感冒软胶囊微生物限度检查供试液的制备方法
阅读说明：本技术 感冒软胶囊微生物限度检查供试液的制备方法 (Preparation method of microbial limit inspection test solution for cold soft capsules ) 是由 滕宝霞 于 2020-12-21 设计创作，主要内容包括：本发明公开了感冒软胶囊微生物限度检查供试液的制备方法。取感冒软胶囊10g加到灭菌的三角瓶中,加入pH为7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液100mL,加入酶、表面活性剂,放置在45℃温度中10分钟,溶解后用匀浆仪拍打1分钟,形成均匀的混悬液,制成1：10供试液；取感冒软胶囊囊壳5g加到灭菌的三角瓶中,加入pH为7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液50mL,加入酶、表面活性剂,放置在45℃温度中10分钟,溶解后用匀浆仪拍打1分钟,制成1：10供试液；感冒软胶囊供试液和感冒软胶囊囊壳供试液均形成稳定的混悬液,完成微生物限度检查试验。本发明在稀释剂中加入酶、表面活性剂,解决感冒软胶囊的囊壳不能够溶解的问题。(The invention discloses a preparation method of a microbial limit inspection test solution for a cold soft capsule. Adding 10g of cold soft capsule into a sterilized triangular flask, adding 100mL of sodium chloride-peptone buffer solution with the pH value of 7.0, adding enzyme and surfactant, standing at 45 ℃ for 10 minutes, dissolving, beating with a homogenizer for 1 minute to form uniform suspension, and preparing into a product 1:10 test solution; adding 5g of cold soft capsule shell into a sterilized triangular flask, adding 50mL of sodium chloride-peptone buffer solution with the pH value of 7.0, adding enzyme and surfactant, placing at 45 ℃ for 10 minutes, dissolving, beating with a homogenizer for 1 minute to obtain a soft capsule shell 1:10 test solution; the test solution for the cold soft capsule and the test solution for the cold soft capsule shell form stable suspension, and the microbial limit test is completed. According to the invention, the diluent is added with enzyme and surfactant, so that the problem that the capsule shell of the cold soft capsule can not be dissolved is solved.)
技术领域
本发明涉及感冒软胶囊微生物限度检查供试液的制备方法，属于实验仪器技术领域。
背景技术
感冒软胶囊现生产企业9家，8家企业没有提供微生物限度检查供试液制备方法，检验中按《中国药典》2015年版四部供试液制备常规方法；1家企业提供方法：取供试品5g，加入含溶化的5g司盘80、3g单硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80无菌混合物的烧杯中，用无菌玻棒搅拌成团后，慢慢加入45℃左右的pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液至100mL，边加边搅拌使之溶化，作为1∶20的供试液。常规供试液制备方法，感冒软胶囊的囊壳不能破碎，不能形成混悬液，另1种加入表面活性剂方法，单硬脂酸甘油酯不易融化，由于大量表面活性剂，混悬液粘稠，不易于进一步试验。
