具体实施方式

如本文所用，术语“(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺”、“(2S)-N-[5-(羟基氨基甲酰基)噻唑-2-基]-2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺”和“GB-3103”是同义词，表示具有以下化学结构的化合物：

如本文所用，术语“治疗”可包括预防和/或抑制癌细胞(包括但不限于MRTO/SCCOHT细胞)的增殖。

INI1阴性和SMARCA4阴性的肿瘤，例如，恶性横纹肌样瘤(MRT)和上皮样肉瘤是严重并且衰竭性的癌症。全球主要市场每年约有1,400名患者患上这些肿瘤，而这些肿瘤没有既定的护理标准。INI1和SMARCA4是SWI/SNF复合物的关键蛋白质。

示例性癌症包括卵巢恶性横纹肌样瘤(MRTO)，也称为高钙血症型卵巢小细胞癌(SCCOHT)。

在需要其的受试者中治疗MRTO(SCCOHT)的优选方法包括向受试者施用治疗有效量的(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺。

本公开的(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺有效治疗由SWI/SNF染色质重构复合物的组分的丰度和/或功能降低(包括，例如SMARCA4的丰度和/或功能降低)引起的癌症。SWI/SNF复合物的可能成为致瘤标记物或驱动因素的其它组分是ARID1A、ARID2、ARID1B、SMARCB1、SMARCC1、SMARCA2或SMARCD1。从高层次来看，SWI/SNF染色质重构复合物使用ATP作为能量来源以用于打开染色质为基因转录提供通道。

根据本公开的方法，“正常”细胞可以用作癌细胞的一种或多种特征(包括SMARCA4的表达和/或功能)的比较的基础。如本文所用，“正常细胞”是不能归类为“细胞增殖性病症”部分的细胞。正常细胞缺少可导致不良病状或疾病发展的不受调控的生长或异常生长，或两者都缺少。优选地，正常细胞含有SMARCA4基因的野生型序列、表达没有突变的SMARCA4转录本、以及表达无突变的SMARCA4蛋白，保留了正常活性水平下的所有功能。

如本文所用，“接触细胞”是指其中化合物或其它物质的组合物与细胞直接接触或足够接近以在细胞中诱导所需生物效应的条件。

如本文所用，“治疗(treating)”或“治疗(treat)”描述为对抗疾病、病状或病症的目的而管理和护理受试者，其包括施用本公开的(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺或其药学上可接受的盐、前药、代谢物、多晶型物或溶剂化物，以缓解癌症的症状或并发症或消除癌症。

如本文所用，术语“缓解”意在描述癌症的体征或症状的严重程度降低的过程。重要的是，体征或症状可以在没有消除的情况下得到缓解。在优选的实施方案中，施用本公开的药物组合物导致体征或症状消除，然而消除不是必需的。预期有效剂量会降低体征或症状的严重程度。例如，如果癌症的严重程度在多个位置的至少一个中降低，则可在多个位置发生的病征(例如癌症)的体征或症状得到缓解。

如本文所用，术语“严重程度”意在描述癌症从癌前期的或良性的状态转变为恶性状态的可能性。可选择地，或此外，严重程度旨在描述癌症分期，例如根据TNM系统(International Union Against Cancer(UICC)和American Joint Committee on Cancer(AJCC)接受的)或其它领域公认的方法。癌症分期是指癌症的程度或严重程度，这取决于原发肿瘤的位置、肿瘤尺寸、肿瘤数量和淋巴结受累(癌症扩散到淋巴结)等因素。或者，或另外，严重程度旨在通过本领域公认的方法来描述肿瘤分级(参见，National CancerInstitute)。肿瘤分级是一种用于根据癌细胞在显微镜下的异常外观以及肿瘤可能生长和扩散的速度对癌细胞进行分类的系统。在确定肿瘤分级时会考虑许多因素，包括细胞的结构和生长模式。用于确定肿瘤分级的具体因素因每种类型的癌症而异。严重程度还描述了组织学分级(也称为分化)，其指肿瘤细胞与相同组织类型的正常细胞相似的程度(参见National Cancer Institute)。此外，严重程度描述了细胞核分级，其指肿瘤细胞中细胞核的尺寸和形状以及正在分裂的肿瘤细胞的百分比(参见National Cancer Institute)。

在本公开的另一方面，严重程度描述肿瘤分泌生长因子、降解细胞外基质、变得血管化、失去对并列组织的粘附或转移的程度。此外，严重程度描述了原发肿瘤已经转移到的位置的数量。最后，严重程度包括不同类型和位置的肿瘤治疗的难易程度。例如，无法手术的肿瘤、更容易进入多个身体系统的那些癌症(血液学和免疫学肿瘤)、以及对传统治疗最具有抗性的那些癌症视为最严重。在这些情况中，延长受试者的预期寿命和/或缓解疼痛、降低癌细胞的比例或将细胞限制在一个系统中以及改善癌症分期/肿瘤分级/组织学分级/细胞核分级视为是缓解癌症的体征和症状。

如本文所用，术语“症状(symptom)”定义为疾病(disease)、疾患(illness)、损伤或身体中某些不适的指示。经历症状的个体会感觉到或注意到症状，但其他人可能不容易注意到。其他人定义为非医疗保健专业人员。

如本文所用，术语“体征(sign)”也被定义为身体中某些不适的指征。但体征被定义为医生、护士或其他医疗保健专业人员可以发现的事物。

癌症是一组几乎可以引起任何体征或症状的疾病。所述体征和症状将取决于癌症的位置、癌症的尺寸以及癌症对附近器官或结构的影响程度。如果癌症扩散(转移)，那么症状可能会出现在身体的不同部位。

随着癌症的生长，癌症开始压迫附近的器官、血管和神经。这种压力产生一些癌症的体征和症状。癌症可能在某些地方形成，在这些地方直到癌症长到相当大之前不会引起任何症状。卵巢癌被视为无声杀手，因为直到肿瘤变大或转移之前，癌症不会产生严重到足以导致医疗干预的体征或症状。

癌症也可导致诸如发烧、疲倦或体重减轻等症状。这可能是因为癌细胞消耗大部分的身体能量供应或癌细胞释放改变身体的新陈代谢的物质。或者癌症可能会导致免疫系统以产生这些症状的方式做出应答。虽然以上列出的体征和症状是癌症中较常见的体征和症状，但还有许多不常见的且未在此处列出的其它体征和症状。然而，本公开考量并涵盖所有本领域公认的癌症的体征和症状。

治疗癌症可能会导致肿瘤尺寸减少。肿瘤尺寸的减少也可称为“肿瘤消退”。优选地，根据本公开的方法治疗后，肿瘤尺寸相对于治疗前的尺寸减少5％或更多；更优选地，肿瘤尺寸减小10％或更多；更优选地，减少20％或更多；更优选地，减少30％或更多；更优选地，减少40％或更多；甚至更优选地，减少50％或更多；最优选地，减少超过75％或更多。肿瘤的尺寸可以通过任何可重现的测量方式来测量。肿瘤的尺寸可作为肿瘤的直径进行测量。

治疗癌症可能会导致肿瘤体积缩小。优选地，根据本公开的方法治疗后，肿瘤体积相对于肿瘤治疗前的体积减少5％或更多；更优选地，肿瘤体积减少10％或更多；更优选地，减少20％或更多；更优选地，减少30％或更多；更优选地，减少40％或更多；甚至更优选地，减少50％或更多；以及最优选地，减少超过75％或更多。肿瘤的体积可以通过任何可重现的测量方式来测量。

