一种取代丁烯酰胺的应用
阅读说明：本技术 一种取代丁烯酰胺的应用 (Application of substituted butenamide ) 是由 唐海涛 葛海涛 易年红 张玉强 曹苏闽 于 2019-11-27 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种取代丁烯酰胺的应用,具体为(E)-N-(3-氰基-7-乙氧基-4-(3-乙炔基苯基氨基)喹啉-6-基)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺及其药学上可接受的盐、溶剂化合物在制备治疗罕见EGFR突变介导的癌症药物中的应用。(The invention relates to application of substituted butenamide, in particular to application of (E) -N- (3-cyano-7-ethoxy-4- (3-ethynylphenylamino) quinolin-6-yl) -4- (dimethylamino) but-2-enamide and pharmaceutically acceptable salts and solvent compounds thereof in preparing a medicine for treating rare EGFR mutation mediated cancer.)
技术领域
本申请涉及医药技术领域，具体涉及一种取代丁烯酰胺的应用。
背景技术
非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer，NSCLC)是一种严重威胁人类健康的恶性肿瘤，尽管手术和化疗技术不断提高，但患者的预后仍较差，5年存活率小于20％。目前，以人表皮生长因子受体(epitheliumgrowthfactorrecptor，EGFR)为靶点的分子靶向治疗已成为治疗NSCLC最重要的方式。
EGFR是原癌基因C-erbB-1的表达产物，基因定位于第7号染色体上，属于跨膜受体酪氨酸激酶。EGFR与其配体结合后，能激活下游信号通路，调节肿瘤细胞的增殖、分化、血管生成及凋亡抑制，从而调控一系列肿瘤生物学行为。
目前临床上使用的针对EGFR的靶向药物是EGFR酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)，EGFR-TKI通过抑制EGFR自身磷酸化而阻断EGFR信号传导通路，从而抑制肿瘤细胞增殖分化，实现靶向治疗。
EGFR突变可以发生在EGFR序列的任何部位。通常，EGFR突变株源自激酶结构域(即EGFR序列中的外显子18-24)或胞外结构域(即EGFR序列中的外显子2-16)的突变。外显子18中的一个或多个点突变包括L688P、V689M、P694L/S、N700D、L703V、E709K/Q/A/G/V、I715S、L718P、G719C/A/S/R或S720P/F。外显子19中的缺失包括delG719、delE746_E749、delE746_A750、delE746_A750insRP、delE746_A750insQP、delE746_T751、delE746_T751insA/I/V、delE746_T751insVA、delE746_S752、delE746_S752insA/V/D、delE746_P53insLS、delL747_E749、delL747_A750、delL747_A750insP、delL747_T751、delL747_T751insP/S/Q、delL747_T751insPI、delL747_S752、delL747_S752insQ、delL747_P753、delL747_P753insS/Q、delL747_L754insSR、delE749_A750、delE749_A750insRP、delE749_T751、delT751_I759、delT751_I759insS/N或delS752_I759。外显子19中的复制包括K739_I44dupKIPVAI。外显子19中的点突变包括L730F、W731Stop、P733L、G735S、V742A、E746V/K、A750P、T751I、S752Y、P753S、A754P或D761Y。