具体实施方式

本文引用的所有专利、专利申请和出版物均以引用的方式整体并入本文。

本发明提供了适用于口服给药的制剂，该制剂包含：含有CpG二核苷酸并且具有6至40个核苷酸的寡核苷酸，优选为包含序列5’-GGAACAGTTCGTCCATGGC-3’(SEQ ID NO：2)的寡核苷酸；以及丙二醇辛酸酯。

如本文所用，术语“寡核苷酸”是指由多个连接的单个核苷单元形成的多核苷。这种寡核苷酸可从现有的核酸来源获得，包括基因组DNA或cDNA、质粒、载体或细菌DNA，但优选通过合成方法产生。核苷残基可通过许多已知的核苷间键中的任何核苷间键彼此偶联。这种核苷间键包括但不限于天然核苷间磷酸二酯键或实际上修饰的核苷间的，例如但不限于硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸烷基酯、烷基硫代磷酸酯、磷酸三酯、氨基磷酸酯、硅氧烷、碳酸酯、烷氧碳酰、氨基乙酸酯(acetamidate)、氨基甲酸酯、吗啉(morpholino)、硼烷(borano)、硫醚、桥连的氨基磷酸酯、桥连的亚甲基膦酸酯、桥连的硫代磷酸酯和砜核苷间键。术语“寡核苷酸”还涵盖具有一个或多个立体专一性核苷间键的多核苷(例如(Rp)-或(Sp)-硫代磷酸酯、磷酸烷基酯或磷酸三酯键)。如本文所用，术语“寡核苷酸”和“二核苷酸”明确意图包括具有任何这种核苷间键的多核苷和二核苷，无论该键是否包含磷酸基团。在某些优选的实施方式中，这些核苷间键可以是磷酸二酯键、硫代磷酸酯键或二硫代磷酸酯键或其组合。

术语“寡核苷酸”也涵盖具有另外的取代基的多核苷，该另外的取代基包括但不限于：蛋白质基团、亲脂基团、嵌入剂、二胺、叶酸、胆固醇和金刚烷。术语“寡核苷酸”还涵盖任何其他含核碱基的聚合物，包括但不限于：肽核酸(PNA)、具有磷酸基团的肽核酸(PHONA)、锁核酸(LNA)、吗啉代主链寡核苷酸和具有烷基接头或氨基接头的主链部分的寡核苷酸。烷基接头可以是支链的或直链的、取代的或未取代的，以及手性纯的或外消旋的混合物。

本发明的寡核苷酸可包括天然存在的核苷、修饰的核苷或其混合物。如本文所用，术语“修饰的核苷”是包括修饰的杂环碱基、修饰的糖部分或其组合的核苷。如本文所述，修饰的核苷可以是非天然嘧啶或嘌呤核苷。修饰的核苷可以是2’-取代的核糖核苷、阿拉伯核苷或2’-脱氧-2’-取代的阿拉伯糖苷。

如本文所用，术语“杂合寡核苷酸”是具有不止一种核苷的寡核苷酸。

在本文中，术语“寡核苷酸”包括杂合寡核苷酸和嵌合寡核苷酸。“嵌合寡核苷酸”是在其序列结构内具有不止一种类型的核苷间键的寡核苷酸。这种嵌合寡核苷酸的一个优选实例是包含硫代磷酸酯、磷酸二酯或二硫代磷酸酯区域和非离子键(例如磷酸烷基酯键或烷基硫代磷酸酯键)的嵌合寡核苷酸(US5635377和US5366878)。

在本文中，术语“寡核苷酸”也包括环化变体和环状寡核苷酸。

优选地，寡核苷酸包含至少一种天然存在的磷酸二酯，或一种修饰的硫代磷酸酯，或二硫代磷酸酯核苷间键，然而也考虑了以下优选的键或实际上的主链修饰，包括但不限于：甲基膦酸酯、甲基硫代膦酸酯、磷酸三酯、硫代磷酸三酯、硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、三酯前药、砜、磺酰胺、氨基磺酸酯、甲缩醛、N-甲基羟胺、2’OMe(氧甲基在2’位)、碳酸盐、氨基甲酸酯、吗啉代、硼烷代膦酸酯、氨基磷酸酯，尤其是伯氨基-氨基磷酸酯、N3氨基磷酸酯和N5氨基磷酸酯，以及立体专一性键(例如(Rp)-或(Sp)-硫代磷酸酯、烷基膦酸酯或磷酸三酯键)。

核苷的糖部分可为非天然存在的糖部分。在本文中，“天然存在的糖部分”是天然地作为核酸的一部分存在的糖部分，例如核糖和2’-脱氧核糖，以及“非天然存在的糖部分”是指并非天然地作为核酸的一部分存在的，但可在寡核苷酸的主链中使用的任何糖，例如但不限于己糖。阿拉伯糖和阿拉伯糖衍生物是优选的糖部分的实例。

修饰的或取代的寡核苷酸由于期望的性质，例如增强的细胞摄取、增强的对核酸靶标的亲和力和增加的在核酸酶存在下的稳定性，而通常优于天然形式。寡核苷酸通常由多于十(10)个直到一百(100)个或更多个脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸组成，尽管优选为约六(6)个至四十(40)个，最优选为约八(8)个至约二十(20)个。确切的大小将取决于许多因素，而这些因素转而取决于寡核苷酸的最终功能或用途。寡核苷酸可以以任何方式产生，包括化学合成、DNA复制、反转录或其组合。

CpG二核苷酸是通过磷酸二酯键(即“p”)与鸟嘌呤三磷酸脱氧核苷酸(即“G”)连接的胞嘧啶三磷酸脱氧核苷酸(即“C”)。使CpG二核苷酸的C部分和G部分定向，以使C部分更靠近寡核苷酸的5’端，而G部分更靠近寡核苷酸的3’端。CpG二核苷酸也称为“CpG基序”或“CG二核苷酸”。CpG二核苷酸可以是甲基化的或未被甲基化的，但是优选是未被甲基化的。

在本发明的一个方面，寡核苷酸是具有序列5’-Xm-CG-Yn-3’的寡核苷酸，其中如果所述寡核苷酸的总长度为6至40个核苷酸，X为A、T、C或G，Y为A、T、C或G，m为0-38，n为0-38。

通常，在具有上述(5’-Xm-CG-Yn-3’)序列的寡核苷酸中，如果所述寡核苷酸的总长度为6至40个核苷酸，则m为0-35且n为0-35，m为0-30且n为0-30，m为0-25且n为0-25，m为0-20且n为0-20，m为0-15且n为0-15，m为0-12且n为0-12，m为0-10且n为0-10，m为0-8且n为0-8，m为0-6且n为0-6，或m为0-4且n为0-4。

优选地，在具有上述(5’-Xm-CG-Yn-3’)序列的寡核苷酸中，如果所述寡核苷酸的总长度为6至40个核苷酸，则m为1-35且n为1-35，m为1-30且n为1-30，m为1-25且n为1-25，m为1-20且n为1-20，m为1-15且n为1-15，m为1-12且n为1-12，m为1-10且n为1-10，m为1-8且n为1-8，m为1-6且n为1-6，或m为1-4且n为1-4。

更优选地，在具有上述(5’-Xm-CG-Yn-3’)序列的寡核苷酸中，如果所述寡核苷酸的总长度为6至40个核苷酸，则m为2-35且n为2-35，m为2-30且n为2-30，m为2-25且n为2-25，m为2-20且n为2-20，m为2-15且n为2-15，m为2-12且n为2-12，m为2-10且n为2-10，m为2-8且n为2-8，m为2-6且n为2-6，m为2-4且n为2-4，或m为2且n为2。

通常，寡核苷酸中的至少一个CG二核苷酸是未甲基化的。

因此，寡核苷酸可以具有序列5’-GGAACAGTTCGTCCATGGC-3’(SEQ ID NO：2)，其中CG二核苷酸是未甲基化的。可选择地，寡核苷酸可以具有序列5’-GGAACAGTTCGTCCATGGC-3’(SEQ ID NO：2)，其中CG二核苷酸是甲基化的，优选其中CG二核苷酸在一个或两个核苷酸的核糖单元上是甲基化的。

通常，所述寡核苷酸中的至少一个核苷酸具有主链修饰。所述主链修饰可以位于所述寡核苷酸的5’端和/或3’端。

通常，磷酸主链修饰可以发生在5’-核苷酸间键或3’-核苷酸间键上。修饰可以发生在沿着所述寡核苷酸的全长的任何位置的一个或多个核苷酸处。

通常，所述寡核苷酸中的至少一个核苷酸具有磷酸主链修饰。主链修饰通常是硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯修饰。