治疗癌症可能会导致肿瘤数量减少。优选地，治疗后的肿瘤数量相对于治疗前的数量减少5％或更多；更优选地，肿瘤数量减少10％或更多；更优选地，减少20％或更多；更优选地，减少30％或更多；更优选地，减少40％或更多；甚至更优选地，减少50％或更多；以及最优选地，减少超过75％。肿瘤的数量可以通过任何可重现的测量方式进行测量。肿瘤的数量可以通过对肉眼可见的或在指定放大倍数下可见的肿瘤进行计数来测量。优选地，指定的放大倍数是2x、3x、4x、5x、10x或50x。

治疗癌症可能会导致远离原发肿瘤部位的其它组织或器官中的转移病灶的数量减少。优选地，根据本公开的方法治疗后，转移病灶的数量相对于治疗前的数量减少5％或更多；更优选地转移病灶的数量减小10％或更多；更优选地，减少20％或更多；更优选地，减少30％或更多；更优选地，减少40％或更多；甚至更优选地，减少50％或更多；以及最优选地，减少超过75％。转移病灶的数量可以通过任何可重现的测量方式进行测量。转移病灶的数量可以通过对肉眼可见的或在指定放大倍数下可见的转移病灶进行计数来测量。优选地，指定的放大倍数是2x、3x、4x、5x、10x或50x。

本公开的有效量的(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺或其药学上可接受的盐、前药、代谢物、多晶型物或溶剂化物对正常细胞没有显着的细胞毒性。例如，如果以治疗有效量施用本公开的(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺不引起超过10％的正常细胞的细胞死亡，则治疗有效量的本公开的(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺对正常的细胞没有显着的细胞毒性。如果以治疗有效量施用所述化合物而不引起超过10％的正常细胞的细胞死亡，则治疗有效量的本公开的(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺对正常的细胞的活性没有显着的影响。

使细胞与本公开的(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺或其药学上可接受的盐、前药、代谢物、多晶型物或溶剂化物接触，可以在癌细胞中选择性地抑制HDAC活性。向需要其的受试者施用本公开的(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺或其药学上可接受的盐、前药、代谢物、多晶型物或溶剂化物，可以在癌细胞中选择性地抑制HDAC活性。

恶性横纹肌样瘤

恶性横纹肌样瘤(MRT)是一种发生在软组织(最常见于起始于肾脏和大脑)中的罕见的儿童肿瘤。某些恶性横纹肌样瘤的标志是SMARCB1(也称为INI1)的功能丧失。INI1是SWI/SNF调节复合物的关键组分，一种与EZH2起相反作用的染色质重构剂。INI1阴性肿瘤已经改变了SWI/SNF功能。这种活性可以由(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺靶向。INI1阴性肿瘤通常具有侵袭性，目前治疗效果不佳。例如，目前对MRT(经过充分研究的INI1阴性肿瘤)的治疗包括手术、化学疗法和放射疗法，这些疗法与有限的效果和显着的治疗相关发病率相关。在包括U.S.、E.U.和日本在内的主要市场中INI1阴性肿瘤和滑膜肉瘤患者的年发病率约为2,400。SMARCB1/INI1的功能丧失也发生在另一种罕见且侵袭性的儿童肿瘤中，即中枢神经系统的非典型畸胎样横纹肌样瘤(AT/RT)。

卵巢恶性横纹肌样瘤MRTO(高钙血症型卵巢小细胞癌(SCCOHT))

MRTO/SCCOHT是一种极其罕见的影响儿童和年轻女性(诊断时的平均年龄为23岁)的侵袭性癌症。超过65％的患者在诊断的2年内死于MRTO/SCCOHT疾病。与MRT一样，这些肿瘤的特征是SWI/SNF复合物亚基SMARCA4的基因缺失。SMARCA4阴性卵巢癌细胞对EZH2抑制选择性地敏感，其IC50值与在MRT细胞中观察到的值相似。例如，目前对SCCOHT的治疗包括减瘤手术和以铂为基础的化学疗法，并且显示出很高的复发率。鉴别诊断范围很广并包括三种卵巢癌亚型：颗粒细胞(性索间质)肿瘤、无性细胞瘤和高分级浆液性肿瘤。

标准苏木精和伊红(H&E)染色显示SCCOHT呈横纹肌样，具有小、紧密堆积、单形、高度增殖和低分化的细胞的片状排列，而IHC表明SCCOHT的特征在于SMARCA4基因的失活导致蛋白缺失以及SMARCA2蛋白的非突变沉默。(参见，例如Karnezis等人，J.Pathol.2016；238：389-400,Jelinic等人Nat Genet 2014,Witkowski等人，Nat.Genet.2014；46：424-426,Ramos等人Nat.Genet.2014；46：427-429,Kupryjanczyk等人Pol.J.Pathol.2013；64：238-246,其中每个的内容通过引用其整体并入本文)。本公开的一些方面提供：表现出SMARCA4缺失(例如，由于突变)和SMARCA2缺失(例如，由于蛋白质缺失)的肿瘤细胞和肿瘤(例如，SCCOHT肿瘤)对HDAC抑制敏感并且因此可以用(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺有效治疗。

上皮样肉瘤

上皮样肉瘤是一种罕见的软组织肉瘤，占所有软组织肉瘤的不到1％。上皮样肉瘤于1970年首次得到明确表征。在上皮样肉瘤中发现的最常见基因突变是INI-1缺失(约占80-90％)。已经报道上皮样肉瘤的两种变体：远端上皮样肉瘤与较好的预后相关，影响上肢和下肢远端(手指、手、前臂或脚)，而近端上皮样肉瘤与较差的预后相关，影响近端(上臂、大腿))和躯干。上皮样肉瘤可发生于所有年龄组，但最常见发生于年轻人(诊断时的中位年龄为27岁)。

上皮样肉瘤与初始治疗后的高复发率相关，当诊断为转移性上皮样肉瘤时中位生存期不到2年。约30-50％的患者会出现局部复发和转移，通常转移至淋巴结、肺、骨和大脑。上皮样肉瘤的治疗包括作为优选治疗方法的手术切除。对于无法手术的肿瘤或在复发后，单独或联合使用常规化疗和放射疗法的成功率相对较低。大约50％的肿瘤学家认为上皮样肉瘤对化疗不敏感。

本公开涉及化合物(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺、其药学上可接受的盐、酯、衍生物、类似物、前药或溶剂化物。

本公开涵盖(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺可以采用的任何物理化学形式。物理化学形式的非限制性示例包括水合形式、溶剂化形式、结晶(已知或尚未公开)、多晶型结晶和无定形形式等。产生这种物理化学形式的方法是本领域技术人员已知的。

本公开还涉及一种用于治疗组蛋白去乙酰化酶(HDAC)相关疾病的药物组合物。所述药物组合物至少包含第一活性成分，所述第一活性成分选自：(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺、N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺及其药学上可接受的盐、酯、衍生物、类似物、前药或溶剂化物。

在一些方面，(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺、其药学上可接受的盐、酯、衍生物、类似物、前药或溶剂化物以重量计占第一活性成分的80至100％，或者例如85至100％、85至99.99％、90至99.99％、90至99.9％、92.5％至99.9％、92.5％至99.5％、95至99.5％、95至99％或97.5至99％等之间的任何百分比范围。在其它方面，#1a、其药学上可接受的盐、酯、衍生物、类似物、前药或溶剂化物以重量计占第一活性成分的至少80％、至少85％、至少90％、至少92.5％、至少95％、至少97.5％或至少99％。