外显子20中的框内插入包括D761_E762insEAFQ、A767_S768insTLA、V769_D770insY、V769_D770insCV、V769_D770insASV、D770_N771insD/G、D770_N771insNPG、D770_N771insSVQ、P772_H773insN/V、P772_H773insYNP或V774_C775insHV。外显子20中的缺失包括delM766_A767、delM766_A767insAI、delA767_V769、delD770或delP772_H773insNP。外显子20中的复制包括S768_D770dupSVD、A767_V769dupASV或H773dupH。外显子20中的点突变包括D761N、A763V、V765A/M、S768I、V769L/M、S768I、P772R、N771T、H773R/Y/L、V774M、R776G/H/C、G779S/F、T783A、T784F、L792P、L798H/F、T790M、R803W、K806E或L814P)。外显子21中的点突变包括G810S、N826S、L833V、H835L、L838V、A839T、K846R、T847I、H850N、V851I/A、I853T、L858M/R、A859T、L861Q/R、G863D、A864T、E866K或G873E。
EGFR-TKI的疗效与EGFR基因突变状况密切相关，EGFR基因突变主要集中在外显子18～21上，包括敏感突变和耐药突变。
在中国肺癌患者中，EGFR突变率占30-50％，其中19和21号(L858R,L861I)外显子突变率占总突变率的90％左右，18号外显子突变占总突变率的5％左右，20号外显子上T790M突变占突变率的5％左右。其中，19号外显子缺失和L858R突变之外的称之为罕见突变，如L861Q，G719X，S768I等。
CN102625797A公开了(E)-N-(3-氰基-7-乙氧基-4-(3-乙炔基苯基氨基)喹啉-6-基)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺对EGFR常见突变体如EGFR突变体L858R/T790M、EGFR突变体E746-A750的作用，但是未记载对罕见突变如L861Q，G719X，S768I等的作用。
明确需要抑制具有罕见EGFR突变(如L861Q、G719X、S768I)的细胞的新方法，治疗与这种突变相关癌症的新疗法将具有深远的利益。
发明内容
本发明的目的是提供一种取代丁烯酰胺的应用，具体提供化合物(E)-N-(3-氰基-7-乙氧基-4-(3-乙炔基苯基氨基)喹啉-6-基)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺及其药学上可接受的盐、溶剂化合物的新的应用。
本发明所述化合物(E)-N-(3-氰基-7-乙氧基-4-(3-乙炔基苯基氨基)喹啉-6-基)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺及其药学上可接受的盐、溶剂化合物具有良好的对罕见EGFR突变如L861Q、G719X、S768I介导的癌症的抑制活性。
所述化合物(E)-N-(3-氰基-7-乙氧基-4-(3-乙炔基苯基氨基)喹啉-6-基)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺结构式如下式所示：
本发明所述化合物(E)-N-(3-氰基-7-乙氧基-4-(3-乙炔基苯基氨基)喹啉-6-基)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺及其药学上可接受的盐、溶剂化合物可以抑制表达EGFR突变株的细胞增殖。
进一步的，本发明提供(E)-N-(3-氰基-7-乙氧基-4-(3-乙炔基苯基氨基)喹啉-6-基)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺及其药学上可接受的盐、溶剂化合物在制备治疗罕见EGFR突变介导的癌症药物中的应用。
本发明的另一方面是提供一种用于通过向有需要的受试者投与治疗有效量的(E)-N-(3-氰基-7-乙氧基-4-(3-乙炔基苯基氨基)喹啉-6-基)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺及其药学上可接受的盐、溶剂化合物来治疗或缓解受试者的罕见EGFR突变介导的癌症的症状的方法。
