食管狭窄抑制剂
阅读说明：本技术 食管狭窄抑制剂 (Esophageal stenosis inhibitor ) 是由 米山博之 于 2019-05-08 设计创作，主要内容包括：本发明涉及将CHST15siRNA作为有效成分的新型食管狭窄抑制剂。(The present invention relates to a novel esophageal stenosis inhibitor containing CHST15siRNA as an active ingredient.)
技术领域
本发明涉及将CHST15 siRNA作为有效成分的新型食管狭窄抑制剂。
背景技术
针对食管癌、巴雷特食管(Barrett's Esophagus)的低侵袭且能够维持食管功能保持的食管癌内窥镜治疗近年来被确定为针对浅表性食管癌或巴雷特食管的根治治疗方法(文献1-5)。尤其是内窥镜性粘膜下层剥离术(endoscopic submucosal dissection：ESD)技术的进步显著，已被确立为在大范围的病变中也能够成为根治疗法的新的治疗方法。但是，由于ESD后高概率地发生瘢痕狭窄，因此患者不仅因狭窄而导致吞咽障碍，而且还存在因狭窄而导致的外科手术的情况，尽管好不容易根绝了癌症，但之后的QOL受到显著影响。因此，ESD后的狭窄抑制(预防、治疗)随着内窥镜治疗技术的进步，反而成为新产生的临床课题(文献1-6)。越来越多的证据(文献2、4)表明，关于狭窄发病，已清楚了依赖于食管粘膜切除范围，尤其是切除范围是3/4周即75％以上还是其以下是极关键的点。即，由于在3/4周以上的范围内实施ESD时必发术后的食管狭窄，因此也逐渐明确，需要对3/4周以上/以下分别进行临床处置。
作为食管ESD后的狭窄抑制策略，考虑针对胃酸反流的食管粘膜的保护、抗炎、抗纤维化、促进粘膜再生、机械扩张，虽然尝试了质子泵抑制剂(食管粘膜保护)、甾体制剂(抗炎)、细胞片(促进再生)、内窥镜性球囊扩张术(机械扩张)、食管支架(机械扩张)等，但病情控制仍然很难(文献5、6)。现状是尽管伴有痛苦和食管破裂的危险但还是不得不实施球囊扩张术，由于高概率地发生再狭窄、再再狭窄，因此多数情况下需要重复进行扩张术，数个月内都是难治性的，QOL受到显著影响。
因此，近年来正在逐渐进行甾体的局注(文献6、7)。其是在ESD施行之后立即在内窥镜下向ESD后溃疡的部位注入甾体溶液的方法，被认为与球囊扩张相比安全性较高。然而，据报告甾体不仅有包括脓肿形成在内的感染风险，而且通过局部给药还诱发延迟性的食管穿孔(文献2-6、8)。由于损伤肌层是其原因，因此要求在ESD后避开肌层慎重地进行给药，但在向伴随大范围ESD的巨大的人工溃疡部位注射时，难以在解剖学上避开肌层进行给药，始终伴有穿孔风险。此外可确定的是，虽然有报告说对3/4周以下的较小范围的ESD后的狭窄有一定效果，但已清楚了对3/4周以上的大范围的ESD后的狭窄完全没有效果(文献2-6)。因此，关于3/4周以上的ESD后的狭窄，现状是完全没有包括甾体在内的药物疗法，无可奈何不得不进行球囊扩张、支架等机械扩张。另一方面，不仅在食管癌，尤其在近年来逐渐增加的巴雷特食管中，在3/4周以上的大范围或整周性地呈现病变的病例较多，因此要求3/4周以上的大范围的内窥镜治疗、ESD治疗。
另外，ESD后的食管狭窄与癌性狭窄完全不同，其是根治癌后的良性狭窄，该事实在实际临床上是极其重要的。对于用于暂且防止由因无法完全切除而增大的癌引起的进行性的食管狭窄的支架、或诱发因肌层破坏而引起的穿孔、纵隔脓肿的医源性风险而言，必须极力避免的是良性狭窄。即，在狭窄抑制效果的同时，在实际临床上要求确保高安全性等壁垒极高的治疗。因此，如何安全地抑制如上所述的大范围ESD后必发的食管狭窄，成为包括新型药剂开发在内的紧迫的临床课题。
作为糖硫酸转移酶的CHST15(Carbohydrate sulfotransferase 15，碳水化合物磺基转移酶15)是向硫酸软骨素A(CS-A)的GalNAc(4SO4)残基的6位转移硫酸基、合成高度硫酸化的硫酸软骨素E(CS-E)的II型的膜贯通型高尔基蛋白(文献9、10)。已知该蛋白在正常的人组织中几乎没有表达，但在炎症、纤维化、或癌中其表达增强。据报告，CS-E促进胶原纤维(纤维蛋白)形成(文献11)，并被认为CS-E参与局部纤维化病变的维持和增强。此外，据报告高度硫酸化的CS与下述分子结合(文献12、13)：与成纤维细胞粘附相关的分子CD44、与成纤维细胞游走相关的趋化因子MCP-1、SDF-1、与成纤维细胞增殖相关的PDGF、TGF-β，启示通过病变局部中的这些分子的浓缩，也与成纤维细胞附着和活化有关。
据报告对于食管、在猪的半周性(50％)的ESD模型中，ESD后的狭窄食管组织中CHST15的mRNA增加，当利用CHST15 siRNA抑制mRNA的表达时，纤维化得到抑制(文献14)，由该报告启示，CHST15 siRNA与甾体同样地具有3/4周以下的ESD后的狭窄抑制效果的可能性。但是，如非专利文献14中也明确记载为limitation的那样，不清楚是否能够抑制3/4周以上进而整周性ESD后的狭窄。与甾体对3/4周以上的狭窄无效的情况同样地，对3/4周以上或整周性的狭窄显示抑制效果的壁垒明显高，因此难以预测。另外，在非专利文献14中，在同一个体中制作2处ESD，向1处给药CHST15 siRNA，向另1处给药阴性对照siRNA，阴性对照siRNA给药部位呈现的狭小化病变与对临床症状产生的影响混合存在，因此完全不清楚CHST15 siRNA对临床症状(伴随吞咽障碍的体重减少等)会带来怎样的影响。
现有技术文献
非专利文献
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3)Sami SS,Haboubi N,Ang Y et al.UK guidelines on esophagealdilatation in clinical practice.Gut 67：1000-1023,2018.