寡核苷酸可以包含至少一种修饰的糖部分核碱基。修饰的糖部分可以是2’-O-甲氧基乙基糖部分。

在序列中，例如以下序列中，硫代磷酸酯键可以用星号(*)示出：5’-G*G*A*ACAGTTCGTCCAT*G*G*C-3’(SEQ ID NO：1)，其中CG二核苷酸是未甲基化的。

优选地，所述寡核苷酸具有序列5’-G*G*A*ACAGTTCGTCCAT*G*G*C-3’(SEQ ID NO：1)，其中CG二核苷酸是未甲基化的。因此，优选地，所述寡核苷酸是可比托莫德。

所述制剂可以包含、基本上由以下组成或由以下组成：含有CpG二核苷酸并具有6至40个核苷酸的寡核苷酸，优选为包含SEQ ID NO：2的寡核苷酸，更优选为可比托莫德；以及酯，该酯为丙二醇与辛酸的单酯和/或二酯，或甘油与辛酸的单酯和/或二酯丙二醇辛酸酯。

含有CpG二核苷酸并具有6至40个核苷酸的寡核苷酸，优选为包含SEQ ID NO：2的寡核苷酸，更优选为可比托莫德，可以以占制剂重量的1％至50％，或2％至40％，或3％至30％，或4％至25％，在5％至20％，10％至15％，或11％至14％的量的可比托莫德存在。含有CpG二核苷酸并具有6至40个核苷酸的寡核苷酸，优选为包含SEQ ID No：2的寡核苷酸，更优选为可比托莫德，在制剂中可以以约5wt％、约6wt％、约7wt％、约8wt％、约9wt％、约10wt％、约11wt％、约11.5wt％、约12wt％、约13wt％、约14wt％或约15wt％的量存在。

在本发明的组合物中使用的酯是丙二醇(也称为丙烷-1，2-二醇)与辛酸的单酯和/或二酯，或甘油(也称为丙烷-1，2，3-三醇)与辛酸的单酯和/或二酯。辛酸也称为羊脂酸(Octanoic acid)。因此，该酯为(i)丙二醇单辛酸酯和/或丙二醇二辛酸酯，或(ii)单辛酸甘油酯和/或二辛酸甘油酯。

在丙二醇与辛酸的单酯中，酯键可以在丙二醇(2-羟丙基辛酸酯)上的1位上。在丙二醇与辛酸的单酯中，酯键可以在丙二醇(1-羟基丙-2-基辛酸酯)上的2位上。

通常，本发明中使用的酯是丙二醇的单酯和/或二酯(即丙二醇单辛酸酯[丙二醇和辛酸的单酯]和/或丙二醇二辛酸酯[丙二醇和辛酸的二酯])。因此，优选地，酯为丙二醇辛酸酯。

该酯可以包含丙二醇单辛酸酯，基本上由丙二醇单辛酸酯组成或由丙二醇单辛酸酯组成。可选择地，该酯可以包含丙二醇二辛酸酯，基本上由丙二醇二辛酸酯组成或由丙二酸二辛酸酯组成。

然而，特别优选的是，该酯包括丙二醇单辛酸酯和丙二醇二辛酸酯的组合。通常，酯包含相对于该酯的总重量的10wt％至90wt％的丙二醇单辛酸酯和10wt％至90wt％的丙二醇二辛酸酯。优选地，酯包含相对于该酯的总重量的55wt％至80wt％的丙二醇单辛酸酯和20wt％至45wt％的丙二醇二辛酸酯。更优选地，酯包含相对于该酯的总重量的60wt％至70wt％的丙二醇单辛酸酯和30wt％至40wt％的丙二醇二辛酸酯。

酯在制剂中可以以占制剂重量的50％至99％，或60％至98％，或70％至97％，或75％至96％，或80％至95％，或80％至90％，或85％至90％的量存在。例如，酯可以以占制剂重量的约95％、约94％、约93％、约92％、约91％、约90％、约89％、约88％、约87％、约86％、约85％、约84％、约83％或约82％的量存在。

制剂可以包含：1wt％至50wt％的含有CpG二核苷酸并具有6至40个核苷酸的寡核苷酸，优选为含有SEQ ID NO：2的寡核苷酸，更优选为可比托莫德；以及50wt％至99wt％的如本文定义的酯。制剂可以包含：2wt％至40wt％的含有CpG二核苷酸并具有6至40个核苷酸的寡核苷酸，优选为含有SEQ ID NO：2的寡核苷酸，更优选为可比托莫德；以及60wt％至98wt％的如本文定义的酯。制剂可以包含：3wt％至30wt％的含有CpG二核苷酸并具有6至40个核苷酸的寡核苷酸，优选为含有SEQ ID NO：2的寡核苷酸，更优选为可比托莫德；以及70wt％至97wt％的如本文定义的酯。制剂可以包含：4wt％至25wt％的含有CpG二核苷酸并具有6至40个核苷酸的寡核苷酸，优选为含有SEQ ID NO：2的寡核苷酸，更优选为可比托莫德；以及75wt％至96wt％的如本文定义的酯。制剂可以包含：5wt％至20wt％的含有CpG二核苷酸并具有6至40个核苷酸的寡核苷酸，优选为含有SEQ ID NO：2的寡核苷酸，更优选为可比托莫德；以及80wt％至95wt％的如本文定义的酯。制剂可以包含：10wt％至15wt％的含有CpG二核苷酸并具有6至40个核苷酸的寡核苷酸，优选为含有SEQ ID NO：2的寡核苷酸，更优选为可比托莫德；以及85wt％至90wt％的如本文定义的酯。制剂可以包含：11wt％至14wt％的含有CpG二核苷酸并具有6至40个核苷酸的寡核苷酸，优选为含有SEQ ID NO：2的寡核苷酸，更优选为可比托莫德；以及86wt％至89wt％的如本文定义的酯。

制剂可以包含：13wt％的含有CpG二核苷酸并具有6至40个核苷酸的寡核苷酸，优选为含有SEQ ID NO：2的寡核苷酸，更优选为可比托莫德；以及87wt％的如本文定义的酯。制剂可以包含：14wt％的含有CpG二核苷酸并具有6至40个核苷酸的寡核苷酸，优选为含有SEQ ID NO：2的寡核苷酸，更优选为可比托莫德；以及86wt％的如本文定义的酯。

本发明的制剂优选包含：11wt％至14wt％的含有CpG二核苷酸并具有6至40个核苷酸的寡核苷酸，优选为含有SEQ ID NO：2的寡核苷酸，更优选为可比托莫德；以及86wt％至89wt％的如本文定义的酯。

包含丙二醇单辛酸酯和丙二醇二辛酸酯的组合的合适的酯的可商购的实例是由Gattefossé制造的Capryol PGMC。

制剂可以进一步包含胶凝剂。胶凝剂可以为羟丙基甲基纤维素(Hydroxypropylmethylcellulose，HPMC)。

制剂可以包含、基本上由以下组成或由以下组成：含有CpG二核苷酸并具有6至40个核苷酸的寡核苷酸，优选为含有SEQ ID NO：2的寡核苷酸，更优选为可比托莫德；如本文定义的酯；以及胶凝剂。

合适的高粘度HPMC胶凝剂的可商购实例是由Dow Pharma Solutions制造的Methocel K100M。

胶凝剂在制剂中可以以1wt％至20wt％，或2wt％至15wt％，3wt％至10wt％或约4wt％至8wt％的量存在。例如，胶凝剂可以以约4wt％至5wt％，例如约5wt％的量存在。胶凝剂(例如HPMC)的添加增加了释放时间，同时仍然提供可使用的产品。

例如，制剂可以包含：5wt％至20wt％的含有CpG二核苷酸并具有6至40个核苷酸的寡核苷酸，优选为含有SEQ ID NO：2的寡核苷酸，更优选为可比托莫德；1wt％至10wt％的HPMC；以及70wt％至94wt％的如本文定义的酯。制剂可以包含：10wt％至15wt％的含有CpG二核苷酸并具有6至40个核苷酸的寡核苷酸，优选为含有SEQ ID NO：2的寡核苷酸，更优选为可比托莫德；3wt％至7wt％的HPMC；以及78wt％至87wt％的如本文定义的酯。制剂可以包含：约11.5wt％的含有CpG二核苷酸并具有6至40个核苷酸的寡核苷酸，优选为含有SEQ IDNO：2的寡核苷酸，更优选为可比托莫德；约5wt％的HPMC；以及约83.5wt％的丙二醇辛酸酯。