药学上可接受的盐包括衍生自有机酸或无机酸的任何盐。这些盐的示例包括但不限于以下：氢溴酸、盐酸、硝酸、磷酸和硫酸的盐。有机酸加成盐包括，例如，乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、2-(4-氯苯氧基)-2-甲基丙酸、1,2-乙二磺酸、乙磺酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、富马酸、葡庚糖酸、葡萄糖酸、谷氨酸、N-羟乙酰基对氨苯基胂酸(N-glycolylarsanilic acid)、4-己基间苯二酚、马尿酸、2-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、1-羟基-2-萘甲酸、3-羟基-2-萘甲酸、2-羟基乙磺酸、乳糖酸、n-正十二烷基硫酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、甲基硫酸、粘酸、2-萘磺酸、双羟萘酸、泛酸、磷脂酸((4-氨基苯基)膦酸)、苦味酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、单宁酸、酒石酸、对苯二甲酸、对甲苯磺酸、10-十一碳烯酸或现在已知或尚未公开的任何其它此类酸的盐。本领域技术人员将理解，这些药学上可接受的盐可以用于药理学组合物的制剂。可以通过本领域技术人员已知的方式使公开的化合物与合适的酸反应来制备这些盐。

在优选的实施方案中，#1a的药学上可接受的盐选自：Na⁺、K⁺、Mg²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺和Al^{3 +}。在优选的实施方案中，#1的药学上可接受的盐选自：Na⁺、K⁺、Mg²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺和Al³⁺。

所述药物组合物的物理形式取决于许多因素。例如，期望的施用方法、所公开的化合物或其药学上可接受的盐所采用的物理化学形式。物理形式的非限制性示例包括固体、液体、气体、溶胶、凝胶、气溶胶等。在一些实施方案中，所述药物组合物由所公开的化合物或其药学上可接受的盐组成，没有任何其它添加剂。

在其它实施方案中，所述药物组合物包含在化学式上与(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺或N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺不同的第二活性成分。在一些方面，第二活性成分具有与(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺或N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺的靶标相同或相似的分子靶标。在其它实施方案中，第二活性成分在(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺或N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺的分子靶标的上游对一种或多种生化通路发挥作用。在进一步其它实施方案中，第二活性成分在(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺或N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺的分子靶标的下游对一种或多种生化通路发挥作用。可以使用制药领域熟知的方法制备包含所公开的化合物的药物组合物。

在一些实施方案中，药物组合物包括能够修饰剂量单位的物理形式的材料。在一个非限制性示例中，所述组合物包含形成容纳化合物的包衣的材料。材料的非限制性示例包括糖、虫胶、明胶和其它惰性涂层剂。

本发明涉及一种治疗受试者的组蛋白去乙酰化酶(HDAC)相关疾病的方法，其包括向所述受试者施用组合物，所述组合物选自(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺或N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺及其药学上可接受的盐、酯、衍生物、类似物、前药或溶剂化物。

组蛋白乙酰基转移酶(HAT)通过控制组蛋白周围DNA的卷曲和去卷曲来影响基因表达。组蛋白乙酰基转移酶通过使核心组蛋白中的赖氨酸残基乙酰化，导致染色质紧密性降低且转录活性提高来实现此目的。相比之下，组蛋白去乙酰化酶(HDAC)从赖氨酸残基上去除乙酰基，导致染色质更紧密且转录沉默。核心组蛋白末端尾部的可逆修饰构成用于重构高级染色质结构和控制基因表达的主要的表观遗传学机制。HDAC抑制剂(HDI)阻断该作用，并且可以导致组蛋白过度乙酰化，从而影响基因表达。Thagalingam S.,Cheng K H,LeeH J等人，Ann.N.Y.Acad.Sci.983：84-100,2003；Marks P A.Richon V M,Rifkind R A,J.Natl.Cancer Inst.92(15)1210-16,2000；Dokmanovic M,Clarke C.,Marks P A,Mol.Cancer Res.5(10)981-989,2007。

组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂是一类细胞抑制剂，其通过诱导细胞周期停滞、分化和/或凋亡来在培养物中和体内抑制肿瘤细胞的增殖。乙酰化和去乙酰化在染色质拓扑结构的调节和基因转录的调节中发挥重要的作用。组蛋白去乙酰化酶抑制剂在染色质的许多区域中诱导过度乙酰化的核小体核心组蛋白聚集，但仅影响少数基因亚组的表达，这导致一些基因的转录活化但抑制相等或更多数量的其它基因。非组蛋白蛋白质(如转录因子)也是具有不同的功能作用的乙酰化的靶标。乙酰化增强一些转录因子(如肿瘤抑制因子p53和红细胞分化因子GATA-1)的活性，但可以抑制其它转录因子(包括T细胞因子和共激活因子ACTR)的转录活性。最近的研究表明，雌激素受体α(ERα)可以在对组蛋白去乙酰化酶抑制作出响应时中被过度乙酰化，从而抑制配体敏感性并通过组蛋白去乙酰化酶抑制剂调节转录活化。其它核受体中乙酰化的ERα基序的保守性提示乙酰化可能在多种核受体信号传导功能中发挥重要的调节作用。在动物模型中，许多结构多样的组蛋白去乙酰化酶抑制剂在体内显示出有效的抗肿瘤功效且毒性小。若干化合物作为单一疗法以及与细胞毒素和分化剂组合，目前正处于作为用于实体癌症和血液癌症的潜在治疗的早期临床开发阶段中。

HDAC酶家族构成18个基因的家族，基于与相应的酵母直系同源物(ortholog)的同源性，其可以被分为四个亚类：I至IV类。属于I、II和IV类的HDAC包含11个成员，即HDAC同工型(isoform)1至11，通常称为经典HDAC，是金属依赖性水解酶。包含7个成员的III类HDAC称为去乙酰化酶(sirtuins)(即Sirt 1至7)是NAD+依赖性水解酶。I类HDAC是具有普遍存在的组织表达的核蛋白。II类和IV类HDAC在细胞核和细胞质中均有发现，并且表现出组织特异性表达。II类HDAC家族进一步细分为IIA和IIB亚类。IIA类包含同工型HDAC4、HDAC5、HDAC7和HDAC9，而IIB类包含同工型HDAC6和HDAC10。HDAC6包含两个串联的去乙酰化酶结构域和C末端锌指结构域。HDAC10在结构上与HDAC6相关，但具有一个额外的催化结构域。表1表示经典HDAC的细胞位置和组织表达(改编自Witt,O.等人，Cancer Lett.,277：8-21(2008))。

表格1.经典HDAC、细胞位置和组织表达

HDAC在正常和异常细胞增殖和分化中均发挥重要的作用。HDAC已经与一些涉及增殖的疾病状态相关，包括但不限于细胞增殖性疾病和病状，例如各种形式的癌症。(综述在Witt,O.等人，Cancer Lett.,277：8-21(2008)；以及Portella A.等人，Nat.Biotechnol.,28：1057-1068(2010))。I类和II类HDAC已经被确定为用于抗癌疗法的有吸引力的靶标。具体地，不同的I类和II类HDAC蛋白在一些癌症中过度表达，包括卵巢癌(HDAC1-3)、胃癌(HDAC2)和肺癌(HDAC1和3)等。另外，已经提出了HDAC8与急性髓细胞白血病(AML)之间可能的相关性。对于II类HDAC蛋白，在一些乳腺癌细胞中诱导了HDAC6的异常表达。基于HDAC抑制剂的临床作用，已经鉴定出抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞分化和上调与抗癌功效相关的关键基因的HDAC抑制剂。HDAC还涉及多种类型的癌症(Bali P,等人，“Inhibition ofhistone deacetylase 6acetylates and disrupts the chaperone function of heatshock protein 90：A novel basis for antileukemia activity of histonedeacetylase inhibitors,”J.Biol.Chem.,2005 280：26729-26734；Santo L.等人，“Preclinical activity,pharmacodynamic and pharmacokinetic properties of aselective HDAC6 inhibitor,ACY-1215,in combination with bortezomib in multiplemyeloma,”Blood,2012,119(11)：2579-89)、自身免疫疾病或炎性疾病(Shuttleworth,S.J.,等人，Curr.Drug Targets,11：1430-1438(2010))、认知疾病和神经变性疾病(Fischer,A.,等人，Trends Pharmacol.Sci.,31：605-617(2010)；Chuang,D.-M.,等人，Trends Neurosci.32：591-601(2009))、纤维化疾病(Pang,M.等人，J.Pharmacol.Exp.Ther.,335：266-272(2010))、原生动物疾病(参见，例如美国专利号5,922,837)以及病毒疾病(Margolis,D.M.等人，Curr.Opin.HIV AIDS,6：25-29(2011))。