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发明内容
本发明所要解决的课题
本发明的课题在于提供一种针对良性食管狭窄的安全的新型狭窄抑制剂。
用于解决课题的手段
本发明者们通过使用整周性(100％)ESD模型研究CHST15 siRNA的局部给药的效果，发现具有通过现有技术治疗无法预测的狭窄抑制效果。另外，还弄清楚了其效果不仅基于CHST15 siRNA的抗纤维化效果，而且也基于成熟上皮的出现和肌层的基本完美的保护这样的性质完全不同的效果。判明了其是对显著困难的整周性ESD呈现狭窄抑制效果的药剂，且是没有伴随肌层破坏的穿孔、纵隔脓肿的风险，在实际临床的安全性方面呈现极其优异的效果的药剂，期待在伴随大范围内窥镜治疗的良性食管狭窄治疗中的应用。
本发明者们发现，通过对通过包括甾体在内的公知的药物疗法无法发挥有效效果的水平的猪食管整周性(100％)ESD后的食管狭窄单独地给药CHST15 siRNA，可得到显著的狭窄抑制效果。此外，本发明人还发现其效果伴随着肌层保护作用，并发现能够避免公知的伴随甾体制剂或机械扩张的肌层破坏的风险。实际验证了对于以往除了机械扩张以外没有对症方法的整周性ESD后的良性食管狭窄，CHST15 siRNA同时具有较高的安全性和显著的狭窄抑制效果。
更具体而言，本发明提供以下的〔1〕～〔8〕。
〔1〕一种用于治疗或预防良性食管狭窄的药物组合物，其含有用于抑制CHST15基因表达的siRNA作为有效成分。
〔2〕根据〔1〕所述的药物组合物，其中，食管狭窄为选自失弛缓症导致的狭窄、消化性狭窄、舍茨伊食管环、内视镜治疗导致的狭窄、嗜酸性粒细胞性食管炎导致的狭窄、外科手术后狭窄、伴随放射线疗法的狭窄、腐蚀性狭窄及难治性狭窄中的狭窄。
〔3〕根据〔1〕或〔2〕所述的医药组合物，其中，食管狭窄发生在食管的3/4周以上。
〔4〕根据〔1〕～〔3〕中任一项所述的医药组合物，其特征在于，不伴随食管的肌层伤害。
〔5〕根据〔1〕～〔4〕中任一项所述的医药组合物，其中，不并用甾体。
〔6〕根据〔1〕～〔5〕中任一项所述的医药组合物，其中，不并用内窥镜性球囊扩张术或者减少了内窥镜性球囊扩张术的并用次数。
〔7〕根据〔1〕～〔6〕中任一项所述的医药组合物，其中，siRNA以100～10,000nM的量含有。
〔8〕根据〔1〕～〔7〕中任一项所述的医药组合物，其中，以单次给药或间隔1周的方式给药。
本发明还涉及以下内容。
〔A-1〕一种治疗食管狭窄的方法，其包含给药用于抑制CHST15基因表达的siRNA的工序。
〔B-1〕一种用于抑制CHST15基因表达的siRNA，其用于食管狭窄的治疗。
〔C-1〕用于抑制CHST15基因表达的siRNA在制造食管狭窄抑制剂中的用途。
〔D-1〕一种食管狭窄抑制剂的制造方法，其包含使用用于抑制CHST15基因表达的siRNA的工序。
发明效果
在食管的3/4周性以上及尤其是整周性ESD后呈现极强的狭窄，因此迄今为止还未知可抑制其的药剂，但令人吃惊的是，通过局部给药CHST15siRNA可得到狭窄抑制效果，该情况是由本发明首次明确的。另外，CHST15 siRNA迄今为止仅已知有限定于粘膜下层的抗纤维化作用，其具有本次与纤维化不同的肌层(固有肌层)保护的用途的情况也是由本发明首次明确的。这样，提供了对通过以往的药物疗法无法治疗的食管狭窄也有效且安全的新型治疗法。
附图说明
图1是表示猪整周性ESD模型中的食管狭窄的食管摘除标本整体的目视图像和马松染色图像。在刚实施ESD后，局部注射生理盐水(上行)、甾体制剂-康宁克通(Kenacort)(中行)、CHST15 siRNA(下行)，然后在第14天(Day 14)处死。
图2与图1上行同样，是表示生理盐水对整周性ESD后食管狭窄的影响的马松染色图像的放大图。
图3与图1中行同样，是表示甾体制剂(Kenacort)对整周性ESD后食管狭窄的影响的马松染色图像的放大图。
图4与图1下行同样，是表示CHST15 siRNA对整周性ESD后食管狭窄的影响的马松染色图像的放大图。
具体实施方式
以下，对本发明详细地进行说明。
本发明人发现，通过抑制CHST15(Carbohydrate sulfotransferase 15，碳水化合物磺基转移酶15)基因表达，能够对食管整周性ESD后的食管狭窄发挥抑制效果。更详细而言，本发明人发现，通过RNAi(RNA interferance：RNA干扰)效果来抑制CHST15基因表达，能够抑制食管狭窄。此外，本发明人还发现，即使对于通过现有使用的甾体制剂未见显著的治疗效果的水平的整周性ESD后的食管狭窄，通过用于抑制CHST15基因表达的siRNA，狭窄也得到显著抑制，并且通过肌层保护作用可安全地发挥效果。
本发明的CHST15基因没有特别限制，通常为动物来源，更优选为哺乳动物来源，最优选为人来源。另外，本发明的CHST15作为别称也被称为GalNAc4S-6ST(N-acetylgalactosamine 4-sulfate 6-0 sulfotransferase，N-乙酰半乳糖胺4-硫酸酯6-0磺基转移酶)。
本发明的CHST15(GalNAc4S-6ST)的序列例如可以基于登录号NM_015892来获得。作为一例，将本发明的CHST15基因的碱基序列记载于序列号3，将由该基因编码的氨基酸序列记载于序列号4。由除上述以外的氨基酸序列构成的蛋白，例如与序列号4中记载的序列具有高同源性(通常70％以上、优选80％以上、更优选90％以上、最优选95％以上)、且具有上述蛋白所具有的功能的蛋白也包括在本发明的CHST15蛋白中。上述蛋白是指例如由在序列号4中记载的氨基酸序列中添加、缺失、替换、插入有1个以上的氨基酸的氨基酸序列构成的蛋白，其中通常变化的氨基酸数为30个氨基酸以内，优选为10个氨基酸以内，更优选为5个氨基酸以内，最优选为3个氨基酸以内。