感冒软胶囊的囊壳由明胶、甘油、水以及遮光剂、抗氧剂等组成，在微生物限度检查中，囊壳不能破碎、溶解，不能形成混悬液，致使试验无法进行。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了感冒软胶囊微生物限度检查供试液的制备方法，在稀释剂中加入酶、表面活性剂，感冒软胶囊的囊壳能够溶解，按《中国药典》2015年版四部微生物限度检查方法，进行方法适用性研究，该种稀释剂对指示菌没有抑制作用，方法可行。
本发明通过以下技术手段解决上述技术问题：
本发明公开了感冒软胶囊微生物限度检查供试液的制备方法,其包括如下步骤：
1)感冒软胶囊供试液制备，取感冒软胶囊10g加到灭菌的三角瓶中，加入pH为7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液100mL,加入酶、表面活性剂，放置在45℃温度中10分钟，溶解后用匀浆仪拍打1分钟，形成均匀的混悬液，制成1： 10供试液；
2)感冒软胶囊囊壳供试液制备，取感冒软胶囊囊壳5g加到灭菌的三角瓶中，加入pH为7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液50mL,加入酶、表面活性剂，放置在45℃温度中10分钟，溶解后用匀浆仪拍打1分钟，制成1：10供试液；
3)感冒软胶囊供试液和感冒软胶囊囊壳供试液均形成稳定的混悬液，完成微生物限度检查试验。
所述步骤(1)和步骤(2)中氯化钠—蛋白胨缓冲液中氯化钠的浓度为 0.1-0.5mol/L。
所述步骤(1)和步骤(2)中酶为脂肪酶，表面活性剂为疏水性的表面活性剂任一种，加入酶质量为0.001-0.01g，加入的表面活性剂的质量为 0.5-1g。
药品微生物限度检查是药品检验的一项重要指标，科学、合理微生物限度检查方法，才能反映药品真实微生物污染状态，检验才有意义。按《中国药典》2015年版四部规定与要求，进行微生物限度方法适用性试验研究是建立药品微生物限度检验方法的必要过程，是方法可行的唯一途径。
感冒软胶囊为部颁药品标准中药成方制剂第六册收载的品种,由麻黄、桂枝、黄芩、防风、葛根等14味纯中药组成。其功效为散风解热,用于外感风寒引起的头痛身烧,鼻塞流涕,恶寒无汗,骨节酸痛,咽喉肿痛。麻黄的功效为能发汗,平喘,利水,治伤寒表实,发热恶寒无汗、头痛鼻塞、骨节疼痛；咳嗽气喘；风水浮肿,小便不利；风邪顽痹,皮肤不仁,风疹瘙痒。临床使用广泛。
感冒软胶囊的囊壳由明胶、甘油、水以及遮光剂、抗氧剂等组成，在微生物限度检查中，囊壳无法破碎、溶解，不能形成混悬液，致使试验无法进行。
2019年国家评价性检验，涉及感冒软胶囊9家生产企业。企业提供的微生物限度检查方法，供试液制备方法不适用，有些企业样品无法进行微生物限度检查，微生物限度检查结果无法反映药品微生物污染状况。
感冒软胶囊生产企业提供供试液制备方法，1种感冒软胶囊的囊壳不能破碎，不能形成混悬液，无法进行试验；另1种加入表面活性剂方法，单硬脂酸甘油酯不易融化，由于大量表面活性剂，混悬液粘稠，不易于进一步试验。
本发明在稀释剂保存在适当温度，使用时加入酶、表面活性剂，感冒软胶囊的囊壳能够溶解，按《中国药典》2015年版四部微生物限度检查方法，进行方法适用性研究，该种稀释剂对指示菌没有抑制作用，方法可行。
本发明解决感冒软胶囊供试液制备过程中，样品无法溶出的问题，形成混悬液，可以完成微生物限度检查试验。
本发明解决所有由明胶、甘油、水以及遮光剂、抗氧剂等组成的软胶囊供试液制备。包括其他品种药品、保健品、食品和化妆品的软胶囊制剂。
本发明的有益效果：在稀释剂中加入酶、表面活性剂，感冒软胶囊的囊壳能够溶解，按《中国药典》2015年版四部微生物限度检查方法，进行方法适用性研究，该种稀释剂对指示菌没有抑制作用，方法可行。
附图说明
附图1为北京同仁堂感冒胶囊供试液制备的照片(pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液)；
附图2为雪樱花感冒胶囊供试液制备的照片(pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液)；
附图3为天津中新感冒胶囊供试液制备的照片(pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液)；
附图4为天津中新感冒胶囊供试液制备的照片(pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液+吐温+甘油)；
附图5为山西黄河感冒胶囊供试液制备的照片(pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液)；
附图6为神威药业感冒胶囊供试液制备的照片(pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液)；
