阅读说明：本技术 一种检测尼泊金十二酯的方法 (Method for detecting dodecyl paraben ) 是由 杨立彬 沈承琪 刘伟国 于 2019-10-17 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种检测尼泊金十二酯的方法,采用高效液相色谱法检测尼泊金十二酯或含有尼泊金十二酯的物质的含量,包括依次进行的以下步骤：1)配制标准液；2)检测标准液；3)绘制标准曲线；4)测定样品含量。本发明采用高效液相色谱仪检测尼泊金十二酯,采用外标法定量分析,从而确定样品中尼泊金十二酯的含量,精密度高、准确度高、重复性好,能够实现对样品的直接检测,大大减少了分析时间,简单易行、方便可靠,减少了浓缩提取等不必要的复杂操作。同时,本发明采用的色谱条件对样品的分离度,峰形,对称度等方面的影响较小,尼泊金十二酯样品均能实现良好的分离。(The invention discloses a method for detecting dodecyl paraben, which adopts high performance liquid chromatography to detect the content of dodecyl paraben or substances containing the dodecyl paraben and comprises the following steps of: 1) preparing a standard solution; 2) detecting the standard solution; 3) drawing a standard curve; 4) and (5) measuring the content of the sample. The method adopts a high performance liquid chromatograph to detect the dodecyl paraben, adopts an external standard method to carry out quantitative analysis, thereby determining the content of the dodecyl paraben in the sample, has high precision, high accuracy and good repeatability, can realize direct detection of the sample, greatly reduces the analysis time, is simple, easy, convenient and reliable, and reduces unnecessary complex operations such as concentration and extraction. Meanwhile, the chromatographic conditions adopted by the method have small influence on the aspects of the separation degree, the peak shape, the symmetry degree and the like of the sample, and the dodecyl paraben can be well separated.)

一种检测尼泊金十二酯的方法

技术领域

本发明属于分析技术领域，具体地说涉及一种检测尼泊金十二酯的方法。

背景技术

尼泊金酯是一种有机化学防霉防腐剂，通过化学方法合成，也是国际上采用的安全、高效的防腐剂。尼泊金酯（对羟基苯甲酸酯，分子式p-HOC₆H₄CO₂R）早在上个世纪20年代初期，其抗菌活性就得到了报道；1923年尼泊金酯类被建议作为食品和药品的防腐剂；1932年尼泊金酯正式被批准应用于食品中，因此尼泊金酯作为防腐剂的应用已经有八十多年的历史。1984年，尼泊金酯存在于13200多种化妆品的配方中，同时还应用于药品和化妆品的防腐。它是最早批准的合成防腐剂。

尼泊金酯是国际上公认的广谱性高效防腐剂，尼泊金乙酯、丙酯，也是世界上用量较大的防腐剂。美国、欧洲、日本、加拿大、韩国、俄罗斯等发达国家和地区都允许尼泊金酯和尼泊金酯钠在食品工业中应用。尼泊金酯是一类低毒高效防腐剂，已被广泛用于食品、饮料、化妆品、医药、饲料等许多方面，仅在化妆品行业全国每年的需求量就达50t以上。同其它几种传统上经常应用的防腐剂相比，尼泊金酯类具有以下几点优势：第一，抑菌效果好，抑菌谱广，因而添加量小，且应用范围广；第二，应用pH范围大，有些防腐剂只有在酸性条件下才有明显的抑菌作用，而尼泊金酯类在pH 4~8范围内均有很好的抑菌效果；第三，毒副作用小。研究表明，尼泊金酯类的抑菌能力随着酯基碳原子数的增加而增大，毒副作用则减小。

现在，国内生产和应用的尼泊金酯类产品都是一些低碳链酯，如尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯和尼泊金丁酯，对长链尼泊金酯的研究较少，特别是R基上碳原子数目大于12以上的尼泊金酯。已有一些研究小组开始了长链尼泊金酯类的研究工作，并取得了一定的进展，重点集中在尼泊金庚酯、尼泊金辛酯上，但都还没有实现产业化。有报道指出，尼泊金酯类中C11、C12醇的酯有非常好的抑菌活性，作为食品防腐剂、饲料添加剂都有非常好的开发前景。

据文献报道，尼泊金十二酯类物质的检测方法主要有化学分析法、电位滴定法、液相色谱串联质谱法等。其中化学分析法、电位滴定法虽然比较简单，但耗时较长，人为误差较大，而液相串联质谱仪价格昂贵，一般实验室很少配备。另外有文献报道尼泊金十二酯的检测方法有浓缩、提取样品后再利用高效液相色谱仪进行检测，该方法比较费时，价格较贵。