本发明中的上述基因中包括例如与由序列号3中记载的碱基序列构成的DNA对应的其他生物中的內源性基因(人的上述基因的同源物等)。另外，与由序列号3中记载的碱基序列构成的DNA对应的其他生物的內源性DNA通常分别与序列号3中记载的DNA具有高同源性。高同源性是指优选70％以上、进一步优选80％以上、更优选90％以上(例如95％以上、进一步96％、97％、98％或99％以上)的同源性。该同源性可通过mBLAST算法(Altschul etal.(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87:2264-8；Karlin and Altschul(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:5873-7)来确定。另外，认为该DNA在从生物体内分离的情况下，分别在严格条件下与序列号3中记载的DNA杂交。在此，作为“严格条件”，例如可举出“2×SSC、0.1％SDS、50℃”、“2×SSC、0.1％SDS、42℃”、“1×SSC、0.1％SDS、37℃”、作为更严格条件，可举出“2×SSC、0.1％SDS、65℃”、“0.5×SSC、0.1％SDS、42℃”和“0.2×SSC、0.1％SDS、65℃”的条件。
在本说明书中，“用于抑制CHST15基因表达的siRNA”也可以表达为“CHST15siRNA”，优选为序列号1(5’-ggagcagagc aagaugaaua caaucag-3’)和序列号2(5’-gauuguauuc aucuugcucu gcuccau-3’)中记载的RNA杂交而成的结构的siRNA。
本发明中的siRNA可以不必全部的核苷酸是核糖核苷酸(RNA)。即，在本发明中，构成siRNA的1个或多个核糖核苷酸如果作为分子本身具有抑制CHST15基因表达的功能，则可以是对应的脱氧核糖核苷酸。该“对应”是指虽然糖部分的结构不同，但为同一碱基种类(腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶(尿嘧啶))。例如，与具有腺嘌呤的核糖核苷酸对应的脱氧核糖核苷酸是指具有腺嘌呤的脱氧核糖核苷酸。另外，所述“多个”没有特别限制，优选是指2～5个左右的少数。
本领域技术人员可以使用市售的核酸合成仪适当地制作本发明的siRNA。另外，对于所期望的RNA的合成，可以利用一般的合成委托服务。
本发明的CHST15 siRNA单剂对良性食管狭窄具有抑制效果，由此本发明提供一种食管狭窄抑制剂(用于治疗或预防良性食管狭窄的药物组合物)，其含有CHST15 siRNA作为有效成分。或者，本发明提供一种治疗良性食管狭窄的方法，其包含给药CHST15 siRNA的工序；一种在良性食管狭窄的治疗中使用的CHST15 siRNA；CHST15 siRNA在制造食管狭窄抑制剂中的用途；以及一种食管狭窄抑制剂的制造方法，其包含使用CHST15 siRNA(与制剂化的和/或药学上或生理学上可容许的载体混合)的工序。
在本发明中成为治疗或预防的对象的食管狭窄只要是本发明的抗CHST15 siRNA可发挥治疗效果的良性食管狭窄即可，没有特别限定，其为选自失弛缓症导致的狭窄、消化性狭窄、舍茨伊食管环、内视镜治疗导致的狭窄、嗜酸性粒细胞性食管炎导致的狭窄、外科手术后狭窄、伴随放射线疗法的狭窄、腐蚀性狭窄及难治性狭窄中的狭窄，优选为3/4周以上的大范围食管ESD后的食管狭窄。另外，本发明中的“治疗”不必限定于具有完全的治疗效果的情况，也可以是具有部分效果的情况。
本发明的食管狭窄抑制剂或药物组合物可以与药学上或生理学上可容许的载体、赋形剂或稀释剂等混合，经口或非经口给药。作为经口剂，可以为颗粒剂、散剂、片剂、胶囊剂、溶剂、乳剂、或悬浮剂等剂型。作为非经口剂，可以选择注射剂、点滴剂、外用药剂、吸入剂(雾化器)或栓剂等剂型。对于注射剂，可以示出皮下注射剂、肌肉注射剂、腹腔内注射剂、头盖内给药注射剂、或者鼻腔内给药注射剂等。对于外用药剂，可以示出经鼻给药剂、或软膏剂等。以包含作为主成分的本发明的抗癌剂或药物组合物的方式制成上述剂型的制剂技术是公知的。
例如，经口给药用的片剂可以通过在本发明的食管狭窄抑制剂或药物组合物中加入赋形剂、崩解剂、粘合剂和润滑剂等进行混合、压缩整形来制造。对于赋形剂，通常使用乳糖、淀粉或甘露醇等。作为崩解剂，通常使用碳酸钙、羧甲基纤维素钙等。对于粘合剂，可使用阿拉伯胶、羧甲基纤维素或聚乙烯基吡咯烷酮。作为润滑剂，公知的有滑石、硬脂酸镁等。
包含本发明的食管狭窄抑制剂或药物组合物的片剂为了制成掩蔽剂、肠溶性制剂，可以实施公知的涂敷。对于涂敷剂，可以使用乙基纤维素、聚氧乙二醇等。
另外，注射剂可以通过将作为主成分的本发明的食管狭窄抑制剂或药物组合物与适当的分散剂一起溶解、溶解或分散于分散介质来得到。通过分散介质的选择，也可以制成水性溶剂和油性溶剂中的任一种剂型。制成水性溶剂时，将蒸馏水、生理盐水或林格氏液等作为分散介质。对于油性溶剂，将各种植物油或丙二醇等用于分散介质。此时，也可以根据需要添加对羟基苯甲酸酯等防腐剂。另外，在注射剂中还可以加入氯化钠、葡萄糖等公知的等渗剂。此外，还可以添加苯扎氯铵或盐酸普鲁卡因等止痛剂。
另外，通过将本发明的食管狭窄抑制剂或药物组合物制成固态、液态或半固态的组合物，还可以制成外用剂。关于固态或液态的组合物，通过制成与之前所述的组合物同样的组合物，还可以制成外用剂。半固态的组合物可以通过根据需要在适当的溶剂中加入增稠剂来制备。溶剂可以使用水、乙醇或聚乙二醇等。增稠剂通常使用膨润土、聚乙烯醇、丙烯酸、甲基丙烯酸或聚乙烯吡咯烷酮等。该组合物中可以加入苯扎氯铵等防腐剂。另外，也可以通过组合作为载体的可可脂等油性基材或纤维素衍生物等水性凝胶基材而制成栓剂。
在使用本发明的食管狭窄抑制剂或药物组合物作为基因治疗剂的情况下，除了通过注射直接给药本发明的食管狭窄抑制剂或药物组合物的方法以外，还可举出给药组装有核酸的载体的方法。作为上述载体，可举出腺病毒载体、腺相关病毒载体、疱疹病毒载体、痘苗病毒载体、逆转录病毒载体、慢病毒载体等，通过使用这些载体，可以高效地进行给药。
另外，也可以将本发明的食管狭窄抑制剂或药物组合物导入脂质体等磷脂囊泡，并给药该囊泡。将保持有siRNA的囊泡通过脂转染法导入规定的细胞。然后，将所得到的细胞例如全身给药到静脉内、动脉内等。
另外，本发明提供一种治疗或预防对象的食管狭窄的方法，其包含将本发明的食管狭窄抑制剂或药物组合物给药至个体(例如患者)或其食管组织的工序。成为本发明的治疗或预防方法的对象的个体只要是可发生食管狭窄的生物就没有特别限制，优选为人。对对象的给药例如可以通过经口给药、皮内给药、或者皮下给药、或静脉内注射等本领域技术人员公知的方法进行。可以进行全身给药、或向食管组织内的直接局部给药。另外，为了将本发明的siRNA导入目标组织或器官，也可以使用市售的基因导入试剂盒。