制剂可以进一步包含抗氧化剂。合适的抗氧化剂是丁羟甲苯(Butylatedhydroxytoluene，BHT)。制剂可以包含、基本上由以下组成或由以下组成：含有CpG二核苷酸并具有6至40个核苷酸的寡核苷酸，优选为含有SEQ ID NO：2的寡核苷酸，更优选为可比托莫德；如本文定义的酯；胶凝剂；以及抗氧化剂。胶凝剂可以是HPMC。因此，制剂可以包含、基本上由以下组成或由以下组成：含有CpG二核苷酸并具有6至40个核苷酸的寡核苷酸，优选为含有SEQ ID NO：2的寡核苷酸，更优选为可比托莫德；如本文定义的酯；HPMC；以及丁羟甲苯。包括抗氧化剂有助于改善基础制剂随时间推移的化学稳定性。

抗氧化剂在制剂中可以以0.01wt％至2wt％，0.05wt％至1wt％，0.075wt％至0.5wt％或约0.1wt％％的量存在。

例如，制剂可以包含：5wt％至20wt％的含有CpG二核苷酸并具有6至40个核苷酸的寡核苷酸，优选为含有SEQ ID NO：2的寡核苷酸，更优选为可比托莫德；1wt％至20wt％的HPMC；0.01wt％至2wt％的丁羟甲苯；以及58％至94％的如本文定义的酯。制剂可以包含：10wt％至20wt％的含有CpG二核苷酸并具有6至40个核苷酸的寡核苷酸，优选为含有SEQ IDNO：2的寡核苷酸，更优选为可比托莫德；3wt％至10wt％的HPMC；0.075wt％至0.5wt％的丁羟甲苯；以及75％至87％的如本文定义的酯。

制剂可以包含：约11.5wt％的含有CpG二核苷酸并具有6至40个核苷酸的寡核苷酸，优选为含有SEQ ID NO：2的寡核苷酸，更优选为可比托莫德；约5wt％的HPMC；约83.5wt％的丙二醇辛酸酯；以及约0.1wt％的丁羟甲苯。

制剂可以进一步包含pH缓冲剂。因此，制剂可以包含、基本上由以下组成或由以下组成：含有CpG二核苷酸并具有6至40个核苷酸的寡核苷酸，优选为含有SEQ ID NO：2的寡核苷酸，更优选为可比托莫德；如本文定义的酯；胶凝剂；抗氧化剂；以及pH缓冲剂。包括pH缓冲剂有助于改善基础制剂随时间推移的化学稳定性。

pH缓冲剂可以为氨丁三醇。胶凝剂可以是高分子量HPMC，例如Methocel K100M。抗氧化剂可以是丁羟甲苯。因此，制剂可以包含、基本上由以下组成或由以下组成：含有CpG二核苷酸并具有6至40个核苷酸的寡核苷酸，优选为含有SEQ ID NO：2的寡核苷酸，更优选为可比托莫德；如本文定义的酯；HPMC；丁羟甲苯；以及氨丁三醇。

pH缓冲剂在制剂中可以以0.05wt％至5wt％，0.1wt％至4wt％，0.1wt％至3wt％或约0.1wt％至2wt％或0.1wt％至1wt％的量存在。pH缓冲剂在制剂中可以以0.1wt％至0.5wt％的量存在。pH缓冲剂在制剂中可以以约0.1wt％、0.2wt％、0.3wt％或0.4wt％的量存在。

例如，制剂可以包含：5wt％至20wt％的含有CpG二核苷酸并具有6至40个核苷酸的寡核苷酸，优选为含有SEQ ID NO：2的寡核苷酸，更优选为可比托莫德；1wt％至20wt％的HPMC；0.01wt％至2wt％的丁羟甲苯；0.05wt％至5wt％的氨丁三醇；以及53％至94％的如本文定义的酯。制剂可以包含：10wt％至15wt％的含有CpG二核苷酸并具有6至40个核苷酸的寡核苷酸，优选为含有SEQ ID NO：2的寡核苷酸，更优选为可比托莫德；3wt％至10wt％的HPMC；0.075wt％至0.5wt％的丁羟甲苯；0.1wt％至1wt％的氨丁三醇；以及75％至87％的如本文定义的酯。例如，制剂可以包含：约11.5wt％的含有CpG二核苷酸并具有6至40个核苷酸的寡核苷酸，优选为含有SEQ ID NO：2的寡核苷酸，更优选为可比托莫德；约4.5wt％的HPMC；约83.5wt％的丙二醇辛酸酯；约0.1wt％的丁羟甲苯；以及约0.2wt％的氨丁三醇。

本发明还包括适用于口服给药的胶囊，所述胶囊包括：

a)明胶容器，和在该容器内的

b)如上所定义的制剂。

胶囊可以进一步包括：

c)在容器的外表面上的包衣。

通常，包衣包含第一聚合物和/或第二聚合物。

第一聚合物通常是低pH聚合物，第二聚合物通常是高pH聚合物。第一聚合物通常溶解于pH大于或等于pH 4.5且低于pH 7的磷酸盐缓冲溶液中，第二聚合物通常溶解于pH大于或等于6.8的磷酸盐缓冲溶液中。

第一聚合物通常是低pH聚合物，即溶解于pH大于或等于4.5且低于7的磷酸盐缓冲溶液中的聚合物。当剂型已经离开胃并进入小肠时，第一聚合物才开始溶解或分解。

更优选地，第一聚合物在大于或等于5，并且甚至更优选地大于5.5的pH下溶解。第一聚合物完全溶解于pH小于pH 7、更优选小于pH 6.8的磷酸盐缓冲溶液中。“在大于X的pH下溶解”意指聚合物在低于pH X下不溶解且为固体，在大于X的pH下溶解或分解。“在大于X且小于Y的pH下溶解”意指聚合物在低于pH X下不溶解且为固体，在大于X的pH下溶解或分解，并且在为Y或小于Y的pH下完全溶解或分解。

第二聚合物通常是高pH聚合物，即溶解于pH大于6.8的磷酸盐缓冲溶液中的聚合物。因此，第二种聚合物仅在剂型已经到达远端肠区域(如果会发生的话)时才开始溶解。更优选地，第二聚合物在大于或等于7.0的pH下溶解，或者可以在大于7.2的pH下溶解。

通常，基于干包衣，包衣包含占包衣的15wt％至50wt％的量的第一聚合物。通常，基于干包衣，包衣包含占包衣的15wt％至50wt％的量的第二聚合物。

第一聚合物可以是聚(甲基丙烯酸-共-丙烯酸乙酯)1：1。第一聚合物在pH 5.5以上是可溶的，即第一聚合物在pH 5.5以上溶解。第一聚合物的玻璃化转变温度可以为91℃至101℃。第一聚合物的分子量可以为250000g/mol至500000g/mol，或275000g/mol至400000g/mol，或300000g/mol至350000g/mol，优选为约320000g/mol。

例如，第一聚合物可以是聚(甲基丙烯酸-共-丙烯酸乙酯)1：1，该聚(甲基丙烯酸-共-丙烯酸乙酯)1：1在pH 5.5以上是可溶的，并且玻璃化转变温度为91℃至101℃，并且分子量为约320000g/mol。

适合作为第一聚合物的聚合物的商业实例是由Evonik制造的L 30D-55Copolymer。

第二聚合物可以是聚(丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸)7：3：1。

第二聚合物在pH 7以上是可溶的，即第一聚合物在pH 7以上溶解。第二聚合物的玻璃化转变温度可以为38℃至48℃。第二聚合物的分子量可以为150000g/mol至400000g/mol，或200000g/mol至350000g/mol，或250000g/mol至300000g/mol，优选为约280,000g/mol。

例如，第二聚合物可以是聚(丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸)7：3：1，该聚(丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸)7：3：1在pH 7以上是可溶的，并且玻璃化转变温度为38℃至48℃，并且分子量为约280000g/mol。

适合作为第二聚合物的聚合物的商业实例是由Evonik制造的FS 30DCopolymer。

因此，包衣通常可以包含聚(甲基丙烯酸-共-丙烯酸乙酯)1：1作为第一聚合物以及聚(丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸)7：3：1作为第二聚合物。

聚(甲基丙烯酸-共-丙烯酸乙酯)1：1和聚(丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸)7：3：1可以以5：1至1：5，或2：1至1：4，或1：1至1：3的重量比存在。聚(甲基丙烯酸-共-丙烯酸乙酯)1：1和聚(丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸)7：3：1的重量比可以为约1：1，约1：2或约1：3。