近年来，已经努力开发作为癌症治疗和/或作为辅助疗法的HDAC抑制剂。Mark PA.等人Expert Opinion on Investigational Drugs 14(12)：1497-1511(2005)。化合物可发挥作用的确切机理尚不清楚，但是已经研究表观遗传通路以帮助阐明确切的生物学通路。Claude Monneret,Anticancer Drugs 18(4)：363-370 2007。例如，已经显示HDAC抑制剂诱导p21(WAFI)表达，所述p21为p53肿瘤抑制活性的调节剂。Rochon V M.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.97(18)：10014-10019,2000。HDAC参与视网膜母细胞瘤蛋白(pRb)抑制细胞增殖的通路。所述pRb蛋白是复合物的部分，所述复合物将HDAC引到染色质从而使得HDAC使组蛋白去乙酰化。Brehm A.等人，Nature 391(6667)：597-601,1998。HDAC1通过直接相互作用负调节心血管转录因子Kruppel样因子5。Matsumura T.等人，J.Biol.Chem.280(13)：12123-12129,2005。雌激素公认为是一种有丝分裂因子，通过与雌激素受体α(ERα)结合而参与乳腺癌的肿瘤发生和进展。近期的数据表明，由HDAC和DNA甲基化介导的染色质失活是ERα沉默其人乳腺癌细胞的重要组分。Zhang Z.等人，BreastCancer Res.Treat.94(1)：11-16,2005。

在一些方面，以10至400mg/kg施用、或以在例如10至350mg/kg、20至350mg/kg、20至300mg/kg、30至300mg/kg、30至250mg/kg、40至250mg/kg、40至200mg/kg、50至200mg/kg、50至150mg/kg、60至150mg/kg或60至100mg/kg等之间的任何数值施用所述组合物。

在其它方面，以约每4、8、12、16或24小时施用所述组合物。在又一其它方面，每1至24小时或者例如在每2至24小时、2至18小时、3至18小时、3至16小时、4至16小时、4至12小时、5至12小时、5至8小时等之间的任何数值施用所述组合物。

在一些实施方案中，所述组合物还包含第二活性成分，所述第二活性成分选自化疗药物、EZH2抑制剂、受体酪氨酸激酶抑制剂、CDK4/6抑制剂、增强抗原呈递的试剂(“抗原呈递组合”)、增强效应细胞应答的试剂(“效应细胞组合”)、降低肿瘤免疫抑制的试剂(“抗肿瘤免疫抑制组合”)及其组合。

化疗药物的非限制性示例包括：顺式二氨二氯铂(II)(顺铂)、多柔比星、5-氟尿嘧啶、紫杉醇和拓扑异构酶抑制剂，例如依托泊苷、替尼泊苷、伊立替康和拓扑替康等。EZH2抑制剂的非限制性示例包括他泽司他(tazemetostat)(EPZ-6438)。受体酪氨酸激酶抑制剂的非限制性示例包括帕那替尼(ponatinib)。CDK4/6抑制剂的非限制性示例包括瑞博西林(Ribociclib)、帕博西尼(Palbociclib)(PD-0332991)、阿贝西利(Abemaciclib)(LY2835219)以及Trilaciclib(G1T28)。

抗原呈递组合

增强抗原呈递的试剂的非限制性示例包括：增强抗原呈递的试剂、增强肿瘤细胞裂解的试剂、刺激吞噬细胞的试剂、解除吞噬细胞抑制的试剂、活化树突细胞的试剂、活化巨噬细胞(例如，巨噬细胞I)的试剂、招募树突细胞的试剂或招募巨噬细胞(例如，巨噬细胞I)的试剂或疫苗等。在某些非限制性的方面，增强抗原呈递的试剂增强肿瘤抗原呈递。

疫苗的非限制性示例包括：基于细胞的疫苗(例如，基于树突细胞的疫苗，如Provenge.RTM)或基于抗原的疫苗(例如，IL-2与MUC1的组合)等。增强肿瘤细胞裂解的试剂的非限制性示例为溶瘤病毒。刺激吞噬细胞的试剂的非限制性示例为I型干扰素(IFN)活化剂，例如，TLR激动剂或RIG-I样受体激动剂(RLR)等。活化和/或招募树突细胞或巨噬细胞的试剂的非限制性示例包括：双特异性细胞接合剂或三特异性细胞接合剂等。

在一些实施方案中，增强抗原呈递的试剂选自干扰素基因的刺激因子(Stimulator of Interferon Genes)的激动剂(STING激动剂)、Toll样受体(TLR)的激动剂、TIM-3调节剂、血管内皮生长因子受体(VEGFR)抑制剂、c-Met抑制剂、TGF-β抑制剂、IDO/TDO抑制剂、A2AR拮抗剂、溶瘤病毒、疫苗、双特异性细胞接合剂、三特异性细胞接合剂、双特异性抗体分子、三特异性抗体分子、IDO/TDO抑制剂以及其组合。

TLR的非限制性示例包括：TLR-3、TLR-4、TLR-5、TLR-7、TLR-8或TLR-9的激动剂等。TIM-3调节剂的非限制性示例是抗TIM-3抗体分子。TGF-β抑制剂的非限制性示例为抗TGF-β抗体。疫苗的非限制性示例为支架疫苗(scaffold vaccine)。在一些方面，溶瘤病毒表达细胞因子，例如，GM-CSF或CSF(例如，CSFl或CSF2)等。双特异性或三特异性细胞接合物的非限制性示例包括：针对CD47和CD19的具有或不具有Fc结构域的双特异性或三特异性抗体分子。

效应细胞组合

增强效应细胞应答的试剂的非限制性示例包括：淋巴细胞活化剂、活化肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)和/或解除肿瘤浸润淋巴细胞抑制的试剂、NK细胞调节剂、白介素或白介素变体、双特异性或三特异性细胞接合剂、NK细胞疗法、诱导NK细胞的疫苗和抗原/免疫刺激剂、免疫调节剂、T细胞调节剂、双特异性T细胞接合剂、IAP的抑制剂(凋亡蛋白的抑制剂(Inhibitor of Apoptosis Protein))或雷帕霉素的靶标(mTOR)的抑制剂等。

淋巴细胞活化剂的非限制性示例包括：NK细胞活化剂或T细胞活化剂等。肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的非限制性示例包括：NK细胞或T细胞等。NK细胞调节剂的非限制性示例为NK受体的调节剂(例如，抗体分子)，例如NKG2A、KIR3DL、NKp46、MICA、CEACAM1的调节剂或其组合等。白介素的非限制性示例包括：IL-2、IL-15、IL-21、IL-13R、IL-12细胞因子或其组合等。双特异性或三特异性细胞接合剂的非限制性示例包括：NKG2A和CD138的双特异性抗体分子，或CD3和TCR的双特异性抗体分子等。免疫调节剂的非限制性示例包括：共刺激分子的活化剂，或免疫检查点分子的抑制剂等。

在一些实施方案中，所述T细胞调节剂为选自检查点抑制剂的抑制剂的T细胞调节剂。选自检查点抑制剂的抑制剂(例如抗体)的T细胞调节剂的非限制性示例包括：PD-1的抑制剂、PD-L1的抑制剂、TIM-3的抑制剂、LAG-3的抑制剂、VISTA的抑制剂、二酰甘油激酶(DKG)-α的抑制剂、B7-H3的抑制剂、B7-H4的抑制剂、TIGIT的抑制剂、CTLA4的抑制剂、BTLA的抑制剂、CD160的抑制剂、TIM1的抑制剂、IDO的抑制剂、LAIR1的抑制剂、IL-12的抑制剂或其组合等。