本发明的食管狭窄抑制剂或药物组合物在被认为安全的给药量的范围内，对包括人在内的哺乳动物对象给药必要量(有效量)。本发明的食管狭窄抑制剂或药物组合物的给药量可以考虑剂型的种类、给药方法、对象的年龄、体重、对象的症状等，并最终根据本领域技术人员(医师或兽医)的判断来适当确定。举出一例，虽然因年龄、性别、症状、给药途径、给药次数、剂型而不同，但例如本发明的CHST15 siRNA局部给药时的给药量1天1次时为100～10,000nM左右，单次给药或间隔1周～间隔1月(例如间隔1周、间隔2周或间隔1月)给药。
需要说明的是，本说明书中引用的全部的现有技术文献作为参照引入本说明书中。
实施例
以下，使用实施例更具体地对本发明进行说明。但是，本发明的技术范围并不限定于这些实施例。
其中，本实施例中使用的“CHST15 siRNA”是序列号1和2中记载的RNA杂交而成的结构的siRNA。
<实施例1>
关于食管整周性(100％)ESD模型的制作，使用实验用迷你猪。对于作为实验动物通用的小鼠、大鼠，由于解剖学上没有人那样的多层扁平上皮，生理上不会引起反流，因此难以反映与人食管疾病的重要病理状态相关的因素。另一方面，体重40kg左右的迷你猪的食管的全长为30cm左右，与人成人的食管长度约40cm相比并不逊色，并且与人同样地具有多层扁平上皮，可发生生理性反流，除此之外，还具有可进行使用了人的上消化道内窥镜组的ESD实验的优点。
迷你猪使用生理盐水给药组、甾体制剂(Kenacort)给药组、CHST15 siRNA(北海道System Science公司制，批号40481638)给药组这3组(n＝1/组)。将各组迷你猪在全身麻醉呼吸机管理下，经口插入上消化道内窥镜，在距门牙列15cm至25cm之间，使用双刀施行全长5cm的整周性(100％)ESD。对于刚实施ESD后的整周性人工溃疡，以从溃疡底向周围整体均等地覆盖的方式在合计20处，使用内窥镜用注射针注入共计2mL的给药溶液(生理盐水、甾体制剂、CHST15 siRNA、250nM溶液)。
在ESD后无处置的情况下，在2周以内发现食管狭窄，食物也变得不能通过，因此在这以后4周以内迷你猪死亡，由此将单次给药后的观察期间设定为2周，在2周后(第14天)处死全部组，通过肉眼所见、以及病理组织学分析(马松染色)，研究食管狭窄的程度。
结果：
生理盐水给药组：
<肉眼所见>
可见食管长度缩短和完全闭塞。是不可摄食的状态。
<病理所见>
虽然可见出现部分未成熟的再生上皮，但残留有由ESD导致的人工溃疡，可见比溃疡底更深的大范围的纤维化和肌层的破坏。
甾体制剂(Kenacort)给药组：
<肉眼所见>
食管长度缩短的程度与生理盐水给药组相比为轻度，但可见完全闭塞。是不可摄食的状态。
<病理所见>
虽然残留有由ESD导致的人工溃疡，但与生理盐水给药组相比，可见比较成熟的再生上皮引起的修复所见。但是，比溃疡底更深地全层性地可见大范围的纤维化，其程度比生理盐水给药组的强度更高。另外，可见伴随缺损的大范围的肌层的破坏，纤维化直至浆膜层。
CHST15 siRNA给药组：
<肉眼所见>
几乎未见食管长度缩短，虽然可见部分内腔的狭小化，但没有狭窄、闭塞，是能够摄食的状态。
<病理所见>
由ESD导致的人工溃疡基本被再生上皮覆盖，与甾体给药组相比，是有规则地构建有多层扁平上皮的更成熟的再生上皮。比溃疡底更深的地方不是病态纤维化，而是支撑上皮的大致生理水平的纤维。此外，完全未见肌层的障碍。
考察：
在甾体制剂给药组中，没有整周性ESD后的食管狭窄抑制效果，这被认为是与临床治疗试验相同的结果。与生理盐水给药组相比，虽然可见伴随再生上皮的溃疡底缩小的倾向，但呈现出肌层的大范围的伤害。这被认为是由甾体所具有的蛋白异化作用而引起的，启示其是临床中可见的迟发性穿孔的原因。
另一方面，在CHST15 siRNA给药组中可见的狭窄抑制效果是能够在将肌层保持为基本正常状态的情况下获得的效果。这强烈启示，在显示在保持食管的蠕动运动即吞咽功能基本正常的状态下狭窄得到抑制的同时，在实际临床上也能够极为安全地进行治疗。
对于实际临床中的ESD后食管狭窄，现状是重复实施球囊扩张，由于必须极力避免对肌层的损伤，因此认为应避免甾体的多次给药。另外，在食管癌中有复发，为了对该复发食管癌也可预先安全地实施ESD治疗，肌层的保护成为绝对条件。为了实施重复的内窥镜治疗，认为与甾体制剂相比，CHST15 siRNA的临床有用性也极高。
产业上的可利用性
本发明的CHST15 siRNA在利用了通过现有疗法完全没有效果的猪食管整周性(100％)ESD后的食管狭窄模型的试验中，显示出显著的狭窄抑制效果。另外，由于具有肌层保护效果，因此考虑可获得能够实现高安全性(没有如现有治疗那样的穿孔风险)、并且能够实现肌层的功能(吞咽功能)的维持、或者重复的内窥镜治疗这样的以往完全无法想象的临床现场的情形。
根据这些结果，显示了本发明的CHST15 siRNA作为新型食管狭窄抑制剂是有用的。
序 列 表
<110> TME治疗医学有限公司
<120> 食管狭窄抑制剂
<130> FP4429PCT
<160> 4
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> sirna
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ggagcagagc aagaugaaua caaucag 27
<210> 2
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA
<400> 2
gauuguauuc aucuugcucu gcuccau 27
<210> 3
<211> 4713
<212> DNA
<213> 人（Homo sapiens）
<220>
<221> CDS
<222> (514)..(2199)
<400> 3
ggaaatctgg cattttttaa agtttgcgcc ccacaaagag gaaatattcc aaaggtactc 60
aggatgtaaa aggggagatc ttcacagatg cctccgtgga tggcatggca atccatccat 120
caatgagaag accatgattt cttttaattt tctgtgtgtt tccacattcc ccagtgagaa 180
ttcttccacc tttttttgtg ccatgggaaa aacctgaagg gcaggcagag ctgctcccga 240
acttgtgacc ttctctgagg ttgcagcggc tcttgtagaa catgactctg ggacatcact 300