通常，包衣可以包含在pH 5.5以上可溶的第一聚合物和在pH 7以上可溶的第二聚合物。第一聚合物的玻璃化转变温度可以为91℃至101℃，第二聚合物的玻璃化转变温度可以为38℃至48℃。

第一聚合物的分子量可以为250000g/mol至500000g/mol，第二聚合物的分子量可以为150000g/mol至400000g/mol。第一聚合物的分子量可以为275000g/mol至400000g/mol，第二聚合物的分子量可以为200000g/mol至350000g/mol。第一聚合物的分子量可以为300000g/mol至350000g/mol，第二聚合物的分子量可以为250000g/mol至300000g/mol。优选地，第一聚合物的分子量为约320000g/mol，第二聚合物的分子量为约280000g/mol。

例如，包衣可以以约1：1的重量比包含第一聚合物和第二聚合物，该第一聚合物为聚(甲基丙烯酸-共-丙烯酸乙酯)1：1并且在pH 5.5以上是可溶的，玻璃化转变温度为91℃至101℃，以及分子量为约320000g/mol，该第二聚合物为聚(丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸)7：3：1并且在pH 7以上是可溶的，玻璃化转变温度为38℃至48℃，以及分子量为约280000g/mol。

例如，包衣可以以约1：3的重量比包含第一聚合物和第二聚合物，该第一聚合物为聚(甲基丙烯酸-共-丙烯酸乙酯)1：1并且在pH 5.5以上是可溶的，玻璃化转变温度为91℃至101℃，以及分子量为约320000g/mol，该第二聚合物为聚(丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸)7：3：1并且在pH 7以上是可溶的，玻璃化转变温度为38℃至48℃，以及分子量为约280000g/mol。

通过在包衣溶液中包覆胶囊可获得明胶容器的外表面上的包衣，所述包衣溶液包含如上定义的第一聚合物和第二聚合物。

胶囊可以在包覆后固化。可以使用流化床包衣机包覆胶囊。可以将胶囊置于室温下固化1小时至24小时，或3小时至18小时，或6小时至12小时，或约8小时的时间。

包衣溶液可以进一步包含滑石粉、柠檬酸三乙酯和水。在这种情况下，包衣溶液可以包含5wt％至40wt％的聚(甲基丙烯酸-共-丙烯酸乙酯)1：1，5wt％至40wt％的聚(丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸)7：3：1，1wt％至10wt％的滑石粉，0.5％至5％的柠檬酸三乙酯，以及8.5wt％至88.5wt％的水。包衣溶液可以包含15wt％至20wt％的聚(甲基丙烯酸-共-丙烯酸乙酯)1：1，15wt％至20wt％的聚(丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸)7：3：1，1wt％至10wt％的滑石粉，0.5wt％至5wt％的柠檬酸三乙酯，以及45wt％至68.5wt％的水。例如，包衣溶液可以包含约21wt％的聚(甲基丙烯酸-共-丙烯酸乙酯)1：1，约21wt％的聚(丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸)7：3：1，约5.5wt％的滑石粉，约2wt％的柠檬酸三乙酯，以及约51wt％的水。

包衣溶液可以包含5wt％至15wt％的聚(甲基丙烯酸-共-丙烯酸乙酯)1：1，20wt％至40wt％的聚(丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸)7：3：1，1wt％至10wt％的滑石粉，0.5wt％至5wt％的柠檬酸三乙酯，以及30wt％至73.5wt％的水。例如，包衣溶液可以包含约10wt％的聚(甲基丙烯酸-共-丙烯酸乙酯)1：1，约30wt％的聚(丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸)7：3：1，约5.5wt％的滑石粉，约2wt％的柠檬酸三乙酯，以及约51wt％的水。

在一个优选的方面，本发明还提供适用于口服给药的胶囊，所述胶囊包括：

a)明胶容器，和在该容器内的

b)制剂，以及

c)在容器的外表面上的包衣，

其中该制剂包含约11.5wt％的可比托莫德，约4.5wt％的高分子量羟丙基甲基纤维素，约83.7wt％的丙二醇辛酸酯，约0.1wt％的丁羟甲苯和约0.2wt％的氨丁三醇；并且其中该包衣包含比例为约1：1的聚(甲基丙烯酸-共-丙烯酸乙酯)1：1和聚(丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸)7：3：1。

在一个优选的方面，本发明还提供适用于口服给药的胶囊，所述胶囊包括：

a)明胶容器，和在该容器内的

b)制剂，以及

c)在容器的外表面上的包衣，

其中该制剂包含约11.5wt％的可比托莫德，约4.5wt％的高分子量羟丙基甲基纤维素，约83.7wt％的丙二醇辛酸酯，约0.1wt％的丁羟甲苯和约0.2wt％的氨丁三醇；并且其中该包衣包含比例为约1：3的聚(甲基丙烯酸-共-丙烯酸乙酯)1：1和聚(丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸)7：3：1。

在一个优选的方面，本发明还提供适用于口服给药的胶囊，所述胶囊包括：

a)明胶容器，和在该容器内的

b)制剂，以及

c)在容器的外表面上的包衣，

其中该制剂包含约11.5wt％的可比托莫德，约4.5wt％的高分子量羟丙基甲基纤维素，约83.7wt％的丙二醇辛酸酯，约0.1wt％的丁羟甲苯和约0.2wt％的氨丁三醇；并且其中该包衣可通过在包衣溶液中包覆胶囊而获得，所述包衣溶液包含约21wt％的聚(甲基丙烯酸-共-丙烯酸乙酯)1：1，约21wt％的聚(丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸)7：3：1，约5.5wt％的滑石粉，约2wt％的柠檬酸三乙酯，以及约51wt％的水。

在一个优选的方面，本发明还提供适用于口服给药的胶囊，所述胶囊包括：

a)明胶容器，和在该容器内的

b)制剂，以及

c)在容器的外表面上的包衣，

其中该制剂包含约11.5wt％的可比托莫德，约4.5wt％的高分子量羟丙基甲基纤维素，约83.7wt％的丙二醇辛酸酯，约0.1wt％的丁羟甲苯和约0.2wt％的氨丁三醇；并且其中该包衣可通过在包衣溶液中包覆胶囊而获得，所述包衣溶液包含约10wt％的聚(甲基丙烯酸-共-丙烯酸乙酯)1：1，约30wt％的聚(丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸)7：3：1，约5.5wt％的滑石粉，约2％的柠檬酸三乙酯，以及约51wt％的水。

本发明的胶囊可以配置为通过改变包衣中第一聚合物和第二聚合物的比例，而当其暴露于特定pH或pH范围(对应于胃肠道中某个区域的pH)的条件下时，释放含有CpG二核苷酸并具有6至40个核苷酸的寡核苷酸。

例如，回盲部的pH大约为6.5至7.5。重要的是要识别pH沿着胃肠道(GI tract)的变化性，尤其是在患病状态下。例如，如果施加在pH＞7.0下溶解的包衣，则存在胃肠道pH永远不会达到极小值的风险，从而导致不释放活性物质。在一些结肠靶向药物递送系统中经常报告有该问题。为了克服该问题，本发明的包衣组合物设计为包括一定量的比靶标更低的pH下溶解的肠溶聚合物。除了在核心制剂中包含控释机制外，还创建了“滞后”时间以延迟药物释放的开始时间，以最大程度地减少任何提早释放以及不释放。通常，本发明的胶囊配置为当暴露于pH 6.5至pH 7.5的条件下时释放含有CpG二核苷酸并具有6至40个核苷酸的寡核苷酸，优选为可比托莫德，即寡核苷酸在pH 6.5至pH 7.5开始释放。这相当于回盲部的pH，并使寡核苷酸靶向于结肠。因此，当本发明的胶囊口服给药于对象时，可以配置为在回盲部开始释放寡核苷酸。这使得寡核苷酸靶向于结肠，从而允许靶向治疗影响结肠的炎性肠病，特别是溃疡性结肠炎或克罗恩病。通常，该胶囊配置为当暴露于pH 6.5至pH 7.5的条件下超过2小时时间，优选3小时至18小时时间，更优选5小时至12小时时间时，释放含有CpG二核苷酸并具有6至40个核苷酸的寡核苷酸，优选为可比托莫德。

回肠(小肠)的pH大约为5.5。通常，本发明的胶囊配置为当暴露于pH 5.5至pH 6的条件下时释放含有CpG二核苷酸并具有6至40个核苷酸的寡核苷酸，优选为可比托莫德，即寡核苷酸在pH 5.5至pH6开始释放。这相当于回肠的pH，并使寡核苷酸靶向于回肠。因此，当本发明的胶囊口服给药于对象时，可以配置为在回肠中释放寡核苷酸。这使得寡核苷酸靶向于回肠，从而允许靶向治疗影响回肠的炎性肠病，特别是克罗恩病。