在其它实施方案中，所述T细胞调节剂是选自共刺激分子的激动剂或活化剂的T细胞调节剂。选自共刺激分子的激动剂或活化剂的T细胞调节剂的非限制性示例包括：GITR、OX40、ICOS、SLAM(例如SLAMF7)、HVEM、LIGHT、CD2、CD27、CD28、CDS、ICAM-1、LFA-1(CD11a/CD18)、ICOS(CD278)、4-1BB(CD137)、CD30、CD40、BAFFR、CD7、NKG2C、NKp80、CD160、B7-H3或CD83配体等的激动性抗体、其抗原结合片段或可溶性融合物等。双特异性T细胞接合剂的非限制性示例是结合CD3和肿瘤抗原(例如表皮生长因子受体(EGFR)、PSCA、PSMA、EpCAM或HER2等)的双特异性抗体分子。

抗肿瘤免疫抑制组合

降低肿瘤免疫抑制的试剂的非限制性示例包括：调节Treg、巨噬细胞2和/或MDSC的活性和/或水平的试剂，增加M2极化、Treg消耗和/或T细胞招募的试剂。

降低肿瘤免疫抑制的试剂的非限制性示例包括：免疫调节剂、CSF-1/1R抑制剂、IL-17抑制剂、IL-1β抑制剂、CXCR2抑制剂、磷酸肌醇3-激酶抑制剂、BAFF-R抑制剂、MALT-1/BTK抑制剂、JAK抑制剂、CRTH2抑制剂、VEGFR抑制剂、IL-15或其变体、CTLA-4抑制剂、IDO/TDO抑制剂、A2AR拮抗剂、TGF-β抑制剂或PFKFB3抑制剂、免疫检查点分子的抑制剂等。

免疫调节剂的非限制性示例包括：共刺激分子的活化剂(例如，GITR激动剂)或免疫检查点分子(如PD-1、PD-L1、LAG-3、TIM-3或CTLA-4等)的抑制剂等。CSF-1/1R抑制剂的非限制性示例是巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的抑制剂。磷酸肌醇3-激酶的抑制剂的非限制性示例是PI3K，例如PI3Kγ或PI3Kδ等。免疫检查点分子抑制剂的非限制性示例包括：PD-1的抑制剂、PD-L1的抑制剂、LAG-3的抑制剂、TIM-3的抑制剂、CEACAM(例如，CEACAM-1、CEACAM-3和/或CEACAM-5等)的抑制剂或CTLA-4的抑制剂等。

在一些实施方案中，第二活性成分包括一种或多种增强抗原呈递的治疗剂、一种或多种增强效应细胞应答的治疗剂和/或一种或多种降低肿瘤免疫抑制的治疗剂。

在某些实施方案中，第二活性成分选自STING激动剂、TLR激动剂(例如，TLR7激动剂)、TIM-3调节剂(例如，TIM-3抑制剂)、GITR调节剂(例如，GITR激动剂)、PD-1抑制剂(例如，抗PD-1抗体分子)、PD-L1抑制剂、CSF-1/1R抑制剂(例如，M-CSF抑制剂)、IL-17抑制剂、IL-1β抑制剂及其组合。

药物制剂

本公开还提供药物组合物，其包含本文所述的(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺与至少一种药学上可接受的赋形剂或载体组合。

“药物组合物”是以适合于施用至受试者的形式含有本公开的(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺的制剂。在一个实施方案中，所述药物组合物是散装的或在单位剂型中。单位剂型是多种形式中的任一种，包括例如，胶囊、IV包、片剂、气雾剂吸入器上的单泵或小瓶。单位剂量的组合物中的活性成分(例如，所公开的化合物或其盐、水合物、溶剂化物或异构体的制剂)的量是有效量并且根据所涉及的具体治疗而变化。本领域技术人员将理解有时需要根据患者的年龄和病状对剂量进行常规变化。剂量也将取决于施用途径。考虑多种途径，包括口服、肺部、直肠、肠胃外、经皮、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内、吸入、颊、舌下、胸膜内、鞘内、鼻内等。本公开的化合物的局部或经皮施用的剂型包括粉剂、喷雾剂、软膏剂、糊剂、乳膏剂、洗剂、凝胶剂、溶液剂、贴剂和吸入剂。在一个实施方案中，活性化合物在无菌条件下与药学上可接受的载体以及所需的任何防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。

如本文所用，短语“药学上可接受的”是指那些在合理医学判断范围内的化合物、材料、组合物、载体和/或剂型，其适用于与人和动物的组织接触并且没有过度的毒性、刺激、过敏反应或其它问题或并发症，与合理的收益/风险比率相称。

“药学上可接受的赋形剂”是指可用于制备药物组合物的赋形剂，其通常是安全、无毒且在生物学上或其它方面均无不良作用的，并且包括用于兽医用途以及人药物用途的可接受的赋形剂。本公开中使用的“药学上可接受的赋形剂”包括一种和多于一种这样的赋形剂。

本公开的药物组合物被配制成与其预期施用途径兼容。施用途径的示例包括肠胃外，例如静脉内、皮内、皮下、口服(例如，吸入)、经皮(局部)和经粘膜施用。用于肠胃外、皮内或皮下应用的溶液或悬浮液可包括以下成分：无菌稀释剂，例如注射用水、盐水溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌剂，例如如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，例如乙二胺四乙酸；缓冲剂，如醋酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，以及调节张力的试剂，例如，氯化钠或葡萄糖。pH可以用酸或碱(例如，盐酸或氢氧化钠)调节。肠胃外制剂可以封装在安瓿瓶、一次性注射器或由玻璃或塑料制成的多剂量小瓶中。

本公开的化合物或药物组合物可以通过目前用于化学治疗的许多公知的方法施用于受试者。例如，为治疗癌症，可以将本公开的化合物直接注射到肿瘤中、注射到血流或体腔中或口服或用贴剂经皮施用。选择的剂量应足以构成有效治疗并且不能高到引起不可接受的副作用。在治疗期间和治疗后的合理时间段内，应优选密切监测疾病病状(例如，癌症、癌前期等)的状态和患者的健康状况。

本文所用的术语“治疗有效量”指对治疗、缓解或预防所鉴定的疾病或病状有效的、或显示可检测的治疗或抑制效果的(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺、其组合物或药物组合物的量。可以通过本领域已知的任何测定方法检测该效果。受试者的精确有效量将取决于受试者的体重、尺寸(size)和健康；病状的性质和程度；以及选择用于施用的治疗剂或治疗剂的组合。对于给定情况的治疗有效量可以通过在临床医生的技能和判断范围内的常规实验来确定。在优选的方面，待治疗的疾病或病状是癌症，包括但不限于恶性横纹肌样瘤(MRT)、卵巢MRT(MRTO)和高钙血症型卵巢小细胞癌(SCCOHT)。

对于本公开的(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺，治疗有效量可以在细胞培养测定(例如，赘生性细胞的培养测定)中或在动物模型中(通常是大鼠、小鼠、兔子、狗或猪)初步估计。动物模型也可用于确定合适的浓度范围和施用途径。然后，此类信息可以用来确定用于人体施用的有用剂量和途径。治疗/预防效果和毒性可以通过细胞培养物或实验动物中的标准药物程序，例如ED₅₀(对50％的群体治疗有效的剂量)和LD₅₀(对50％的群体致死的剂量)来确定。毒性与治疗效果的剂量比率即为治疗指数，所述治疗指数可表示为比率LD₅₀/ED₅₀。优选表现出大治疗指数的药物组合物。剂量可在此范围内变化，这取决于所采用的剂型、患者的敏感性和施用途径。