tccttttgtt ttctttcgga gctgaaccaa agaatgtgca ccctctttct ctagtgctgt 360
ggtgtctgct tatttttgta tttgtgcttt ccatccatct tctgtgatca caaggcattc 420
ttaaggtttt ctagcacgac ttgcggacat ccagactcgt ggggggccca cccatggctc 480
ggtaagccag cagcccaggg cactggcact acc atg agg cac tgc att aat tgc 534
Met Arg His Cys Ile Asn Cys
1 5
tgc ata cag ctg tta ccc gac ggc gca cac aag cag cag gtc aac tgc 582
Cys Ile Gln Leu Leu Pro Asp Gly Ala His Lys Gln Gln Val Asn Cys
10 15 20
caa ggg ggc ccc cat cac ggt cac cag gcg tgc ccc acg tgc aaa gga 630
Gln Gly Gly Pro His His Gly His Gln Ala Cys Pro Thr Cys Lys Gly
25 30 35
gaa aac aaa att ctg ttt cgt gtg gac agt aag cag atg aac ttg ctt 678
Glu Asn Lys Ile Leu Phe Arg Val Asp Ser Lys Gln Met Asn Leu Leu
40 45 50 55
gct gtt ctc gaa gtg agg act gaa ggg aac gaa aac tgg ggt ggg ttt 726
Ala Val Leu Glu Val Arg Thr Glu Gly Asn Glu Asn Trp Gly Gly Phe
60 65 70
ttg cgc ttc aaa aag ggg aag cga tgt agc ctc gtt ttt gga ctg ata 774
Leu Arg Phe Lys Lys Gly Lys Arg Cys Ser Leu Val Phe Gly Leu Ile
75 80 85
ata atg acc ttg gta atg gct tct tac atc ctt tct ggg gcc cac caa 822
Ile Met Thr Leu Val Met Ala Ser Tyr Ile Leu Ser Gly Ala His Gln
90 95 100
gag ctt ctg atc tca tca cct ttc cat tac gga ggc ttc ccc agc aac 870
Glu Leu Leu Ile Ser Ser Pro Phe His Tyr Gly Gly Phe Pro Ser Asn
105 110 115
ccc agc ttg atg gac agc gaa aac cca agt gac aca aag gag cat cac 918
Pro Ser Leu Met Asp Ser Glu Asn Pro Ser Asp Thr Lys Glu His His
120 125 130 135
cac caa tcc tct gta aat aat att tca tac atg aag gac tat cca agc 966
His Gln Ser Ser Val Asn Asn Ile Ser Tyr Met Lys Asp Tyr Pro Ser
140 145 150
att aaa tta att atc aac agc atc aca act agg att gag ttc acg acc 1014
Ile Lys Leu Ile Ile Asn Ser Ile Thr Thr Arg Ile Glu Phe Thr Thr
155 160 165
aga cag ctc cca gac tta gaa gac ctt aag aag cag gag ttg cat atg 1062
Arg Gln Leu Pro Asp Leu Glu Asp Leu Lys Lys Gln Glu Leu His Met
170 175 180
ttt tca gtc atc ccc aac aaa ttc ctt cca aac agt aag agc ccc tgt 1110
Phe Ser Val Ile Pro Asn Lys Phe Leu Pro Asn Ser Lys Ser Pro Cys
185 190 195
tgg tac gag gag ttc tcg ggg cag aac acc acc gac ccc tac ctc acc 1158
Trp Tyr Glu Glu Phe Ser Gly Gln Asn Thr Thr Asp Pro Tyr Leu Thr
200 205 210 215
aac tcc tac gtg ctc tac tcc aag cgc ttc cgc tcc acc ttc gac gcc 1206
Asn Ser Tyr Val Leu Tyr Ser Lys Arg Phe Arg Ser Thr Phe Asp Ala
220 225 230
ctg cgc aag gcc ttc tgg ggc cac ctg gcg cac gcg cac ggg aag cac 1254
Leu Arg Lys Ala Phe Trp Gly His Leu Ala His Ala His Gly Lys His
235 240 245
ttc cgc ctg cgc tgc ctg ccg cac ttc tac atc ata ggg cag ccc aag 1302
Phe Arg Leu Arg Cys Leu Pro His Phe Tyr Ile Ile Gly Gln Pro Lys
250 255 260
tgc ggg acc aca gac ctc tat gac cgc ctg cgg ctg cac cct gag gtc 1350
Cys Gly Thr Thr Asp Leu Tyr Asp Arg Leu Arg Leu His Pro Glu Val
265 270 275
aag ttc tcc gcc atc aag gag cca cac tgg tgg acc cgg aag cgc ttt 1398