因此，研究一种简单易操作的尼泊金十二酯检测方法是目前急需解决的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测尼泊金十二酯的方法，其解决了尼泊金十二酯检测方法操作复杂价格昂贵的问题。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种检测尼泊金十二酯的方法，采用高效液相色谱法检测尼泊金十二酯或含有尼泊金十二酯的物质的含量，包括依次进行的以下步骤：

1）配制标准液：取尼泊金十二酯标准品，按照不同浓度配制多份尼泊金十二酯标准液，备用；

2）检测标准液：将步骤1）中配制好的所有所述尼泊金十二酯标准液分别进样于高效液相色谱仪检测，得到各份所述尼泊金十二酯标准液对应的色谱图；

3）绘制标准曲线：以各份尼泊金十二酯标准液的浓度为横坐标，以对应的色谱图中尼泊金十二酯色谱峰的峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得到标准曲线回归方程；

4）测定样品含量：取含有尼泊金十二酯的样品，配制样品溶液，进样于高效液相色谱仪检测所述样品溶液，得到样品色谱图，将所述样品色谱图中的尼泊金十二酯色谱峰的峰面积代入步骤3）中所述标准曲线回归方程中，求得样品中的尼泊金十二酯的含量。

本发明技术方案的进一步改进在于：高效液相色谱仪采用C18反向色谱柱，以体积百分比为10%-100%的甲醇水溶液为流动相。

本发明技术方案的进一步改进在于：所述流动相的流动速度为0.6-1.0mL/min。

本发明技术方案的进一步改进在于：所述C18反向色谱柱的柱温为20-45℃。

本发明技术方案的进一步改进在于：步骤2）的进样于高效液相色谱仪的尼泊金十二酯标准液和步骤4）的进样于高效液相色谱仪的样品溶液均使用可变波长紫外吸收检测器进行检测。

本发明技术方案的进一步改进在于：可变波长紫外吸收检测器的检测波长为245-265nm。

本发明技术方案的进一步改进在于：所述尼泊金十二酯标准液和所述样品溶液的进样量为2-20μL。

本发明技术方案的进一步改进在于：步骤1）中配制所述尼泊金十二酯标准液所用的溶剂为甲醇。

本发明技术方案的进一步改进在于：步骤4）中配制所述样品溶液为称取所述样品置容量瓶中，加入甲醇，超声处理溶解所述样品中的尼泊金十二酯，甲醇稀释定容。

本发明技术方案的进一步改进在于：所述样品溶液用0.22μm的滤膜过滤后再进样于高效液相色谱仪。

本发明与现有技术相比，所取得的进步在于：本发明采用高效液相色谱仪检测尼泊金十二酯，采用外标法定量分析，从而确定样品中尼泊金十二酯的含量，精密度高、准确度高、重复性好，能够实现对样品的直接检测，大大减少了分析时间，简单易行、方便可靠，减少了浓缩提取等不必要的复杂操作。

进一步的，本发明采用C18反向色谱柱和甲醇水溶液流动相分离效果更好。

进一步的，本发明采用流动相的流速为0.6-1.0 mL/min，在这样的流速范围内，在其他条件完全相同的条件下进样，对样品的分离度，峰形，对称度等方面的影响较小，分离时间较短，尼泊金十二酯样品均能实现良好的分离。

进一步的，本发明采用C18反向色谱柱的柱温为20-45℃，在这样的温度范围内，在其他条件完全相同的条件下进样，对样品的分离度，峰形，对称度等方面的影响较小，尼泊金十二酯样品均能实现良好的分离。

同时，本发明采用可变波长紫外吸收检测器对尼泊金十二酯标准液样品溶液进行检测，在检测波长为245-265nm范围内，在其他条件完全相同的条件下进样，对样品的分离度，峰形，对称度等方面的影响较小，尼泊金十二酯样品均能实现良好的分离。