本发明所述罕见EGFR突变为EGFR19外显子缺失和L858R突变之外的突变，包括EGFR突变体L861Q、G719X和/或S768I，可以为敏感突变(非耐药性突变)或耐药突变。
本发明所述“EGFR突变介导的癌症”是指以改变EGFR核酸分子或多肽的生物活性的EGFR基因突变(包括本文提到的具体突变)为特征的肿瘤。EGFR突变介导的肿瘤可出现在任何组织，包括脑、血液、结缔组织、肝、口、肌肉、脾、胃、睾丸和气管。EGFR突变介导的癌症包括非小细胞肺癌(NSCLS)，包括一个或多个鳞状细胞癌、腺癌、腺癌、细支气管肺泡癌(BAC)、局灶侵入性BAC，具有BAC特征的腺癌，以及大细胞癌；神经肿瘤，如胶质母细胞瘤；胰腺癌；头颈癌症(例如，鳞状细胞癌)；乳腺癌；结肠直肠癌；上皮癌，包括鳞状细胞癌；卵巢癌；前列腺癌；腺癌；以及包括EGFR介导的癌症。
本发明所述的EGFR突变介导的癌症进一步的为非小细胞肺癌。
本发明所述“抑制表达EGFR突变株的细胞增殖”是指适度地减缓、停止或逆转表达EGFR的细胞在体外或在体内的生长速率。理想的是，当使用合适的测定细胞生长速率的方法进行测定时(例如，本文所述的细胞生长测定法)，生长速率至少减慢10％、20％、30％、50％或甚至70％。EGFR突变株可以是本文所述的任何EGFR突变株。
本发明所述药学上可接受的盐包括经管理机构批准的常用于形成碱金属盐和形成游离酸或游离碱的加成盐的盐。盐是通过离子缔合、电荷-电荷相互作用、共价键合、络合、配位等作用形成的。只要盐是药学上可接受的，则其性质不是关键性的。
所述药学可接受的盐的类型包括但不限于通过使所述化合物的游离碱形式与以下药学可接受的酸反应形成的酸加成盐：无机酸，例如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸等；或有机酸，例如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、葡糖酸、谷氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸等。
这样的盐的其他实例可参见Berge等人，J.Pharm.Sci，66，1(1977)。在一些实施方案中，使用常规方法形成盐。例如，通过在期望的温度下，通常在加热下(取决于溶剂的沸点)将期望的溶剂或溶剂组合中的期望的化合物游离碱与期望的化学计算量的磷酸混合来制备本发明化合物的磷酸盐。在一实施方案中，在(缓慢或迅速)冷却后所述盐沉淀并结晶(即如果具有结晶性质)。另外，本文还包括本发明化合物的半盐、单盐、二盐、三盐和多盐形式。相似地，本文还包括所述化合物、其盐或半水合物、一水合物、二水合物、三水合物和多水合物形式。
在一些实施方案中，所述化合物是盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐或偏磷酸盐、乙酸盐、丙酸盐、己酸盐、环戊烷丙酸盐、乙醇酸盐、丙酮酸盐、乳酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、富马酸盐、三氟乙酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸盐、肉桂酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、1，2-乙二磺酸盐、2-羟基乙磺酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐、2-萘磺酸盐、4-甲基二环-[2.2.2]辛-2-烯-1-羧酸盐、葡庚糖酸盐、4′4-亚甲基双-(3-羟基-2-烯-1-羧酸)盐、3-苯基丙酸盐、三甲基乙酸盐、叔丁基乙酸盐、月桂基硫酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、羟基萘甲酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、粘康酸盐、丁酸盐、苯基乙酸盐、苯基丁酸盐、丙戊酸盐等。在优选的实施方案中，化合物是盐酸盐、苯磺酸盐、甲磺酸盐、马来酸盐，或其水合物，例如一水合物。