Lys Phe Ser Ala Ile Lys Glu Pro His Trp Trp Thr Arg Lys Arg Phe
280 285 290 295
gga atc gtc cgc cta aga gat ggg ctg cga gac cgc tat ccc gtg gaa 1446
Gly Ile Val Arg Leu Arg Asp Gly Leu Arg Asp Arg Tyr Pro Val Glu
300 305 310
gat tat ctg gac ctc ttt gac ctg gcc gca cac cag atc cat caa gga 1494
Asp Tyr Leu Asp Leu Phe Asp Leu Ala Ala His Gln Ile His Gln Gly
315 320 325
ctg cag gcc agc tct gca aag gag cag agc aag atg aat aca atc att 1542
Leu Gln Ala Ser Ser Ala Lys Glu Gln Ser Lys Met Asn Thr Ile Ile
330 335 340
atc ggg gag gcc agt gcc tcc acg atg tgg gat aat aat gcc tgg acg 1590
Ile Gly Glu Ala Ser Ala Ser Thr Met Trp Asp Asn Asn Ala Trp Thr
345 350 355
ttc ttc tac gac aac agc acg gat ggc gag cca ccg ttt ctg acg cag 1638
Phe Phe Tyr Asp Asn Ser Thr Asp Gly Glu Pro Pro Phe Leu Thr Gln
360 365 370 375
gac ttc atc cac gcc ttt cag cca aat gcc aga ctg att gtc atg ctc 1686
Asp Phe Ile His Ala Phe Gln Pro Asn Ala Arg Leu Ile Val Met Leu
380 385 390
agg gac cct gtg gag agg ttg tac tca gac tat ctc tac ttt gca agt 1734
Arg Asp Pro Val Glu Arg Leu Tyr Ser Asp Tyr Leu Tyr Phe Ala Ser
395 400 405
tcg aat aaa tcc gcg gac gac ttc cat gag aaa gtg aca gaa gca ctg 1782
Ser Asn Lys Ser Ala Asp Asp Phe His Glu Lys Val Thr Glu Ala Leu
410 415 420
cag ctg ttt gaa aat tgc atg ctt gat tat tca ctg cgc gcc tgc gtc 1830
Gln Leu Phe Glu Asn Cys Met Leu Asp Tyr Ser Leu Arg Ala Cys Val
425 430 435
tac aac aac acc ctc aac aac gcc atg cct gtg agg ctc cag gtt ggg 1878
Tyr Asn Asn Thr Leu Asn Asn Ala Met Pro Val Arg Leu Gln Val Gly
440 445 450 455
ctc tat gct gtg tac ctt ctg gac tgg ctc agc gtt ttt gac aag caa 1926
Leu Tyr Ala Val Tyr Leu Leu Asp Trp Leu Ser Val Phe Asp Lys Gln
460 465 470
cag ttt ctc att ctt cgc ctg gaa gat cat gca tcc aac gtc aag tac 1974
Gln Phe Leu Ile Leu Arg Leu Glu Asp His Ala Ser Asn Val Lys Tyr
475 480 485
acc atg cac aag gtc ttc cag ttt ctg aac cta ggg ccc tta agt gag 2022
Thr Met His Lys Val Phe Gln Phe Leu Asn Leu Gly Pro Leu Ser Glu
490 495 500
aag cag gag gct ttg atg acc aag agc ccc gca tcc aat gca cgg cgt 2070
Lys Gln Glu Ala Leu Met Thr Lys Ser Pro Ala Ser Asn Ala Arg Arg
505 510 515
ccc gag gac cgg aac ctg ggg ccc atg tgg ccc atc aca cag aag att 2118
Pro Glu Asp Arg Asn Leu Gly Pro Met Trp Pro Ile Thr Gln Lys Ile
520 525 530 535
ctg cgg gat ttc tac agg ccc ttc aac gct agg ctg gcg cag gtc ctc 2166
Leu Arg Asp Phe Tyr Arg Pro Phe Asn Ala Arg Leu Ala Gln Val Leu
540 545 550
gcg gat gag gcg ttt gcg tgg aag acg acg tga gagctgaatt gttgctgcac 2219
Ala Asp Glu Ala Phe Ala Trp Lys Thr Thr
555 560
gtgctgggcc cgccaatgcc gtcatcatca ggattttaca aatctctttg cggggaactg 2279
tttcactcat ggtatggaaa accccaggac tctgccactc taggcacaca tgaattataa 2339
ccattttgga atttccttcg tgatgttcga gagctcagca atggacccct cacagagctc 2399