本发明还涉及如上所述的制剂或胶囊用于治疗对象的炎性肠病，优选为溃疡性结肠炎或克罗恩病中的用途。

用于如上所述用途的制剂或胶囊剂可以在回盲部释放如上定义的寡核苷酸。如上所述使用的制剂或胶囊剂可以在pH 6.5至pH 7.5，优选在pH 6.5至pH 6.8下释放如上定义的寡核苷酸。

用于如上所述用途的制剂或胶囊剂可以在回肠中释放如上定义的寡核苷酸。如上所述使用的制剂或胶囊剂可以在pH 5.5至pH 6下释放如上定义的寡核苷酸。

如本文所用，术语“对象”是指人类对象/患者。术语“对象”和“患者”在本文可互换使用。

如本文所用，术语炎性肠病(IBD)是指结肠和胃肠道的一组炎性病症。IBD的主要类型是溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病。UC和克罗恩病之间的主要区别在于炎症变化的位置和性质。克罗恩氏病可影响胃肠道的任何部分，从口腔到肛门，而UC仅限于结肠和直肠。在某些情况下，由于表现中的特质，无法对克罗恩病或UC做出明确的诊断。在这些情况下，可以诊断为未定型结肠炎。IBD的其他形式包括但不限于：胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、缺血性结肠炎、转移性结肠炎、白塞病(disease)和未定型结肠炎。

通常，炎性肠病是溃疡性结肠炎(UC)或克罗恩病。

溃疡性结肠炎(UC)是本领域技术人员众所周知的。根据本发明治疗的溃疡性结肠炎可以涉及治疗溃疡性直肠炎、远端或左侧结肠炎、广泛性结肠炎、全结肠炎和结肠袋炎。

UC患者通常表现出从缓解到重度活跃的一系列疾病严重程度。可使用临床评估将UC患者分为如D’Haens,Gastroenterology 2007；132：763–786中所定义的4种疾病活动亚组，其全部内容通过引用并入本文：(1)缓解(＜2次或3次排便/每天，粪便中无血和/或脓液，无全身症状)；(2)轻度活动性疾病(3次或4次排便/每天，和/或不是每天粪便中都有血和/或脓液，无发烧或体重减轻的全身症状)；(3)中度活动性疾病(＞4次排便/每天和/或每天有血和/或脓液)，具有最小的全身症状；(4)重度活动性疾病(＞6次血便/每天，并且有毒性迹象，如发烧、心动过速、贫血或红细胞沉降速率ESR所证明的)。

通常，患者患有中度至重度UC。优选地，患者患有如上所定义的中度至重度UC。

如本文所用的，术语“治疗”和“进行治疗”应理解为包括疾病或病症的症状的加重/恶化的治疗和/或改善和/或防止和/或减轻，以及对该疾病或病症的病因的治疗，并且可以包括以改善或稳定对象的病症的方式逆转、减轻或抑制病症的症状、临床体征和潜在病理。

特别是在溃疡性结肠炎的情况下，“治疗”通常是指在患有活动性溃疡性结肠炎的患者中诱导响应或缓解。因此，通常，寡核苷酸用于诱导患者活动性溃疡性结肠炎的响应或缓解。诱导响应意味着通过例如减轻和/或抑制活动性疾病的症状和临床体征来改善患者的病症。诱导缓解意味着将患者从被认为处于疾病活跃期的状态转变为被认为处于缓解的状态。

通常通过内窥镜检查、组织学、患者记录的结果和生活质量结果中的一项或多项来评估UC患者中的响应或缓解的诱导。因此，提及响应或缓解的诱导包括内窥镜检查缓解、内窥镜检查响应、组织学缓解、组织学响应、由医生或患者记录的结果确定的响应或缓解，以及由生活质量确定的响应或缓解中的一种或多种的诱导。这通常可参考一个或多个标准指数来评估。

通常，溃疡性结肠炎是慢性活动性溃疡性结肠炎。

如本文所用，术语“慢性活动性溃疡性结肠炎”是指患有活动性和慢性的溃疡性结肠炎的患者。活动性溃疡性结肠炎通常如本文所定义，即患者未处于缓解。慢性溃疡性结肠炎是指以直肠和结肠粘膜的慢性炎症为特征的疾病。

优选地，本文中提及的“治疗”是指诱导患有慢性活动性溃疡性结肠炎的患者的导响应或缓解。因此，通常，寡核苷酸用于诱导患者中慢性活动性溃疡性结肠炎的响应或缓解。

可以根据一种或多种标准疾病指数来确定UC患者中响应或缓解的诱导。典型的疾病指标包括但不限于以下所述的疾病：(i)通过临床和生化疾病活动性确定的疾病活动性；(ii)通过内窥镜疾病活动性确定的疾病活动性；(iii)通过临床和内窥镜疾病综合活动指数确定的疾病活动性；(iv)生活质量；(v)组织学疾病活动性。这些指数在D’Haens(如前所述)中进行了讨论。

基于通过临床和生化疾病活动性确定的疾病活动性的指数包括：Truelove和Witts严重性指数；Powell-Tuck(St.Mark’s)指数；临床活动性(Rachmilewitz)指数；活动性(Seo)指数；医师总体评估；Lichtiger(改进的Truelove和Witts严重性)指数；研究者总体评估；简单临床结肠炎活动性指数；基于个体症状评分的改善；溃疡性结肠炎临床评分；和患者定义的缓解。这些指数在D’Haens(如前所述)中进行了讨论。

基于通过内窥镜疾病活动性确定的疾病活动性的指数包括：Truelove和Witts乙状结肠镜评估；Baron评分；Powell-Tuck乙状结肠镜评估；内窥镜检查(Rachmilewitz内窥镜检查)指数；乙状结肠镜指数；乙状结肠镜炎症等级评分；Mayo评分柔性直肠乙状结肠镜检查评估；Sutherland粘膜外观评估；和改进的Baron评分。这些指数在D’Haens(如前所述)中进行了讨论。

基于临床和内窥镜疾病综合活动指数确定的疾病活动性的指数包括：Mayo评分(Mayo临床评分/疾病活动性指数)；改进的Mayo评分和Sutherland指数(疾病活动性指数/UC疾病活动性指数)。Mayo评分和Sutherland指数在D’Haens(如前所述)中进行了讨论。

基于生活质量的指数包括：IBD患者关注度评价表；和炎性肠病问卷(Inflammatory Bowel Disease Questionnaire，IBDQ)。这些指数在D’Haens(如前所述)中进行了讨论。

基于组织学疾病活动性的指数包括在D’Haens(如前所述)中讨论的那些，例如Geboes指数和Riley指数，以及其他指数，例如Nancy指数和Robarts指数。

用于评估UC患者的优选指数包括临床活动性(Rachmilewitz)指数、Mayo评分和改进的Mayo评分。

临床活动性(Rachmilewitz)指数是考虑了以下7个变量的指数：排便次数、便血、研究人员对症状状态的总体评估、腹部疼痛或痉挛、结肠炎引起的温度、肠外临床表现和实验室检查结果。这在D’Haens(如前所述)和Rachmilewitz D.,BMJ 1989；298：82–86(其全部内容通过引用并入本文)中进一步进行了讨论。确定临床活动性(Rachmilewitz)指数产生的患者评分为0分至29分(较高评分意指较严重的疾病)。

临床缓解可被视为临床活动性(Rachmilewitz)指数评分≤4分。通过临床活动性(Rachmilewitz)指数确定的响应意味着患者治疗后的评分比治疗前低。

Mayo评分是考虑以下4项的指数：排便频率、直肠出血、较低的GI内窥镜检查结果，以及医师总体评估(Physician’s Global Assessment，PGA)。这在D’Haens(如前所述)和Schroeder KW et al,N Engl J Med 1987；317：1625–1629(其全部内容通过引用并入本文)中进一步进行了讨论。Mayo评分的确定产生0分至12分的评分(较高评分意指较严重的疾病)。除了所述四个具体项目之外，还对患者的功能评估进行了测量，这并不是指要包括在12分指数计算中，而应在确定PGA评分时用作整体健康的量度。