附图7为贵州金宇感冒软胶囊溶解液(A液)；
附图8为雪樱花感冒软胶囊溶解液(A液)；
附图9为山西黄河感冒软胶囊溶解液(A液)；
附图10为贵州顺健感冒软胶囊溶解液(A液)；
附图11天津中新药业感冒软胶囊溶解液(A液)；
附图12北京同仁堂感冒软胶囊溶解液(A液)；
附图13感冒软胶囊不同企业囊壳；
附图14不同厂家感冒软胶囊囊壳A液溶解；
附图15不同厂家感冒软胶囊囊壳A液溶解；
附图16不同厂家感冒软胶囊囊壳A液溶解；
附图17北京同仁堂的感冒软胶囊囊壳制备成的混悬制剂；
附图18吉林通化的感冒软胶囊囊壳制备成的混悬制剂；
附图19雪樱花的感冒软胶囊囊壳制备成的混悬制剂；
附图20为本发明的方法适用性回收率(1:10)；
附图21为本发明的方法适用性回收率(1:50)。
具体实施方式
以下将结合具体实施例对本发明进行详细说明，本实施例的感冒软胶囊微生物限度检查供试液的制备方法,其包括如下步骤：
1)感冒软胶囊供试液制备，取感冒软胶囊10g加到灭菌的三角瓶中，加入pH为7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液100mL,加入酶、表面活性剂，放置在45℃温度中10分钟，溶解后用匀浆仪拍打1分钟，形成均匀的混悬液，制成1： 10供试液；
2)感冒软胶囊囊壳供试液制备，取感冒软胶囊囊壳5g加到灭菌的三角瓶中，加入pH为7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液50mL,加入酶、表面活性剂，放置在45℃温度中10分钟，溶解后用匀浆仪拍打1分钟，制成1：10供试液；
3)感冒软胶囊供试液和感冒软胶囊囊壳供试液均形成稳定的混悬液，完成微生物限度检查试验。
所述步骤(1)和步骤(2)中氯化钠—蛋白胨缓冲液中氯化钠的浓度为 0.1-0.5mol/L。
所述步骤(1)和步骤(2)中酶为脂肪酶，表面活性剂为疏水性的表面活性剂任一种，加入酶质量为0.001-0.01g，加入的表面活性剂的质量为 0.5-1g。
实施例1
感冒软胶囊微生物限度检查供试液的制备方法,其包括如下步骤：
1)感冒软胶囊供试液制备，取感冒软胶囊10g加到灭菌的三角瓶中，加入pH为7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液100mL,加入酶、表面活性剂，放置在45℃温度中10分钟，溶解后用匀浆仪拍打1分钟，形成均匀的混悬液，制成1： 10供试液；
2)感冒软胶囊囊壳供试液制备，取感冒软胶囊囊壳5g加到灭菌的三角瓶中，加入pH为7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液50mL,加入酶、表面活性剂，放置在45℃温度中10分钟，溶解后用匀浆仪拍打1分钟，制成1：10供试液；
3)感冒软胶囊供试液和感冒软胶囊囊壳供试液均形成稳定的混悬液，完成微生物限度检查试验。
所述步骤(1)和步骤(2)中氯化钠—蛋白胨缓冲液中氯化钠的浓度为 0.2mol/L。
所述步骤(1)和步骤(2)中酶为淀粉酶，表面活性剂为聚乙二醇，加入淀粉酶质量为0.004g，加入的表面活性剂的质量为0.6g。
实施例2
感冒软胶囊微生物限度检查供试液的制备方法,其包括如下步骤：
1)感冒软胶囊供试液制备，取感冒软胶囊10g加到灭菌的三角瓶中，加入pH为7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液100mL,加入酶、表面活性剂，放置在45℃温度中10分钟，溶解后用匀浆仪拍打1分钟，形成均匀的混悬液，制成1： 10供试液；
2)感冒软胶囊囊壳供试液制备，取感冒软胶囊囊壳5g加到灭菌的三角瓶中，加入pH为7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液50mL,加入酶、表面活性剂，放置在45℃温度中10分钟，溶解后用匀浆仪拍打1分钟，制成1：10供试液；
3)感冒软胶囊供试液和感冒软胶囊囊壳供试液均形成稳定的混悬液，完成微生物限度检查试验。
所述步骤(1)和步骤(2)中氯化钠—蛋白胨缓冲液中氯化钠的浓度为 0.5mol/L。
所述步骤(1)和步骤(2)中酶为脂肪酶，表面活性剂为疏水性的表面活性剂任一种，加入酶质量为0.001-0.01g，加入的表面活性剂的质量为 0.5-1g。
实施例3
1.感冒软胶囊供试液制备，取感冒软胶囊10g加到灭菌的三角瓶中，加入pH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液100ml,加入酶、表面活性剂，放置在45℃中10分钟，溶解、用匀浆仪拍打1分钟，制成1：10供试液，
本发明在稀释剂中加入酶、表面活性剂，感冒软胶囊能够溶解，形成均匀的混悬液。分别选取的6个不同的厂家的感冒软胶囊，均能够实现分散和形成混悬液。分别为贵州金宇、雪樱花、山西黄河、贵州顺健、天津中新药业、北京同仁堂的感冒软胶囊。