调整剂量和施用以提供足够水平的活性剂或维持所需的效果。可以考虑的因素包括疾病状态的严重程度、受试者的总体健康状况、受试者的年龄、体重和性别、饮食、施用时间和频率、药物组合、反应敏感性以及对治疗的耐受性/应答。取决于具体制剂的半衰期和清除率，可以每3至4天、每周或每两周一次施用长效药物组合物。

本公开的含有(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺的药物组合物可通过通常已知的方式制造，例如通过常规的混合、溶解、制粒、糖衣丸制造、研磨、乳化、封装、包埋或冻干的方式。药物组合物可以使用一种或多种药学上可接受的载体以常规方式配制，所述载体包括有助于将活性化合物加工成可药用制剂的赋形剂和/或助剂。当然，合适的制剂取决于所选择的施用途径。

适用于注射用途的药物组合物包括用于即时制备的无菌可注射溶液或分散体的无菌水溶液(可溶于水的情况)或分散体以及无菌粉剂。对于静脉内施用，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、Cremophor EL.^TM(BASF,Parsippany,N.J.)或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在所有情况下，组合物必须是无菌的并且应该是一定程度的流体，以具有容易注射性。它在制造和储存条件下必须是稳定的，并且必须被保存以防止微生物(例如，细菌和真菌)的污染作用。载体可以是包含例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)的溶剂或分散介质，及其合适的混合物。适当的流动性可以通过以下维持，例如，通过使用包衣(例如，卵磷脂)、在分散剂的情况下通过维持所需的粒径以及通过使用表面活性剂。可以通过各种抗菌剂和抗真菌剂，例如，对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等来预防微生物的作用。在许多情况下，可以优选在组合物中包括等渗剂，例如糖、多元醇(例如，甘露醇、山梨糖醇或氯化钠)。可以通过在组合物中包含推迟吸收的试剂(例如，单硬脂酸铝和明胶)来实现可注射组合物的延长吸收。

根据需要，可以通过掺入需要的量在合适的溶剂中的活性化合物与一种上述成分或上述成分的组合，然后过滤除菌来制备无菌可注射溶液。通常，通过将活性化合物掺入含有基本分散介质和来自上述那些所需的其它成分的无菌载剂中来制备分散剂。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉剂的情况下，制备方法是真空干燥和冷冻干燥产生活性成的粉末以及来自其之前其无菌过滤的溶液中任何其它所需的成分。

口服组合物通常包括惰性稀释剂或可食用的药学上可接受的载体。其可以封装在明胶胶囊中或压缩成片剂。为了口服治疗施用的目的，活性化合物可以与赋形剂掺入，并以片剂、锭剂或胶囊剂的形式使用。还可以使用液体载体制备口服组合物以用作漱口水，其中液体载体中的化合物经口施用和漱口(swish)施用并吐出或吞咽。药学相容的结合剂和/或佐剂材料可以作为组合物的一部分包含在内。片剂、丸剂、胶囊剂、锭剂等可含有任何以下成分或类似性质的化合物：结合剂，例如，微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂，例如，淀粉或乳糖；崩解剂，例如，海藻酸、初级凝胶(Primogel)、玉米淀粉等；润滑剂，例如，硬脂酸镁或Sterotes；助流剂，例如，胶体二氧化硅；甜味剂，例如，蔗糖或糖精；或调味剂，例如，薄荷、水杨酸甲酯或橙味调味剂。

对于吸入施用，所述化合物以气雾剂喷雾的形式从含有合适的推进剂(例如，气体(如二氧化碳))的压力容器或分配器、或喷雾器递送。

全身施用也可以通过经粘膜或经皮方式进行。对于经粘膜或经皮施用，在制剂中使用适合待渗透的屏障的渗透剂。此类渗透剂在本领域中通常是已知的，并且包括例如用于经粘膜施用的去污剂、胆汁盐和梭链孢酸衍生物。可以通过使用鼻腔喷雾剂或栓剂来实现经粘膜施用。对于经皮施用，将活性化合物配制成本领域公知的软膏、油膏、凝胶或乳膏。

活性化合物(即，本公开的(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺)可以与保护化合物免于从体内快速清除的药学上可接受的载体制备，例如，控释制剂，包括植入物和微囊化递送系统。可以使用可生物降解的生物相容性聚合物，例如乙烯醋酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚原酸酯和聚乳酸。这些制剂的制备方法对本领域技术人员而言是显而易见的。这些材料还可商业上获得自Alza Corporation和NovaPharmaceuticals,Inc。脂质体悬浮液(包括脂质体，所述脂质体使用针对病毒抗原的单克隆抗体靶向感染的细胞)也可用作药学上可接受的载体。这些可以根据本领域技术人员已知的方法来制备，例如根据美国专利号No.4,522,811的描述来制备。

特别有利地是口服或肠胃外组合物以剂量单位形式配制以易于施用和剂量的均匀性。如本文所用的剂量单位形式是指适合以单位剂量用于待治疗的受试者的物理离散单位；每个单位含有预定量的活性化合物，经计算可与所需的药物载体相结合产生所期望的治疗效果。本公开的剂量单位形式的规格取决于并直接依赖于活性化合物的独特特性和待实现的特定治疗效果。

在治疗应用中，根据本公开使用的药物组合物的剂量取决于药剂、接受患者的年龄、体重和临床状况以及施用此治疗的临床医生或从业者的经验和判断，以及除此之外的影响所选剂量的其它因素。通常，剂量应足以导致肿瘤的生长减慢(以及优选消退)以及还优选造成癌症的完全消退。药物试剂的有效量是提供临床医生或其它有资质的观察员所注意到的客观的、可识别的改善的量。例如，可以参考肿瘤的直径来测量患者中肿瘤的消退。肿瘤直径的减小表明消退。肿瘤在治疗停止后不再复发也表明消退。如本文所用，术语“剂量有效方式”是指在受试者或细胞中产生所需生物学效果的活性化合物的量。

药物组合物可与施用说明一起包含在容器、包装或分配器中。

本公开还包括所公开的化合物可能呈现的任何物理化学或立体化学形式。此类形式包括非对映异构体、外消旋体、分离的对映异构体、水合形式、溶剂化形式、任何已知或尚未公开的结晶或无定形形式，包括所有多晶型结晶形式。无定形形式缺乏可区分的晶格，因此缺乏结构单元的有序排列。许多药物化合物具有无定形形式。产生这种化学形式的方法是本领域技术人员公知的。

本公开的化合物包括可能的立体异构体并且不仅包括外消旋化合物而且还包括单独的对映异构体和/或非对映异构体。当需要化合物为单一对映异构体或非对映异构体时，所述化合物可以通过立体定向合成或通过拆分(resolution)最终产物或任何方便的中间体来获得。最终产物、中间体或起始材料的拆分可受本领域已知的任何合适方法影响。例如，参见E.L.Eliel、S.H.Wilen和L.N.Mander“Stereochemistry of Organic Compounds”(Wiley-lnterscience,1994)。

所公开的化合物的外消旋体、单独的对映异构体或非对映异构体可以通过现在已知或尚未公开的任何方法通过定向合成或通过拆分来制备。例如，通过使用光学活性酸形成盐通过形成非对映异构体对，可以将化合物拆分成化合物的对映异构体。对映异构体极少结晶和游离碱再生。在另一示例中，对映异构体可以通过色谱法分离。这种色谱法可以是现在已知的或有待公开的适合于分离对映异构体的任何合适的方法，例如手性柱上的HPLC。