附图说明

图1是尼泊金十二酯标准溶液（1000ppm）色谱图；

图2是实施例1中样品溶液色谱图；

图3是实施例1中的标准曲线回归方程图；

图4是实施例2中样品溶液色谱图；

图5是实施例2中的标准曲线回归方程图；

图6是实施例3中样品溶液色谱图；

图7是实施例3中的标准曲线回归方程图；

图8是实施例4中饲料样品溶液色谱图；

图9是实施例4中的标准曲线回归方程图；

图10是实施例5中样品溶液色谱图；

图11是实施例5中的标准曲线回归方程图；

图12是实施例6中饲料样品溶液色谱图；

图13是实施例6中的标准曲线回归方程图；

图14是实施例7中样品溶液色谱图；

图15是实施例7中的标准曲线回归方程图；

图16是实施例8中饲料样品溶液色谱图；

图17是实施例8中的标准曲线回归方程图。

具体实施方式

下面具体实施例对本发明做进一步详细说明，应当理解所描述的实施例仅用于解释本发明，并不限定本发明。

实施例1 一种检测尼泊金十二酯的方法

本实施例为一种检测尼泊金十二酯的方法，包括依次进行的以下步骤：

1）配制尼泊金十二酯标准液：

①配制标准储备液：精密称取1.0204g尼泊金十二酯标准品（纯度98%）于100 ml容量瓶中，加入60mL甲醇（分析纯）超声溶解，然后用甲醇（分析纯）定容至刻度，配成1%（10000ppm）的尼泊金十二酯标准储备液；

②配制尼泊金十二酯标准液：分别精确移取0.5 mL、1.0 ml、2.0 ml、5.0 ml、10.0 ml和20.0 mL的上述尼泊金十二酯储备液置于100 ml容量瓶中，分别用甲醇（分析纯）定容至刻度，分别得到尼泊金十二酯标准液A、B、C、D、E、F（其中尼泊金十二酯浓度分别为50 ppm、100 ppm、200 ppm、500 ppm、1000 ppm和2000 ppm），备用。

2）检测标准液：

将尼泊金十二酯标准液A、B、C、D、E、F摇匀后，分别利用安捷伦高效液相色谱仪1260进样分析，同时得到各份尼泊金十二酯标准液对应的色谱图，并记录峰面积，尼泊金十二酯标准液A的液相色谱图参见图1。其中，色谱条件为：色谱柱为Agilent Pursult 5 C18反向色谱柱，柱长为250 mm，柱内径为4.6 μm；检测器为可变波长紫外吸收检测器，检测波长为257nm；柱温为30℃；流动相为无水甲醇溶液（即100%甲醇溶液）；流速为1.0 mL/min；进样量10μL。

3）绘制标准曲线：

以尼泊金十二酯标准液A、B、C、D、E、F的浓度为横坐标，以对应的色谱图中尼泊金十二酯色谱峰的峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得到标准曲线回归方程：y=29.0865x+20.9806，R²=1，式中y为尼泊金十二酯的峰面积，x为尼泊金十二酯的浓度， R为线性相关系数，参见图3。

4）测定样品含量：

①配制样品溶液：

选取一批新制备的待测定含量的尼泊金十二酯作为样品，精密称取0.1008 g（W）尼泊金十二酯样品，用甲醇（分析纯）定容至100 ml（V₂）容量瓶得样品储备液。分别精密移取四份10 ml（V₃）样品储备液于50 ml（V₁）容量瓶中，分别用甲醇（分析纯）溶液定容得样品溶液H、I、J、K；

②检测样品溶液：

将样品溶液H、I、J、K摇匀后，分别利用安捷伦高效液相色谱仪1260进样分析，同时得到各份样品溶液对应的色谱图，并记录峰面积，样品溶液H的液相色谱图参见图2。其中，色谱条件与步骤2）相同，具体为：色谱柱为Agilent Pursult 5 C18反向色谱柱，柱长为250 mm，柱内径为4.6 μm；检测器为可变波长紫外吸收检测器，检测波长为257 nm；柱温为30℃；流动相为无水甲醇溶液（即100%甲醇溶液）；流速为1.0 mL/min；进样量10μL。

③计算样品中尼泊金十二酯的含量

得出尼泊金十二酯的含量的计算公式为：

式中：w为尼泊金十二酯占样品质量的分数，%；y为样品溶液测得的尼泊金十二酯峰面积；V₁为样品溶液定容体积，ml；V₂为样品储备液定容体积，ml；V₃为移取的样品储备液的体积，ml；W为尼泊金十二酯样品的质量，g；具体计算结果见下表：