本发明所述的化合物(E)-N-(3-氰基-7-乙氧基-4-(3-乙炔基苯基氨基)喹啉-6-基)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺及其药学上可接受的盐、溶剂化合物在给予患者时，与药学上可接受的辅料形成药物组合物，并制成合适的药物制剂形式进行给药。
本发明使用的药物组合物中，所述药学上可接受的辅料包括载体、赋形剂、粘合剂、填充剂、助悬剂、芳香剂、甜味剂、崩解剂、分散剂、表面活性剂、润滑剂、着色剂、稀释剂、增溶剂、湿润剂、增塑剂、稳定剂、渗透促进剂、润湿剂、消泡剂、抗氧化剂、防腐剂或者一种或多种它们的组合。所述药物组合物有助于将所述化合物给药至有机体。在实施本文提供的治疗或使用方法时，以药物组合物的形式将治疗有效量的本文所述化合物给药至患有待治疗的疾病、病症或病况的哺乳动物。在一些实施方案中，所述哺乳动物是人。治疗有效量可随疾病的严重性、个体的年龄和相对健康状况、所用化合物的效力和其他因素而大幅变化。所述化合物可单独使用或者作为混合物的组分与一种或多种治疗剂组合使用。
本发明所述药物制剂包括但不限于水性液体分散体、自乳化分散体、固体溶液剂、脂质体分散体、气雾剂、固体剂型、散剂、速释制剂、控释制剂、崩解(fastmelt)制剂、片剂、胶囊剂、丸剂、延迟释放制剂、延长释放制剂、脉冲释放制剂、多颗粒制剂以及混合型速释和控释制剂。
患者给药化合物的量和用本发明的化合物和/或组合物治疗癌症的剂量方案取决于多种因素，包括个体的年龄、体重、性别和医疗状况，疾病类型，疾病的严重性，给药途径和频率以及所使用的具体化合物。因此，剂量方案可大幅度变化，但是能够使用标准方法常规性地确定。在一些实施方案中，约0.01-500mg/kg、有利地约0.01-50mg/kg、更有利地约0.01-约30mg/kg、更有利地约0.1-10mg/kg并且甚至更有利地约0.5-3mg/kg体重的日剂量是适当的，并且应对于本文公开的所有使用方法是可用的。该日剂量可以每日1至4次剂量给药。在一些实施方案中，患者给药有效治疗量为50-250mg，优选每日一次100mg，连续给药28天。
患者给药适合的给药途径包括但不限于口服、静脉内、直肠、气雾剂、肠胃外、眼、肺、经粘膜、经皮、阴道、耳、鼻和局部给药。另外，仅举例而言，肠胃外递送包括肌内、皮下、静脉内、髓内注射以及鞘内、直接心室内、腹膜内、淋巴管内和鼻内注射。
本发明所述的化合物(E)-N-(3-氰基-7-乙氧基-4-(3-乙炔基苯基氨基)喹啉-6-基)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺及其药学上可接受的盐、溶剂化合物对罕见EGFR突变介导的癌症具有突出的治疗效果，与一般化合物对罕见EGFR突变介导的癌症劣于非一般非罕见EGFR突变介导的癌症不同，本发明所述化合物相对于T790M或L858R/T790M突变等非罕见EGRR突变而言，具有更良好的治疗效果。
具体实施方式
以下结合实施例用于进一步描述本发明，但这些实施例并非限制着本发明的范围。
本申请实施例涉及的(E)-N-(3-氰基-7-乙氧基-4-(3-乙炔基苯基氨基)喹啉-6-基)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺按照WO2010151710所述方法制备得到，(E)-N-(3-氰基-7-乙氧基-4-(3-乙炔基苯基氨基)喹啉-6-基)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺马来酸盐一水合物按CN104513200A所述方法制备得到，其亦命名为(E)-N-{4-[(3-乙炔基苯氨基)-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]}-4-(二甲基氨基)-2-丁烯酰胺的马来酸盐。
实施例1蛋白激酶的IC50测定
本实施例测试的化合物为(E)-N-(3-氰基-7-乙氧基-4-(3-乙炔基苯基氨基)喹啉-6-基)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺。
1.实验设计
测试化合物对蛋白激酶的IC50，受试物设10个半对数浓度(1×10-06M到3×10- 11M)，单孔，测定IC50。
2.受试物
受试物为两管固体，ProQinase转移至-20℃待后续使用。