本公开的化合物能够进一步形成盐。所有这些形式也包括在要求保护的公开内容的范围内。

如本文所用，“药学上可接受的盐”是指本公开的化合物的衍生物，其中母体化合物通过制备其酸或碱盐而被修饰。药学上可接受的盐的示例包括但不限于碱性残基(如胺)的无机酸盐或有机酸盐、酸性残基(如羧酸)的碱盐或有机盐等。药学上可接受的盐包括，例如由无毒无机或有机酸形成的母体化合物的常规无毒盐或季铵盐。例如，此类常规的无毒盐包括但不限于，衍生自无机或有机酸的那些盐，所述酸选自2-乙酰氧基苯甲酸、2-羟基乙磺酸、乙酸、抗坏血酸、苯磺酸、苯甲酸、碳酸氢盐、碳酸、柠檬酸、乙二胺四乙酸(edetic)、乙二磺酸、1,2-乙磺酸、富马酸、葡庚糖、葡糖酸、谷氨酸、乙醇酸、乙二醇芳基苯胺、己基间苯二酚(hexylresorcinic)、氨基甲酸、氢溴酸、盐酸、氢碘酸、羟基马来酸、羟基萘甲酸、异乙磺酸、乳酸、乳糖酸、十二烷基磺酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、萘磺酸、硝酸、草酸、帕莫酸(pamoic)、泛酸、苯乙酸、磷酸、聚半乳糖醛酸、丙酸、水杨酸、硬脂酸、亚乙酸、琥珀酸、氨基磺酸、磺胺酸、硫酸、单宁酸、酒石酸、甲苯磺酸以及常见的氨基酸，例如,甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、精氨酸等。

药学上可接受的盐的其它示例包括己酸、环戊烷丙酸、丙酮酸、丙二酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、4-甲基双环-[2.2.2]-辛烷-2-烯-1-羧酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、粘康酸等。本公开还包括当母体化合物中存在的酸质子被金属离子(例如，碱金属离子、碱土金属离子或铝离子)取代时形成的盐；或与有机碱，例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡糖胺等配位形成的盐。

应当理解，所有对药学上可接受的盐的提及包括如本文所定义的相同盐的溶剂加成形式(溶剂化物)或晶体形式(多晶型物)。

本公开的(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺也可以制备为酯，例如,药学上可接受的酯。例如，化合物中的羧酸官能团可以转化为其相应的酯，例如，甲酯、乙酯或其它酯。化合物中的醇基还可以转化为其相应的酯，例如，乙酸酯、丙酸酯或其它酯。

本公开的(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺也可以制备为前药，例如,药学上可接受的前药。术语“前药(pro-drug)”和“前药(prodrug)”在本文中可互换使用，是指在体内释放活性母体药物的任何化合物。由于已知前药增强药物的许多所需品质(例如，溶解度、生物利用度、制造等)，所以本公开的化合物可以前药形式递送。因此，本公开旨在涵盖当前要求保护的化合物的前药、递送前药的方法和包含前药的组合物。“前药”旨在包括任何共价键合的载体，当此类前药施用于受试者时，所述载体在体内释放本公开的活性母体药物。本公开中的前药通过修饰化合物中存在的官能团来制备，以这样的方式使得修饰以常规操作或在体内被切割，成为母体化合物。前药包括本公开的化合物，其中羟基、氨基、巯基、羧基或羰基与任何基团结合，所述基团可在体内被切割分别形成游离羟基、游离氨基、游离巯基、游离羧基或游离羰基。

前药的示例包括但不限于本公开的化合物中羟基官能团的酯(例如，乙酸酯、二烷基氨基乙酸酯、甲酸酯、磷酸酯、硫酸酯和苯甲酸酯衍生物)、氨基甲酸酯(例如，N,N-二甲基氨基羰基)，羧基官能团的酯(例如，乙酯、吗啉乙醇酯)，氨基官能团的N-酰基衍生物(例如，N-乙酰基)N-曼尼希碱、席夫碱和烯胺酮，酮和醛官能团的肟、缩醛、缩酮和烯醇酯，等等，参见Bundegaard,H.,Design of Prodrugs,第1至92页,Elesevier,New York-Oxford(1985)。

(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺或其药学上可接受的盐、酯或前药经口服、鼻腔、经皮、肺、吸入、颊、舌下、腹膜内、皮下、肌肉内、静脉内、直肠、胸膜内、鞘内和肠胃外施用。在一个实施方案中，所述化合物口服施用。本领域技术人员将会认识到某些施用途径的优点。

根据多种因素选择使用化合物的剂量方案，包括患者的类型、物种、年龄、体重、性别和医疗状况；待治疗的病状的严重程度；施用途径；患者的肾和肝功能；以及所使用的特定化合物或其盐。普通熟练的医师或兽医可以容易地确定和开出预防、对抗或阻止病状进展所需的药物的有效量。

剂量方案可以是每日(例如，每24小时)施用本公开的化合物。剂量方案可以是连续天，例如至少连续两天、至少三天、至少四天、至少五天、至少六天或至少七天每天施用。给药可以每天超过一次，例如每天(每24小时)两次、三次或四次。给药方案可以是每天施用，然后是至少一天、至少两天、至少三天、至少四天、至少五天或至少六天不施用。

用于配制和施用本公开的公开化合物的技术可见于Remington：The Science andPractice of Pharmacy,第19增补版,Mack Publishing Co.,Easton,Pa.(1995)。在一个实施方案中，本文所述的化合物及其药学上可接受的盐与药学上可接受的载体或稀释剂组合用于药物制剂中。合适的药学上可接受的载体包括惰性固体填充剂或稀释剂和无菌水溶液或有机溶液。化合物将以足以提供本文所述范围内的所需剂量存在于此类药物组合物中。

本公开的用于治疗癌症的方法包括治疗恶性横纹肌样瘤(MRT)。在优选的实施方案中，本公开的方法用于治疗患有卵巢恶性横纹肌样瘤(MRTO)的受试者。MRTO也可称为高钙血症型卵巢小细胞癌(SCCOHT)。在某些实施方案中，MRTO或SCCOHT和/或受试者表征为SMARCA4阴性。如本文所用，SMARCA4阴性细胞在SMARCA4基因、相应的SMARCA4转录物(或其cDNA拷贝)或SMARCA4蛋白中含有突变，所述突变防止SMARCA4基因的转录、防止SMARCA4转录物的翻译和/或减少/抑制SMARCA4蛋白的活性。细胞的SMARCA4阴性状态使细胞对EZH2驱动的肿瘤发生敏感。

本公开的方法可用于治疗SMARCA4阴性的受试者或具有一种或多种可能是SMARCA4阴性的细胞的受试者。SMARCA4表达和/或SMARCA4功能可以通过荧光和非荧光免疫组化(IHC)方法评估，包括本领域普通技术人员公知的方法。在某个实施方案中，所述方法包括：(a)从受试者获取生物样本；(b)将生物样本或其部分与特异性结合SMARCA4的抗体接触；以及(c)检测与SMARCA4结合的抗体的量。可选择地，或另外，SMARCA4表达和/或SMARCA4功能可以通过包括以下的方法评估：(a)从受试者获取生物样本；(b)对来自生物样本或其部分的编码SMARCA4蛋白的至少一个DNA序列进行测序；以及(c)确定至少一个编码SMARCA4蛋白的DNA序列是否包含影响SMARCA4蛋白表达和/或功能的突变。SMARCA4表达或SMARCA4的功能可以通过检测与SMARCA4结合的抗体的量和通过对至少一个编码SMARCA4蛋白的DNA序列进行测序来评估，任选地，使用来自受试者的相同生物样本。

除非另有说明，本文所用的所有百分比和比率均以重量计。

本公开的其它特征和优点在不同的示例中是显而易见的。所提供的示例说明在实践本公开中有用的不同组件和方法。示例不限制要求保护的公开。基于本公开，本领域技术人员可以识别和采用可用于实践本公开的其它组件和方法。