根据下表所述，确定4项中每一项的Mayo评分。

^b每个患者都可以作为其自己的对照来确定排便频率的异常程度。

^c每日出血评分代表出血最严重的一天。

^d医师总体评估确认其他三个标准：患者对腹部不适和总体健康感的每日记录，以及其他观察结果，例如身体检查结果和患者的表现状态。

根据Mayo评分的缓解可以定义为以下项的完全消除：(1)排便频率(正常的排便频率)；(2)直肠出血(无直肠出血)；(3)患者的功能评估评分(通常良好)；(4)内窥镜检查结果(正常)，并且PGA评分为0。通过Mayo评分确定的响应通常需要PGA评分的改善(与基线相比降低最少1分)，和至少一项其他临床评估(排便频率、直肠出血、患者的功能评估、内窥镜检查结果)的改善，并且在任何其他临床评估中无恶化。

或者，临床缓解可以定义为Mayo评分为0，并且临床改善(响应)定义为Mayo评分从基线降低≥3分。

或者，临床缓解可以定义为Mayo评分为0，并且临床改善(响应)定义为Mayo评分从基线降低≥3分(或者，如果基线Mayo评分≤3分，则降低≥2分)。

或者，通过Mayo评分确定的缓解可以定义为要求乙状结肠镜检查和直肠出血的分项评分均为0，并且排便频率和PGA分项评分的评分为0或1。响应可以定义为Mayo评分从基线降低≥3分；临床响应可以定义为Mayo评分(无内窥镜检查分项评分，也称为部分Mayo评分)从基线降低≥2分，并且内窥镜检查响应可以定义为内窥镜检查分项评分从基线降低≥1分。

或者，临床缓解可以定义为总Mayo评分≤2分，而没有个体分项评分＞1分，临床响应可以定义为总Mayo评分从基线降低≥3分且≥30％，以及直肠出血分项评分降低≥1分或绝对直肠出血分项评分为0或1，以及粘膜愈合可以定义为绝对内窥镜检查分项评分为0或1。

通常，患有活动性溃疡性结肠炎的患者的Mayo评分＞2。处于溃疡性结肠炎缓解期的患者的Mayo评分通常≤2。

改进的Mayo评分与上面定义的Mayo评分有关。改进的Mayo评分与Mayo评分的不同之处在于，结肠镜检查/乙状结肠镜检查评分不太考虑脆性。因此，改进的Mayo评分的评分表如下所示。

^b每个患者都可以作为其自己的对照来确定排便频率的异常程度。

^c每日出血评分代表出血最严重的一天。

^d医师总体评估确认其他三个标准：患者腹部不适和总体健康感的每日记录，以及其他观察结果，例如身体检查结果和患者的表现状态。

改进的Mayo评分的缓解和响应值与上面所述的Mayo评分相同。改进的Mayo评分通常根据在http：//www.fda.gov/downloads/Drugs/GuidanceComplianceRegulatoryInformation/Guidances/UCM515143.pdf中找到的FDA的指南文件草案“溃疡性结肠炎：行业临床试验终点指南(Ulcerative Colitis：Clinical Trial Endpoints Guidance forIndustry)”进行评估。

或者，改进的Mayo评分与Mayo评分的不同之处可以在于，结肠镜检查/乙状结肠镜检查评分不太考虑脆性，并且还在于，医师总体评估不是决定性的。因此，改进的Mayo评分的评分表也可以如下。

^b每个患者都可以作为其自己的对照来确定排便频率的异常程度。

^c每日出血评分代表出血最严重的一天。

该替代性改进的Mayo评分的缓解值和响应值通常与上面所述的Mayo评分相同。或者，可以根据该替代性改进的Mayo评分，通过以下分项评分来定义缓解：i)直肠出血为0；ii)排便频率为0或1(与基线即第0周相比降低至少1分)；以及iii)内窥镜检查评分为0或1(不包括脆性)。

UC缓解的诱导可以根据S.P.L.Travis,Aliment Pharmacol Ther 2011；34：113–124中列出的标准来进行，其全部内容通过引用并入本文，即完全停止直肠出血、紧迫感和增加的排便次数，优选通过内窥镜粘膜愈合来确认。

或者，响应或缓解的诱导可以根据E.F.Stange,Journal of Crohn’s andColitis(2008)2,1–23；S.P.L.Travis,Journal of Crohn’s and Colitis(2008)2,24–62；K Geboes,Gut 2000；47：404–409(其全部内容通过引用并入本文)中列出的标准来进行。

可以根据一种或多种标准疾病指数来确定克罗恩病患者中响应或缓解的诱导。典型的指数包括克罗恩病活动性指数(Crohn’s Disease Activity Index，CDAI)。CDAI在Love,“Pharmacotherapy for Moderate to Severe Inflammatory Bowel Disease：Evolving Strategies”,Am J Manag Care.2016；22：S39-S50；Peyrin-Biroulet et al“Defining disease severity in inflammatory bowel diseases：current and futuredirections”Clin Gastroenterol Hepatol.2015；pii：S1542-3565(15)00787-00789.doi：10.1016/j.cgh.2015.06.001；以及Ungar et al“Advances in the development of newbiologics in inflammatory bowel disease”,Annals of Gastroenterology(2016)29,243-248中进行了讨论。评估克罗恩病患者的其他指数包括Harvey-Bradshaw指数和炎性肠病问卷。

CDAI是考虑了与克罗恩病相关的大量症状的综合评分，包括：液便或软便的量；腹痛；整体健康；并发症的存在(关节疼痛(关节痛)或弗兰克关节炎的存在)；虹膜炎或葡萄膜炎；结节性红斑、坏疽性脓皮病或口疮性溃疡的存在；肛裂、瘘管或脓肿；其他瘘管；前一周的发烧的存在；使用止泻宁(Lomotil)或阿片类药物止泻；腹部肿块的存在；血细胞比容；以及与标准重量的百分偏差。根据CDAI的临床缓解通常用＜150分表示。

根据本发明治疗的对象通常是抗炎疗法难治的或对抗炎疗法响应不足或不耐受和/或证明或先前已证明对至少一种免疫调节剂、TNF-α抑制剂或抗整合素响应不足、响应丧失或不耐受。因此，通常，对象先前已经接受或目前正在接受抗炎疗法，优选用于UC的抗炎疗法，和/或免疫调节、TNF-α抑制剂或抗整合素疗法，优选用于UC的此类疗法。本文讨论了用于UC的抗炎疗法，并且通常包括GCS、柳氮磺胺吡啶和5-ASA。

本文讨论了免疫调节剂、TNF-α抑制剂和抗整合素，并且通常包括咪唑硫嘌呤、6-巯基嘌呤、和生物制剂，该生物制剂包括TNF-α抑制剂英夫利昔单抗及其生物类似物和衍生物、戈利木单抗及其生物类似物和衍生物、阿达木单抗及其生物类似物和衍生物、抗整合素维多珠单抗及其生物类似物和衍生物。

难治性疾病或对疗法响应不足的疾病通常是这样的疾病，即尽管有至少一个疗程史(本发明上下文中的抗炎疗法史)，但活动性疾病的体征和症状仍持续存在的疾病。尽管有有较早的抗炎疗程史，但通常在UC的治疗背景下，活动性疾病的体征和症状仍持续存在。本领域技术人员将很好地理解伴有UC的抗炎疗法的典型疗程，并且该典型疗程通常涉及以足够剂量进行足够的剂数以诱导典型患者的缓解。

在本发明的上下文中，对疗法、抗炎疗法不耐受是指该疗法已在对象中引起了不能耐受的副作用，例如通常导致疗法中断的副作用。

通常，对象先前已经或目前正在接受氨基水杨酸(5-ASA)，优选为用于UC的5-ASA疗法。

通常，对象先前已经或目前正在接受口服糖皮质激素(GCS)，优选为用于UC的口服GCS疗法。

通常，抗炎疗法难治的或对抗炎疗法响应不足或不耐受的对象显示出或先前已经显示出对直肠、口服和/或肠胃外GCS治疗(由于早期副作用而不包括GCS治疗)的响应不足或响应丧失(即难治的)或不耐受。

通常，抗炎疗法难治的或对抗炎疗法响应不足或不耐受的对象具有对GCS治疗响应不充分(例如，类固醇难治性)、或类固醇依赖性、或GCS治疗响应丧失、或GCS治疗不耐受的病史或当前状态。在治疗溃疡性结肠炎的过程中，对象通常已接受类固醇/GCS。

类固醇难治性通常是指尽管有至少一个疗程的类固醇治疗史(例如包括剂量相当于强的松每日40mg-60mg口服给药30天或静脉内(Intravenous，IV)给药7天至10天的诱导方案)，但对象缺乏有意义的临床响应，即表现出持续活动性溃疡性结肠炎的体征和症状。