ctctatccga ggccattgga gaccccagtt tctcaagaat tcagctctgc tctgagcgtc 2459
ctggagcttg gggatgcagc cagctggcct gcactgggtg tggagagaac acctagggaa 2519
ggcagcctgg ccctgcccgc ctccgccttc tggagagcct ctgggttctg agtcagcaag 2579
ccagaggtca tgccacaggc ctggctggaa cttacacttc acgttccctt tttttccccc 2639
tagagatggg gtctcgccgt gttgcacaga ctgtctgtat tcaatggcta tcttcacagg 2699
tgtgatcata ccacattcac ttctgaaaca ctcttgttgc gatcgctaac ctcactggga 2759
cagagaaccg cagtctttcg agaatggagg ctcttcattt tttttttctc ctttactcca 2819
aactcagccc tccagtttct tcagatgtaa accctgttaa cgtcactgtt tccaaaagga 2879
aaaaaataag tcagtttttg gcagcacctt catctttctg acctcctcct attctgtcct 2939
tgtggactta tgtttaacat agaaaatgaa tgcgtttaaa acaaaaccac tttctgcatt 2999
taaccagtcc tggctctctc tctgctgcct cttcatacgt tttctcaaga acttcagttt 3059
ataattggaa gagaaatttt tgctgttaat gccagaatga gcaacctcaa ggaattgaac 3119
acttcttgga aaatctaggt aattcaagcc ctcatcaggt ttacaagatc atcagagaaa 3179
cagaggattt taatttttag ttctggccgg ctacaggctc catttctctg ccttcccatt 3239
ggaaatagtt tatttccaca ttctccactg cgtgtggtca aagttcctca cccagcaagg 3299
gactatagat actcgtgtcc caattccaaa acacaatgca caagctgaac ttgggctgaa 3359
cgtggcgtgt tgagatttgg aatgaggttt ctaagagccg tgttcttcat ggaattttcc 3419
aggccacttg gcagcttggt ttaccgatgg atgggctaga gatcttgtcg tttcttggaa 3479
gtcacaggga agattgaaga gaacgcttga gcatccttgg caacagccca ggtgggacct 3539
ggatgaagct ttgcactcaa gtattgtcaa gggaagcttc ctgtgaacca aagttctcag 3599
gccaaggtct cgcccaccaa agccagaaag tgcaagcacc cgtctaccca gctctaactt 3659
gtatgtgtga gacagaccag gcttcggggg taggaggatc tgcagttgtt cagccgtctt 3719
tctgctggtg ttgtctttct gccatcagag aagggacaca cagcccgttc gaaggtgtgc 3779
agagggctct gagcgccagg atggccaggg ctgtttttgc tactgaagga gcgtgtgtcc 3839
tgaactccca cttgcaggga cagtccccac cttctctata gccggcactg ggagcagccg 3899
ccagcaggga aatctggcct gagcacaagg atgctttagg gagagatcac ttcagtgtgt 3959
gtgtatattt atttgcagta cagtgcgcgc gtgtgtgtgt gtgtacgcgc acgtgtgggt 4019
gagtgcgtct tctgagtggg ttctgttcag ttgctaatga ggctcctccg ctctggacac 4079
aaccctttta tagattaatt tctctgccaa ttaacttgtc attttcagta catattttac 4139
tattccacac caaccataat tacaacaagg gatttttctt atgcactcct atgcatgtga 4199
ataacatgtg gtgtaattct gcttcttaca gaagtattac tgaaggtatt atttccaata 4259
ttatttggtt tattatgcgg atctttttta tatatgcagt cccatccctt ctgtgccact 4319
caatgccatc cagacatggt ttttccctcc aggggccttt ctctccagag ggcacttcgg 4379
ctgcctctgc ttcctctcat tcgaggcccg gctcttgctg acagaatagg ttccgttctg 4439
ggcggtggtt ctcgagcctg ccattcaaaa ccaaagcaaa ttggagcatt tctcacaaca 4499
tggtattgaa gttccttttt gttctcaaaa gttgtgaccg tgttaaattg tactccctta 4559
gtcctgtaag gtatgttaag tgaatcgcag ttacgctgta cttttattaa tatttaacat 4619
aattaaagat ggacccataa gagtgacgcc tgtggagcgc gtgctcttcc tctgcagcca 4679
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaa 4713
<210> 4
<211> 561