2.感冒软胶囊囊壳供试液制备
取感冒软胶囊囊壳5g加到灭菌的三角瓶中，加入pH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液50ml,加入酶、表面活性剂，放置在45℃中10分钟，溶解、用匀浆仪拍打1分钟，制成1：10供试液。
本发明在稀释剂中加入酶、表面活性剂，感冒软胶囊囊壳能够溶解。分别选取的6个不同的厂家的感冒软胶囊，均能够实现分散和形成混悬液。分别为贵州金宇、雪樱花、山西黄河、贵州顺健、天津中新药业、北京同仁堂的感冒软胶囊。
3.感冒软胶囊微生物限度检查供试液制备方法比较
分别取感冒软胶囊10g加到灭菌的三角瓶中，加入pH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液100ml,另外1组再加入酶、表面活性剂，放置45℃中10分钟，溶解、用匀浆仪拍打1分钟，制成1：10供试液。
加入pH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液1组，感冒软胶囊囊壳明显存在，加入酶 1组，感冒软胶囊囊壳已经融化，制备成混悬制剂。
4.感冒软胶囊微生物限度检查方法建立
本发明在稀释剂中加入酶、表面活性剂，感冒软胶囊囊壳能够溶解。按《中国药典》2015年版四部微生物限度检查方法，进行方法适用性研究，该种稀释剂对指示菌没有抑制作用，方法可行。
实施例4
感冒软胶囊生产企业提供供试液制备方法，1种感冒软胶囊的囊壳不能破碎，不能形成混悬液，无法进行试验；另1种加入表面活性剂方法，单硬脂酸甘油酯不易融化，由于大量表面活性剂，混悬液粘稠，不易于进一步试验。如图1-6，分别是：北京同仁堂(pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液)；雪樱花(pH7.0 氯化钠蛋白胨缓冲液)；天津中新药业，pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液；天津中新药业，pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液+吐温+甘油；山西黄河(pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液)；神威药业(pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液)。
取感冒软胶囊10g加到灭菌的三角瓶中，加入pH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液100ml,加入酶、表面活性剂，放置在45℃中10分钟，溶解、用匀浆仪拍打1分钟，制成1：10供试液，
本发明在稀释剂中加入酶、表面活性剂，感冒软胶囊能够溶解，形成均匀的混悬液。如图7-12，分别为贵州金宇(A液)；雪樱花(A液)；山西黄河 (A液)；贵州顺健(A液)；天津中新药业(A液)；北京同仁堂(A液)。
取感冒软胶囊囊壳5g加到灭菌的三角瓶中，加入pH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液50ml,加入酶、表面活性剂，放置在45℃中10分钟，溶解、用匀浆仪拍打1分钟，制成1：10供试液。
本发明在稀释剂中加入酶、表面活性剂，感冒软胶囊囊壳能够溶解。见图13-16。分别是：感冒软胶囊不同企业囊壳；感冒软胶囊囊壳A液溶解；感冒软胶囊囊壳A液溶解；感冒软胶囊囊壳A液溶解。
感冒软胶囊微生物限度检查供试液制备方法比较，
分别取感冒软胶囊10g加到灭菌的三角瓶中，加入pH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液100ml,另外1组再加入酶、表面活性剂，放置在45℃中10分钟，溶解、用匀浆仪拍打1分钟，制成1：10供试液。加入pH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液1组，感冒软胶囊囊壳明显存在，加入酶1组，感冒软胶囊囊壳已经融化，制备成混悬制剂。见图17-19。分别为北京同仁堂；吉林通化；雪樱花。
感冒软胶囊微生物限度检查方法建立。
本发明在稀释剂中加入酶、表面活性剂，感冒软胶囊囊壳能够溶解。按《中国药典》2015年版四部微生物限度检查方法，进行方法适用性研究，该种稀释剂对指示菌没有抑制作用，方法可行。见图20和21。分别是方法适用性回(1:10)、方法适用性回收率(1:50)。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
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