试验前，用100％DMSO配制成1×10-03M受试物的储存液并进一步稀释至1×10-04M/100％DMSO。
用100％DMSO将受试物半对数稀释到96孔板，配制成从1×10-04M到3×10-09M。使用前，受试物与水1:10稀释，获得1×10-05M到3×10-10M的受试物样品,含10％DMSO。
每个浓度加5μl到试验中(见第3部分蛋白激酶试验)，试验终体积为50μl。受试物以1×10-06M到3×10-11M的浓度测定。所有反应孔中的DMSO终浓度都为1％。
3.蛋白激酶试验
用放射测定的蛋白激酶试验(活性测定法)测定8种蛋白激酶的活性。所有试验用50μl反应体积，在Perkin Elmer(Boston,MA,USA)的96孔板内完成。试剂、样品等分4步加入：
10μl非放射的ATP水溶液；
25μl缓冲液/[γ-33P]-ATP混合液；
5μl受试物，含10％DMSO；
10μl酶/底物混合物。
底物为Poly(Glu,Tyr)4:1,代号SIG_20K5903。
所有试验包括70mM HEPES-NaOH pH7.5，3mM MgCl2，3mM MnC，3μM正钒酸钠盐，1.2mM DTT，ATP(不定，与各个酶的表观ATP-Km有关，见表1)，[γ-33P]-ATP(每孔约8×1005cpm)，蛋白激酶(不定，见表1)，和底物(不定，见表1)。
试验中所用酶和底物的浓度见表1：
表1所用酶和底物的浓度
反应体系于39℃孵育60分钟。用50μl 2％(v/v)H3PO4终止反应，板子用200μl0.9％(w/v)NaCl洗两次。微孔板闪烁计数仪(Microbeta,Wallac)测定33Pi(以"cpm"计)的酶活依赖性转移。
所有试验都用BeckmanCoulterBiomek 2000/SL机器人完成。
4.数据分析
空白对照设3个反应孔，不加酶，取3个反应孔的cpm值中位数。这个值反映了在没有蛋白激酶、底物时，放射性的非特异性结合。另外，设3个反应孔，不加受试物，取3个反应孔的cpm值中位数，为阴性对照，即没有任何抑制剂下的酶活力。阴性对照与空白差值即为每个酶的100％活力。
与阴性对照扣除空白值一样，对应的10个受试物的值也应减去空白值。每个孔的残留酶活力按下面的公式计算：残留酶活(％)＝100×[(受试物cpm值–空白对照)/(阴性对照–空白对照)]。
每个受试物都设了10个浓度作用于每个酶，因此数据分析基于这10个残留酶活值。用Prism5.04(Graphpad,San Diego,California,USAwww.graphpad.com)，固定最大值100％，最小值0％，进行S曲线拟合计算IC50。
5.结果
表2中列出了被测化合物作用于8个激酶的IC50值。
表2被测化合物作用于8个激酶的IC50值
以上数据表明，被测试化合物对罕见突变的的抑制效果优于一般的非罕见突变抑制效果。实施例2治疗局部晚期或转移性非小细胞肺癌的探索性临床研究试验
一、受试者选择标准
1、入选标准：
年龄18-75(含18、75)周岁，性别不限。经病理组织学和/或细胞学确认的局部晚期或转移性NSCLC患者。预期生存时间>3个月。患者的EGFR具有L861Q、G719X、S768I突变中的一种或几种，且不具有T790M原发性(primary/de novo)突变、20号外显子插入突变、L858R突变。
2、排除标准：
如果患者满足下列任何条件，则不能参加本试验：
(1)入组前接受过任何表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)抗肿瘤治疗。
(2)入组前4周内接受过放疗、化疗或内分泌治疗、免疫治疗等抗肿瘤治疗(口服氟尿嘧啶类药物为2周；丝裂霉素和亚硝基脲类为6周)。
二、给药方法与剂量
(E)-N-(3-氰基-7-乙氧基-4-(3-乙炔基苯基氨基)喹啉-6-基)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺马来酸盐一水合物胶囊，餐前至少1小时或餐后2小时口服；每日一次100mg，疗程为28天。自给药开始每四周为一个周期。
三、治疗效果
以上治疗结果表明，具有罕见EGFR突变介导的癌症患者，治疗到达第二个周期末时均表现出良好的治疗效果。
- 上一篇：一种医用注射器针头装配设备
- 下一篇：一种取代丁烯酰胺药物组合物及其制备方法