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 4
Met Arg His Cys Ile Asn Cys Cys Ile Gln Leu Leu Pro Asp Gly Ala
1 5 10 15
His Lys Gln Gln Val Asn Cys Gln Gly Gly Pro His His Gly His Gln
20 25 30
Ala Cys Pro Thr Cys Lys Gly Glu Asn Lys Ile Leu Phe Arg Val Asp
35 40 45
Ser Lys Gln Met Asn Leu Leu Ala Val Leu Glu Val Arg Thr Glu Gly
50 55 60
Asn Glu Asn Trp Gly Gly Phe Leu Arg Phe Lys Lys Gly Lys Arg Cys
65 70 75 80
Ser Leu Val Phe Gly Leu Ile Ile Met Thr Leu Val Met Ala Ser Tyr
85 90 95
Ile Leu Ser Gly Ala His Gln Glu Leu Leu Ile Ser Ser Pro Phe His
100 105 110
Tyr Gly Gly Phe Pro Ser Asn Pro Ser Leu Met Asp Ser Glu Asn Pro
115 120 125
Ser Asp Thr Lys Glu His His His Gln Ser Ser Val Asn Asn Ile Ser
130 135 140
Tyr Met Lys Asp Tyr Pro Ser Ile Lys Leu Ile Ile Asn Ser Ile Thr
145 150 155 160
Thr Arg Ile Glu Phe Thr Thr Arg Gln Leu Pro Asp Leu Glu Asp Leu
165 170 175
Lys Lys Gln Glu Leu His Met Phe Ser Val Ile Pro Asn Lys Phe Leu
180 185 190
Pro Asn Ser Lys Ser Pro Cys Trp Tyr Glu Glu Phe Ser Gly Gln Asn
195 200 205
Thr Thr Asp Pro Tyr Leu Thr Asn Ser Tyr Val Leu Tyr Ser Lys Arg
210 215 220
Phe Arg Ser Thr Phe Asp Ala Leu Arg Lys Ala Phe Trp Gly His Leu
225 230 235 240
Ala His Ala His Gly Lys His Phe Arg Leu Arg Cys Leu Pro His Phe
245 250 255
Tyr Ile Ile Gly Gln Pro Lys Cys Gly Thr Thr Asp Leu Tyr Asp Arg
260 265 270
Leu Arg Leu His Pro Glu Val Lys Phe Ser Ala Ile Lys Glu Pro His
275 280 285
Trp Trp Thr Arg Lys Arg Phe Gly Ile Val Arg Leu Arg Asp Gly Leu
290 295 300
Arg Asp Arg Tyr Pro Val Glu Asp Tyr Leu Asp Leu Phe Asp Leu Ala
305 310 315 320
Ala His Gln Ile His Gln Gly Leu Gln Ala Ser Ser Ala Lys Glu Gln
325 330 335
Ser Lys Met Asn Thr Ile Ile Ile Gly Glu Ala Ser Ala Ser Thr Met
340 345 350
Trp Asp Asn Asn Ala Trp Thr Phe Phe Tyr Asp Asn Ser Thr Asp Gly
355 360 365
Glu Pro Pro Phe Leu Thr Gln Asp Phe Ile His Ala Phe Gln Pro Asn
370 375 380
Ala Arg Leu Ile Val Met Leu Arg Asp Pro Val Glu Arg Leu Tyr Ser
385 390 395 400
Asp Tyr Leu Tyr Phe Ala Ser Ser Asn Lys Ser Ala Asp Asp Phe His
405 410 415
Glu Lys Val Thr Glu Ala Leu Gln Leu Phe Glu Asn Cys Met Leu Asp
420 425 430
Tyr Ser Leu Arg Ala Cys Val Tyr Asn Asn Thr Leu Asn Asn Ala Met
435 440 445
Pro Val Arg Leu Gln Val Gly Leu Tyr Ala Val Tyr Leu Leu Asp Trp
450 455 460
Leu Ser Val Phe Asp Lys Gln Gln Phe Leu Ile Leu Arg Leu Glu Asp
465 470 475 480
His Ala Ser Asn Val Lys Tyr Thr Met His Lys Val Phe Gln Phe Leu
485 490 495
Asn Leu Gly Pro Leu Ser Glu Lys Gln Glu Ala Leu Met Thr Lys Ser
500 505 510
Pro Ala Ser Asn Ala Arg Arg Pro Glu Asp Arg Asn Leu Gly Pro Met
515 520 525
Trp Pro Ile Thr Gln Lys Ile Leu Arg Asp Phe Tyr Arg Pro Phe Asn
530 535 540
Ala Arg Leu Ala Gln Val Leu Ala Asp Glu Ala Phe Ala Trp Lys Thr
545 550 555 560
Thr
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