类固醇依赖性通常是指在开始类固醇治疗后3个月内无法将类固醇降低到相当于泼尼松龙10mg/d以下，而无复发性活动性溃疡性结肠炎的患者，或在停止类固醇治疗后3个月内复发的患者。

GCS治疗不耐受通常意指对象经历了GCS治疗后该对象无法耐受的副作用，例如但不限于库欣综合征(Cushing′s syndrome)、骨量减少/骨质疏松症、高血糖症，失眠或感染。

对免疫调节剂响应不足或响应丧失通常意指尽管先前使用至少一种免疫调节剂进行了治疗(例如一个8周的口服咪唑硫嘌呤(≥1.5mg/kg)或6-巯基嘌呤(≥0.75mg/kg)方案)，但活动性溃疡性结肠炎的体征和症状仍持续存在。

对免疫调节剂不耐受通常意指对象在接受免疫调节剂后经历恶心/呕吐、腹痛、胰腺炎、肝功能测试(Liver function test，LFT)异常、淋巴细胞减少、硫嘌呤甲基转移酶(Thiopurine Methyltransferase，TPMT)基因突变、或感染或其他副作用。

对TNF-α抑制剂响应不足或响应丧失意指尽管先前使用至少一种TNF-α抑制剂(例如英夫利昔单抗(5mg/kg(IV)，2剂，相隔至少2周)或其生物类似物或衍生物、或戈利木单抗(200/100mg(SC)，2剂，相隔至少2周)或其生物类似物或衍生物、或阿达木单抗(160/80mg(SC)，2剂，相隔至少2周)或其生物类似物或衍生物的4周诱导方案(或根据当前标签推荐剂量)进行了治疗，活动性溃疡性结肠炎的体征和症状仍持续存在，或在先前临床受益后的维持用药期间症状的复发。

对TNF-α抑制剂不耐受意指在接受TNF-α抑制剂后与输注相关的反应、脱髓鞘、充血性心力衰竭、感染或其他副作用。

对抗整合素响应不足或响应丧失意指尽管先前使用抗整合素进行了治疗，例如至少10周的维多珠单抗300mg(IV)或其生物类似物或衍生物的方案或在当前标签中推荐的，但活动性溃疡性结肠炎的体征和症状仍持续存在，或在先前临床获益后的维持用药期间症状的复发。

通常，对象已被诊断为患有左侧溃疡性结肠炎，即远端结肠炎，包括直肠乙状结肠炎。

通常，对象已被诊断患有全结肠炎。

通常，所述对象对于结肠切除术是有选择的。

如本文所用，术语“结肠切除术”是指大肠(结肠)的任何程度的手术切除。在本文中，结肠切除术包括但不限于：右半结肠切除术、左半结肠切除术、扩展半结肠切除术、横结肠切除术、乙状结肠切除术、直肠乙状结肠切除术、哈特曼氏手术(Hartmann operation)、“双管”或米库利兹结肠造口术(Mikulicz colostomy)、全结肠切除术(也称为雷恩氏手术(Lane’s Operation))、全结直肠切除术和结肠次全切除术。如本文所用，短语“对于结肠切除术是有选择的”是指基于医师和外科医生的评估，对象可以选择进行非紧急结肠切除术。选择进行结肠切除术的对象可以是但不限于可用疗法(对于溃疡性结肠炎)难治的或对可用疗法不耐受的对象(对于溃疡性结肠炎)。这不同于紧急结肠切除术，紧急结肠切除术是对患有急性疾病或受伤且需要立即就医的对象的一种急性干预。该短语还包括选择做结肠切除术的对象。

本发明的制剂和胶囊可以作为适应症的单一疗法治疗进行给药，或与其他药物(一种或多种)一起作为适应症的辅助疗法一起施用，如下文更详细地描述的。例如，对象可以接受用于治疗炎性肠病，通常是溃疡性结肠炎或克罗恩病的一种或多种另外的治疗剂。

在辅助(或“附加”(add-on))疗法的情况下，用于本发明的药物可以与其他药物(一种或多种)，例如以固定剂量组合或以单独的剂量，同时地、分开地或依次地给药。

如本文所用，术语“附加(add-on)”是指在不中断当前疗法或药物方案的情况下除了当前疗法或药物方案之外还给药所述寡核苷酸。

因此，寡核苷酸可以作为单一疗法给药，或与用于治疗溃疡性结肠炎，优选溃疡性结肠炎或克罗恩病的一种或多种另外的治疗剂组合给药。通常，寡核苷酸可以作为单一疗法给药，或与用于治疗溃疡性结肠炎的一种或多种另外的治疗剂组合给药，该一种或多种另外的治疗剂选自免疫调节药物、抗TNF治疗药物或用于治疗溃疡性结肠炎的其他合适的药物。

适合与所述寡核苷酸组合使用的这种药物的实例包括但不限于：GCS或衍生物；泼尼松龙、Decortin、抗TNF或衍生物；英夫利昔单抗及其生物类似物和衍生物、阿达木单抗及其生物类似物和衍生物、戈利木单抗及其生物类似物和衍生物、抗整合素或衍生物；维多珠单抗及其生物类似物和衍生物、天然IFN-β、硫嘌呤或衍生物；咪唑硫嘌呤、6-巯基嘌呤、5-ASA、柳氮磺胺吡啶、甲氨蝶呤、环孢菌素、托法替尼及其等同物。

通常，接受所述寡核苷酸的对象还接受一种或多种选自以下的其他药物：GCS、Decortin、5-ASA、咪唑硫嘌呤、6-巯基嘌呤、柳氮磺胺吡啶、甲氨蝶呤、泼尼松龙及其等同物或衍生物。

优选地，接受所述寡核苷酸的对象还接受一种或多种选自以下的其他药物：GCS、5-ASA、咪唑硫嘌呤、6-巯基嘌呤、柳氮磺胺吡啶和甲氨蝶呤。

更优选地，接受所述寡核苷酸的对象还接受一种或多种选自以下的其他药物：口服GCS、口服5-ASA、咪唑硫嘌呤、6-巯基嘌呤和口服甲氨蝶呤。

通常，接受所述寡核苷酸的对象还接受一种或多种类固醇药物，例如皮质类固醇和糖皮质激素。

为了本发明的目的，术语“与......组合”和“附加”意指在治疗同一患者的相同疾病的过程中，并且包括以任何顺序(包括同时给药，以及长达几个月间隔的暂时间隔顺序)给药寡核苷酸和一种或多种另外的治疗剂。

通常，该制剂或胶囊是口服给药的。

本发明还提供了治疗对象的炎性肠病(优选溃疡性结肠炎或克罗恩病)的方法，该方法包括向所述对象口服给药本文所定义的制剂或胶囊。

本发明还提供了本文定义的制剂或胶囊在制备用于治疗炎性肠病(优选溃疡性结肠炎或克罗恩病)的药物中的用途。

以下非限制性实施例对本发明进行了说明。在整个实施例中，术语活性药物成分(Active pharmaceutical ingredient，API)和可比托莫德已经互换使用。

实施例1-可比托莫德/赋形剂相容性研究

1.1材料

表1和表2中详细列出了本研究中使用的赋形剂其他材料。

表1：本研究中使用的赋形剂

表2：本研究中使用的其他材料。

1.2可比托莫德溶解度评估方法

通过动力学溶解度方法通过将API逐步添加到赋形剂中直至达到最大溶解度来评估溶解度。

1.3可比托莫德/赋形剂相容性研究方法

使用HPLC和UV检测在两个时间点分析了含有可比托莫德的混合物及其相应的安慰剂：制备随后在2℃-8℃下储存不超过4周(T＝0)，以及在40℃/75％相对湿度下放置4周后(T＝4)。

1.4胶囊壳相容性方法

将含有可比托莫德的混合物及相应的安慰剂混合物填充到每种类型的胶囊(明胶和HPMC)中，以得到每个胶囊30mg的目标浓度。然后使用适当的带封溶液(bandingsolution)对胶囊进行带封，并静置干燥过夜。然后在真空室中对胶囊进行泄漏测试20分钟，随后目视评估泄漏或破裂。检查后，将胶囊在40℃/75％相对湿度下稳定2周，然后再次目视检查胶囊壳是否泄漏、破裂和变形。