表1 样品溶液尼泊金十二酯含量测定结果

由表1可知，该样品中尼泊金十二酯的质量百分比约为95.19%。

实施例2 一种检测尼泊金十二酯的方法

本实施例为一种检测尼泊金十二酯的方法，包括依次进行的以下步骤：

1）配制尼泊金十二酯标准液：

①配制标准储备液：精密称取1.0204g尼泊金十二酯标准品（纯度98%）于100 ml容量瓶中，加入60mL甲醇（分析纯）超声溶解，然后用甲醇（分析纯）定容至刻度，配成1%（10000ppm）的尼泊金十二酯标准储备液；

②配制尼泊金十二酯标准液：分别精确移取0.5 mL、1.0 ml、2.0 ml、5.0 ml、10.0 ml和20.0 mL的上述尼泊金十二酯储备液置于100 ml容量瓶中，分别用甲醇（分析纯）定容至刻度，分别得到尼泊金十二酯标准液A、B、C、D、E、F（其中尼泊金十二酯浓度分别为50 ppm、100 ppm、200 ppm、500 ppm、1000 ppm和2000 ppm），备用。

2）检测标准液：

将尼泊金十二酯标准液A、B、C、D、E、F摇匀后，分别利用安捷伦高效液相色谱仪1260进样分析，同时得到各份尼泊金十二酯标准液对应的色谱图，并记录峰面积。其中，色谱条件为：色谱柱为Agilent Pursult 5 C18反向色谱柱，柱长为250 mm，柱内径为4.6 μm；检测器为可变波长紫外吸收检测器，检测波长为257 nm；柱温为30℃；流动相为无水甲醇溶液（即100%甲醇溶液）；流速为1.0 mL/min；进样量10μL。

3）绘制标准曲线：

以尼泊金十二酯标准液A、B、C、D、E、F的浓度为横坐标，以对应的色谱图中尼泊金十二酯色谱峰的峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得到标准曲线回归方程：y=29.1068x-4.9274，R²=1，式中y为尼泊金十二酯的峰面积，x为尼泊金十二酯的浓度，R为线性相关系数，参见图5。

4）测定样品含量：

①配制样品溶液：

选取一批新制备的待测定含量的尼泊金十二酯作为样品，精密称取0.1011 g（W）尼泊金十二酯样品，用甲醇（分析纯）定容至100 ml（V₂）容量瓶得样品储备液。分别精密移取四份10 ml（V₃）样品储备液于50 ml（V₁）容量瓶中，分别用甲醇（分析纯）溶液定容得样品溶液H、I、J、K；

②检测样品溶液：

将样品溶液H、I、J、K摇匀后，分别利用安捷伦高效液相色谱仪1260进样分析，同时得到各份样品溶液对应的色谱图，并记录峰面积，样品溶液H的液相色谱图参见图4。其中，色谱条件与步骤2）相同，具体为：色谱柱为Agilent Pursult 5 C18反向色谱柱，柱长为250 mm，柱内径为4.6 μm；检测器为可变波长紫外吸收检测器，检测波长为257 nm；柱温为30℃；流动相为无水甲醇溶液（即100%甲醇溶液）；流速为1.0 mL/min；进样量10μL。

③计算样品中尼泊金十二酯的含量

得出尼泊金十二酯的含量的计算公式为：

式中：w为尼泊金十二酯占样品质量的分数，%；y为样品溶液测得的尼泊金十二酯峰面积；V₁为样品溶液定容体积，ml；V₂为样品储备液定容体积，ml；V₃为移取的样品储备液的体积，ml；W为尼泊金十二酯样品的质量，g；具体计算结果见下表：

表2 样品溶液尼泊金十二酯含量测定结果

由表2可知，该样品中尼泊金十二酯的质量百分比约为93.37%。

实施例3 一种检测尼泊金十二酯的方法

本实施例为一种检测尼泊金十二酯的方法，包括依次进行的以下步骤：

1）配制尼泊金十二酯标准液：

①配制标准储备液：精密称取1.0204g尼泊金十二酯标准品（纯度98%）于100 ml容量瓶中，加入60mL甲醇（分析纯）超声溶解，然后用甲醇（分析纯）定容至刻度，配成1%（10000ppm）的尼泊金十二酯标准储备液；

②配制尼泊金十二酯标准液：分别精确移取0.5 mL、1.0 ml、2.0 ml、5.0 ml、10.0 ml和20.0 mL的上述尼泊金十二酯储备液置于100 ml容量瓶中，分别用甲醇（分析纯）定容至刻度，分别得到尼泊金十二酯标准液A、B、C、D、E、F（其中尼泊金十二酯浓度分别为50 ppm、100 ppm、200 ppm、500 ppm、1000 ppm和2000 ppm），备用。