实施例

为更高效地理解本文公开的发明，下面提供实施例。应当理解，这些实施例仅用于说明目的并且不应被解释为以任何方式限制本公开。

实施例1：

细胞活力测定

通过Promega(Madison，WI)的CellTiter-细胞活力测定来测量细胞活力。CellTiter-Luminescent Cell Viability Assay是均质方法，所述方法基于定量存在的ATP来确定培养物中存活细胞的数量，所述存在的ATP表示代谢活性细胞的存在。在处理后，将CellTiter-加入到处理孔中并在37℃孵育。使用Molecular DevicesSpectramax酶标仪测量发光值。

单一试剂研究

使细胞生长至70％融合，胰蛋白酶消化、计数，并以2.5x10³-5x10³细胞/孔的终浓度接种于96孔平底板中(第0天)。细胞在生长介质中孵育24小时。在第1天开始用测试试剂或标准试剂处理，并持续72小时。在第72小时的时间点，去除含有介质的处理。如上面所描述通过CellTiter-细胞活力测定来定量活细胞数。使用这些研究的结果以计算每种化合物的IC₅₀值(抑制50％对照的细胞生长的药物浓度)。

数据采集

对于单一试剂和组合研究，收集每个实验的数据，并使用以下计算将其表示为细胞生长％：

％细胞生长＝(f_测试/f_载剂)x100

其中f_测试为测试的样本的荧光，f_载剂为溶解药物的载剂的荧光。使用Prism 6软件(GraphPad)使用以下等式来生成剂量反应图和IC₅₀值：

Y＝(顶部-底部)/(1+10^((logIC50^-X)-斜率))

其中X为浓度的对数，以及Y为应答。Y从底部(Bottom)开始以S形状延伸至顶部(Top)。

结果

SCCOHT的特征在于SMARCA2和SMARCA4缺失。在细胞增殖测定中测试的三种SCCOHT细胞系(即，BIN67、COV434和SCCOHT-1)对(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺敏感，IC₅₀值为51-293nM(见表2)。

表2

在增殖测定中，发现SMARCA2和SMARCA4双缺陷型细胞系(即，A204、G401、G402、H522和A427)也对(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺敏感，IC₅₀值为50-200nM(见图1)。

实施例2：

使用(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺(即，GB-3103)体外处理BIN-67细胞显示浓度和时间依赖性诱导SMARCA2基因重新表达(参见图2)。

使用(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺(即，GB-3103)体外处理BIN-67细胞也显示浓度和时间依赖性诱导SMARCA2蛋白表达(参见图3)。

实施例3：

评估SCCOHT异种移植模型(BIN-67)中肿瘤的体内治疗。来自SCCOHT细胞系BIN-67的体内异种移植肿瘤使用(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺(即，GB-3103)给药60天。与载剂对照肿瘤相比，经治疗的肿瘤显示出统计学上显着的体积减小(参见图4)。

实施例4：

评估在恶性横纹肌样瘤异种移植模型(G401)中的肿瘤的体内治疗。来自MRT系G401的体内异种移植肿瘤使用(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺(即，GB-3103)给药30天。与载剂对照肿瘤相比，经治疗的肿瘤显示出统计学上显着的体积减小(参见图5)。

实施例5：

在高钙血症型卵巢小细胞癌(SCCOHT)和其它肿瘤中已经报道SWItch/SucroseNon-Fermentable(SWI/SNF)复合物中的SMARCA4/SMARCA2 ATP酶的双缺失。SMARCA4的缺失是失活突变的结果，而SMARCA2的缺失是不存在mRNA表达的结果。修复SMARCA4或SMARCA2可以抑制这些癌症的生长。发明人已经评估了新的、结构刚性和有效的I/IIb类HDAC抑制剂GB-3103对人SCCOHT和其它缺乏SWI/SNF复合物的细胞系的活性。GB-3103显示出对人SCCOHT系BIN67(51nM)、COV434(35nM)和SCCOHT-1(293nM)(参见图6)，以及对SWI/SNF缺陷型的横纹肌样和肺肿瘤系A204(95nM)、A427(174nM)、G401(138nM)、G402(71nM)、H522(102nM)具有有效的抗增殖活性(参见图1)，具有低nM的IC₅₀值。

用GB-3103处理人BIN67 SCCOHT细胞系72小时显示在mRNA和蛋白质水平上有效地浓度和时间依赖性诱导SMARCA2表达(参见图2和3)。与载剂对照相比，用5mg/kg的GB-3103以QD处理携带G401人恶性横纹肌样瘤异种移植物的小鼠导致70％的肿瘤生长抑制(TGI)(P<0.05)(参见图5)。用5mg/kg和10mg/kg的GB-3103以QD处理携带BIN67人肿瘤异种移植物的小鼠，在治疗开始后两周，分别导致平均肿瘤消退为26％和33％(参见图4)。

实施例6：

用GB-3103处理的BIN67细胞的RNA-Seq分析显示GB-3103影响DNA复制和mRNA稳定性以及诱导MHC II类蛋白的表达(参见图8和9)。

实施例7：

鉴于MHC II类表达的重要性和对检查点抑制剂疗法的应答，我们在同基因的CT-26小鼠结肠癌模型中测试GB-3103单独以及GB-3103与抗mPD-1和抗mPD-L1抗体组合的活性。GB-3103作为单一试剂诱导93％的TGI。然而，肿瘤生长在第15天恢复并持续增加直到第26天(参见图7)。出人意料地是，当GB-3103与抗mPD-1或抗mPD-L1(即针对PD-1或PD-L1的抗体)组合时导致已建立的CT-26肿瘤的消退，证明GB-3103有效调节免疫的活性以及与免疫检查点抑制剂组合实现的协同活性。

实施例8：

GB-3103的活性用HDAC同工型1-11确定，如表3所示。GB-3103是最新一代表观遗传免疫调节剂，是一种有效的HDAC同工型限制性抑制剂，所述抑制剂显示对HDAC3的有效次纳摩尔抑制和对HDAC6的不可逆的次纳摩尔抑制剂。与泛HDAC抑制相反，同工型限制性的HDAC抑制会撤销免疫赦免。

HDAC3已成为增强免疫功能的关键靶标：

·减少Treg抑制功能

·增加肿瘤上的自然杀伤细胞配体表达

·增强巨噬细胞宿主防御活性

·PD-L1表达的上调以及增加对抗PD1处理的敏感性

HDAC6抑制具有有效的免疫调节益处，包括：

·减少抗炎细胞因子IL-10的表达

·增强MHC I/II类基因的表达并增加已知肿瘤抗原的表达

·减少黑色素瘤患者的T细胞的免疫抑制并增强免疫功能

GB-3103对DNA修复发挥有效作用，并诱导I/II类MHC蛋白和多种肿瘤抗原的表达。GB-3103显示有效单一试剂消退BIN67 SCCOHT肿瘤，并抑制G-401肿瘤的生长，BIN67SCCOHT肿瘤和G-401肿瘤均含有SMARCA4/SMARCA2双缺失的ATP酶。GB-3103在免疫受损小鼠中显示出单独的有效活性以及与抗PD-1/抗PD-L1检查点调节剂组合的有效活性，并产生肿瘤记忆应答以防止肿瘤再生长。GB-3103正在推进IND支持研究用于患有基因限定的癌症的患者(包括那些携带SMARCA4/SMARCA2双缺失的患者)的临床开发。

GB-3103是一种对SWI/SNF缺陷型癌症具有有效的抗癌活性的新型表观遗传免疫调节剂。GB-3103在这些目前尚无治疗方法的基因限定的罕见癌症中的临床开发为突破性疗法认证提供独特的临床和监管机会，其批准可以基于较小的单臂临床研究。

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本发明可以在不脱离本发明的精神或本质特征的情况下以其它特定形式实施。因此，前述实施方案在所有方面都视为是阐明而非限制本文所述的发明。因此，本发明的范围由所附权利要求书而不是由前述的说明指示，并且在权利要求的等效性的含义和范围内的所有变化都旨在包含于权利要求中。