比较好地控制样品中的特殊杂质，保证产品质量，在工作中实用性强。有利于工业化生产中，艾日布林及含艾日布林的制剂中有关物质的检测，能更好的控制产品质量，保证药品安全性。

附图说明

图1.艾日布林杂质限度线性关系图

图2-1.实施例一艾日布林对照品的液相色谱图

图2-2.艾日布林原料有关物质的液相色谱图

图3.实施例二甲磺酸艾日布林注射液有关物质液相色谱图

具体实施方式

下面将通过实施例对本发明作进一步的描述,但这些描述并不是对本发明内容的进一步的限定。

实施例一 艾日布林有关物质的测定

1、色谱条件与系统适用性实验

1.1色谱条件的选择：

仪器：Agilent 1260，其最佳柱温35℃，流速1.0ml/min，检测波长254nm。液相色谱柱用Eclipse XDB-C18柱(150mm×4.6mm，5μm)，0.01mol/L NH₄OAc溶液(pH5.0)-乙腈或0.01mol/L NH₄OAc溶液(pH6.0)-甲醇为流动相组成，其最佳配比为：10:90(流动相组成顺序与体积比例顺序一致)。进样量20μl。

在该色谱条件下，艾日布林主峰保留时间适中，峰形较好。

1.2灵敏度测定

取艾日布林适量，用流动相配置成浓度为每1ml含0.2mg的溶液，再分别用流动相稀释成一系列不同浓度的溶液，分别进样10μl，使之产生主峰为基线噪音三倍的信号。经试验，最小检知量为0.2ng(S/N≥3)，若以有关物质检查时的浓度0.2mg/ml计算，其检出限度为 0.1％。结果证明，该方法灵敏度高，可以充分满足有关物质检查测定的要求。

1.3溶液稳定性

取同一份供试品品溶液，分别于0、2、4、8、10、12小时分别进样测定，其主峰峰面积及有关物质测定结果在12小时内基本稳定。

以上实验结果表明，此方法简便灵敏，重现性好，可较好地对样品中艾日布林的质量进行检测。

1.4供试品溶液的配置；

取艾日布林原料适量，加流动相配置成0.2mg/ml的溶液，作为供试品溶液。

1.5对照品溶液的制备：

量取上述1.4供试品溶液适量，加流动相稀释成每1ml中约含2μg的溶液，作为对照溶液。该对照溶液浓度范围在：1～20μg/ml内时，峰面积与浓度呈很好的线性关系，线性相关系数为0.9998。见附图1

2、艾日布林原料有关物质的检测：

取供试品溶液10ul，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰高约为满量程的10％，再取供试品溶液10ul注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液色谱图中如有杂质峰，量取各杂质峰面积的和，不得大于对照溶液中主峰的峰面积。见附图2

实施例二：甲磺酸艾日布林注射液有关物质的测定

取供试品，精密量取适量(约相当于艾日布林2mg)，加流动相配置成每1ml中含0.2mg 的溶液，滤过，取稀释液滤液作为供试品溶液。精密量取适量，加流动相稀释成每1ml中约含2μg的溶液，作为对照溶液。在下列选的的色谱条件下：

紫外检测器(Agilent 1260)检测波长254nm，Eclipse XDB-C18柱(150mm×4.6mm，5 μm)，0.01mol/L NH₄OAc溶液(pH6.0)-乙腈组成，其最佳配比为：10:90。色谱柱柱温30℃，流速1.0ml/min。进样量20μl。理论塔板上按艾日布林峰计算不低于3000。

测定结果如下表所示：

批号	第一批	第二批	第三批
				有关物质(％)	0.11	0.15	0.16