2）检测标准液：

将尼泊金十二酯标准液A、B、C、D、E、F摇匀后，分别利用安捷伦高效液相色谱仪1260进样分析，同时得到各份尼泊金十二酯标准液对应的色谱图，并记录峰面积。其中，色谱条件为：色谱柱为Agilent Pursult 5 C18反向色谱柱，柱长为250 mm，柱内径为4.6 μm；检测器为可变波长紫外吸收检测器，检测波长为257 nm；柱温为30℃；流动相为无水甲醇溶液（即100%甲醇溶液）；流速为1.0 mL/min；进样量10μL。

3）绘制标准曲线：

以尼泊金十二酯标准液A、B、C、D、E、F的浓度为横坐标，以对应的色谱图中尼泊金十二酯色谱峰的峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得到标准曲线回归方程：y=28.6735x-37.3220，R²=1，式中y为尼泊金十二酯的峰面积，x为尼泊金十二酯的浓度，R为线性相关系数，参见图7。

4）测定样品含量：

①配制样品溶液：

选取一批新制备的待测定含量的尼泊金十二酯作为样品，精密称取0.1006 g（W）尼泊金十二酯样品，用甲醇（分析纯）定容至100 ml（V₂）容量瓶得样品储备液。分别精密移取四份10 ml（V₃）样品储备液于50 ml（V₁）容量瓶中，分别用甲醇（分析纯）溶液定容得样品溶液H、I、J、K；

②检测样品溶液：

将样品溶液H、I、J、K摇匀后，分别利用安捷伦高效液相色谱仪1260进样分析，同时得到各份样品溶液对应的色谱图，并记录峰面积，样品溶液H的液相色谱图参见图6。其中，色谱条件与步骤2）相同，具体为：色谱柱为Agilent Pursult 5 C18反向色谱柱，柱长为250 mm，柱内径为4.6 μm；检测器为可变波长紫外吸收检测器，检测波长为257 nm；柱温为30℃；流动相为无水甲醇溶液（即100%甲醇溶液）；流速为1.0 mL/min；进样量10μL。

③计算样品中尼泊金十二酯的含量

得出尼泊金十二酯的含量的计算公式为：

式中：w为尼泊金十二酯占样品质量的分数，%；y为样品溶液测得的尼泊金十二酯峰面积；V₁为样品溶液定容体积，ml；V₂为样品储备液定容体积，ml；V₃为移取的样品储备液的体积，ml；W为尼泊金十二酯样品的质量，g；具体计算结果见下表：

表3 样品溶液尼泊金十二酯含量测定结果

由表3可知，该样品中尼泊金十二酯的质量百分比约为86.32%。

实施例4 一种检测尼泊金十二酯的方法

本实施例为一种检测尼泊金十二酯的方法，包括依次进行的以下步骤：

1）配制尼泊金十二酯标准液：

①配制标准储备液：精密称取1.0204g尼泊金十二酯标准品（纯度98%）于100 ml容量瓶中，加入60mL甲醇（分析纯）超声溶解，然后用甲醇（分析纯）定容至刻度，配成1%（10000ppm）的尼泊金十二酯标准储备液；

②配制尼泊金十二酯标准液：分别精确移取0.5 mL、1.0 ml、2.0 ml、5.0 ml、10.0 ml和20.0 mL的上述尼泊金十二酯储备液置于100 ml容量瓶中，分别用甲醇（分析纯）定容至刻度，分别得到尼泊金十二酯标准液A、B、C、D、E、F（其中尼泊金十二酯浓度分别为50 ppm、100 ppm、200 ppm、500 ppm、1000 ppm和2000 ppm），备用。

2）检测标准液：

将尼泊金十二酯标准液A、B、C、D、E、F摇匀后，分别利用安捷伦高效液相色谱仪1260进样分析，同时得到各份尼泊金十二酯标准液对应的色谱图，并记录峰面积。其中，色谱条件为：色谱柱为Agilent Pursult 5 C18反向色谱柱，柱长为250 mm，柱内径为4.6 μm；检测器为可变波长紫外吸收检测器，检测波长为257 nm；柱温为30℃；流动相为无水甲醇溶液（即100%甲醇溶液）；流速为1.0 mL/min；进样量10μL。

3）绘制标准曲线：

以尼泊金十二酯标准液A、B、C、D、E、F的浓度为横坐标，以对应的色谱图中尼泊金十二酯色谱峰的峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得到标准曲线回归方程：y=29.1069x-45.9164，R²=1，式中y为尼泊金十二酯的峰面积，x为尼泊金十二酯的浓度，R为线性相关系数，参见图9。

4）测定样品含量：

①配制样品溶液：

选取一批添加尼泊金十二酯的饲料作为样品，精密称取10.0014 g（W）饲料样品置于具塞锥形瓶中，加入100 ml（V₁）甲醇（分析纯）得样品溶液，经超声20 min后，取四份上清分别标记为样品溶液H、I、J、K；

②检测样品溶液：

将样品溶液H、I、J、K摇匀后，分别利用安捷伦高效液相色谱仪1260进样分析，同时得到各份样品溶液对应的色谱图，并记录峰面积，样品溶液H的液相色谱图参见图8。其中，色谱条件与步骤2）相同，具体为：色谱柱为Agilent Pursult 5 C18反向色谱柱，柱长为250 mm，柱内径为4.6 μm；检测器为可变波长紫外吸收检测器，检测波长为257 nm；柱温为30℃；流动相为无水甲醇溶液（即100%甲醇溶液）；流速为1.0 mL/min；进样量10μL。

③计算样品中尼泊金十二酯的含量

得出尼泊金十二酯的含量的计算公式为：

式中：w为尼泊金十二酯的含量，ppm；y为样品溶液测得的尼泊金十二酯峰面积；V₁为样品溶液定容体积，ml；W为尼泊金十二酯样品的质量，g；具体计算结果见下表：

表4 样品溶液尼泊金十二酯含量测定结果

由表4可知，该样品中尼泊金十二酯的含量约为962.55ppm。

实施例5-8 一种检测尼泊金十二酯的方法

实施例5-8分别为一种检测尼泊金十二酯的方法，检测方法与实施例1-4相同，不同之处在于色谱条件不同，具体详见表6：

表5 不同色谱条件一览表

其中流动相甲醇溶液是甲醇水溶液，即甲醇占水溶液的体积百分比（80%甲醇溶液为80%的甲醇和20%的水）。

由表5可知，实施例5所得线性回归方程为：y=28.5539x-45.0401，R²=1，参见图11；取与实施例1相同的样品溶液检测，所得样品溶液之一的液相色谱图（样品溶液H的液相色谱图）参见图10，由峰面积计算得出尼泊金十二酯的质量百分比约为91.73%；

实施例6所得线性回归方程为：y=6.7237x-10.6006，R²=1，参见图13；取与实施例4相同的样品溶液检测，所得样品溶液之一的液相色谱图（样品溶液H的液相色谱图）参见图12，由峰面积计算得出尼泊金十二酯的含量约为944.44ppm；

实施例7所得线性回归方程为：y=45.5211x+2285.5693，R²=0.9944，参见图15；取与实施例1相同的样品溶液检测，所得样品溶液之一的液相色谱图（样品溶液H的液相色谱图）参见图14，由峰面积计算得出尼泊金十二酯的质量百分比约为93.41%；

实施例8所得线性回归方程为：y=44.1786x-287.1630，R²=0.9999，参见图17；取与实施例4相同的样品溶液检测，所得样品溶液之一的液相色谱图（样品溶液H的液相色谱图）参见图16，由峰面积计算得出尼泊金十二酯的含量约为951.97ppm。

实施例9 方法性能试验

1）精密度试验

取实施例1中尼泊金十二酯标准液A为考察对象，摇匀后利用高效液相色谱仪分别进样6次，并记录峰面积，计算标准液浓度值，比较峰面积得到其相对标准偏差值RSD， 结果见下表：

表6 精密度试验结果（n=6）

由表6可知，相对标准偏差值RSD为0.18%，检测方法精密度高。

2）准确度试验

取实施例2中尼泊金十二酯标准液B为考察对象，标准液于4℃放置，分别在0h、6h、12h、24h、48h和72h时进样，并记录峰面积，比较峰面积得到其相对标准偏差值RSD，结果见下表。

表7 准确度试验结果（n=6）

由表7可知，相对标准偏差值RSD为0.51%，标准液的稳定性良好，检测方法的准确度高。

3）重复性试验

取实施例3中尼泊金十二酯标准液C为考察对象，由不同试验人员于不同时间在同一型号仪器上进样6次，并记录峰面积，比较峰面积得到相对标准偏差值RSD，结果见下表。

表8 重复性试验结果

由表8可知，相对标准偏差值RSD为0.93%，检测方法的重复性良好。