1.5可比托莫德溶解度评估结果

溶解度评估的结果显示，所有混合物在初始40mg可比托莫德置于8g赋形剂的浓度下均为悬浮液。

表3示出了在600mg可比托莫德置于8g赋形剂的浓度下，哪些二元混合物是可使用的，而哪些混合物是不可使用的。

表3：最终600mg可比托莫德(API)置于8g赋形剂的浓度下溶解度评估研究的结果。

1.6胶囊壳相容性研究结果

表4和表5详细列出了接下来进行胶囊壳相容性研究的五种混合物。

表4：胶囊壳相容性研究可比托莫德(API)混合物。

表5：胶囊壳相容性研究安慰剂混合物

表6详细列出了研究在放置之前和放置两周后时间点的结果。没有对HPMC胶囊中的Capryol PGMC安慰剂继续进行研究，因为HPMC胶囊中的相应Capryol和可比托莫德在带封过程中全部产生了裂纹。表7详细列出了赋形剂+可比托莫德胶囊在放置之前和放置两周后时间点的结果。Gelucire 43/01+可比托莫德胶囊在胶囊上显示出相同的变形迹象，但这可能是由于在40℃的储存过程中带封软化并相对于琥珀罐的底部被压平所致。相应的只有赋形剂的胶囊没有显示出胶囊变形的迹象。含有Capryol PGMC+可比托莫德的混合物因带封后所有胶囊均破裂而均未放置在HPMC胶囊中。

表6：在放置2周之前和之后，只有赋形剂的胶囊壳相容性研究结果。

表7：在放置2周之前和之后，赋形剂+可比托莫德(API)胶囊壳相容性研究结果。

1.7可比托莫德/赋形剂相容性研究结果

接下来对表8中详细列出的以下混合物进行可比托莫德/赋形剂的相容性研究。

表8：接下来对混合物进行可比托莫德/赋形剂相容性研究。

在初始和4周的时间点对样品中的相关物质和测定值进行分析，并基于面积％报告结果。

下图1示出了在初始时间点制备的可比托莫德标准品与5种二元混合物的比较。色谱图示出了Geleol和PEG 1500混合物降解的相同，但对于其余Capryol、Gelucire和Sterotex混合物，API标准品与初始时间点样品之间没有明显变化。

下图2示出了在4周的时间点，对可比托莫德标准品与5种二元混合物的比较。色谱显示出，在4周后，在Sterotex、PEG 1500和Geleol混合物中存在明显降解，而Gelucire混合物则存在轻微降解。4周后，Capryol混合物似乎显示非常少的降解(如果有的话)。

1.8 Sterotex和可比托莫德

Sterotex+可比托莫德样品显示出相关物质(Related substance，RS)在初始和第4周的时间点之间适度增加了5.5％，测定中增加了28％(表9)。在4周的时间点后，该样品还表现出不同的性质，在小瓶底部形成了固体沉淀，无法通过搅拌、加热或超声使该固体沉淀均质化。测定值的增加可能是由于采样期间混合物不均匀所致。

表9：Sterotex RS和测定结果。

1.9 Geleol和可比托莫德

Sterotex+可比托莫德样品显示出相关物质(RS)在初始和4周的时间点之间显著增加了13.6％，测定中显著降低了28％(表10)。在4周的时间点后，该样品还表现出不同的性质，在小瓶底部形成了固体沉淀，无法通过搅拌、加热或超声使该固体沉淀均质化。测定值的降低很可能归因于可比托莫德降解以及也归因于4周的时间点时样品不均匀。

表10：Geleol RS和测定结果。

1.10 Gelucire 43/01和可比托莫德

Gelucire 43/01+可比托莫德样品显示出相关物质(RS)在初始和4周的时间点之间增加了8.3％，测定中显著降低了11％(表11)。在4周的时间点后，该样品还表现出不同的性质，在小瓶底部形成了固体沉淀，无法通过搅拌、加热或超声使该固体沉淀均质化。测定值的降低可能归因于可比托莫德降解以及也归因于4周的时间点时样品不均匀(低的初始测定结果也表明了如此)。

表11：Gelucire 43/01RS和测定结果。

1.11 PEGl500和可比托莫德

PEG1500+可比托莫德样品显示出相关物质在初始和4周的时间点之间增加了6.6％，测定中显著降低了11％(参见表12)。然而，没有观察到分散特性的变化。

表12：PEGlS00 RS和测定结果。

1.12 Capryol PGMC和可比托莫德

Capryol PGMC+可比托莫德样品显示出相关物质(RS)在初始和4周的时间点之间少量增加了8.3％，测定值稍微增加了4％(表13)。没有观察到分散特性的变化。

表13：Capryol PGMC RS和测定结果。

基于Capryol PGMC的体系降解的量最少。另外，值得注意的是，在疏水性高熔点蜡体系中观察到再分散性问题，但Capryol和PEG体系未观察到该问题，表明了这可能与疏水性环境中的可比托莫德聚集有关。实施例3为关于在这些赋形剂中包含少量抗氧化剂和pH缓冲材料以使降解最小化的进一步工作。

1.13结论

所有研究的混合物均提供了没有显示出任何溶解度的悬浮液，因此，可比托莫德将被制成悬浮液用于进一步开发。

在制备所有悬浮液的过程中检测到不同程度的降解。基于Capryol PGMC的体系降解的量最少。在可比托莫德/赋形剂相容性研究中可比托莫德明显降解的原因可能是由于可比托莫德对样品制备中使用的氧化以及酸降解和温度敏感。在疏水性高熔点蜡体系中观察到了再分散性问题，但Capryol和PEG体系未观察到该问题表明了分散性可能与疏水性环境中的可比托莫德聚集有关。

实施例2-基础核心制剂

实施例1已经证明，就与可比托莫德的化学相容性而言，Capryol PGMC是最合适的载体材料。预计该载体会相对快地释放出可比托莫德，因此建议添加羟丙基甲基纤维素(HPMC)。该研究的目的是：第一，研究在Capryol PGMC赋形剂中可达到的可比托莫德悬浮液的极限，以确定是否可以将足够的可比托莫德悬浮以达到合理/合适的可比托莫德浓度，并且该悬浮液在增加的可比托莫德装载量下仍然是可使用的；第二，研究Methocel/HPMC在Capryol PGMC中的可悬浮性极限，并目测评估Capryol PGMC中各种浓度和组成的HPMC的凝胶形成性质，从而确定最合适的组成和浓度，以供进一步研究；第三，研究各种不同的可比托莫德/Capryol/HPMC组成和浓度的可使用性和可视凝胶形成特性。

2.1材料

表14：赋形剂和材料列表

2.2只有Capryol的可比托莫德悬浮极限方法

通过重复以下步骤来评估在只有Capryol中的可比托莫德悬浮极限：(i)向Capryol中添加API；(ii)刮刀搅拌；以及(iii)超声，直到悬浮液由于，例如太粘稠形成不会分解的团聚而变得不可使用。

2.3 HPMC/Capryol混合物的初步分散性测试方法

使用以下方法对五种不同比例的HPMC/Capryol混合物进行初步分散性测试：在500ml的烧杯中填充250ml的Milli-Q水，并将其置于37℃水浴中，并使温度达到平衡。将1g下表15和16中制备的五种混合物中的每一种加入烧杯中，并通过磁力搅拌器轻轻搅拌。本研究使用两种等级的HPMC，HPMC 1是Methocel K100M高分子量HPMC，HPMC 2是Methocel E3低分子量HPMC。

在初始添加样品时、5分钟、30分钟、1小时、2小时、4小时、5小时和24小时时间点，对分散性测试结果，例如溶液颜色、颗粒、沉淀、团聚物等进行目视观察。在5小时时间点之后，停止搅拌并且使溶液沉降24小时。

表15：高粘度HPMC/赋形剂分散性测试混合物组成(HPMC 1是Methocel K100M高粘度HPMC)

表16：高粘度和低粘度HPMC/赋形剂分散性测试混合物组成(HPMC 1是MethocelK100M高粘度HPMC；HPMC 2是Methocel E3低粘度HPMC)

2.4可比托莫德Capryol HPMC制剂研究

制备以下样品用于HPMC/Capryol/可比托莫德的初步分散性测试，并评估其可使用性。使用了两种等级的HPMC，其中3种混合物基于高分子量HPMC 1(Methocel K100M)，其余2种混合物是高分子量HPMC 1(Methocel K100M)和低分子量HPMC 2(Methocel E3)的混合物。这是为了检查结合的低分子量和高分子量HPMC混合物是否会比只有高分子量HPMC 1的混合物更快地形成凝胶，以及研究对制剂的可使用性的影响。

通过将API和HPMC逐步添加到Capryol中，并在添加之间在25℃进行15分钟的超声处理，以产生精细均匀的悬浮液，从而制备样品。所制备的五个样品在下表17和18中进行了详细说明。

表17：高粘度HPMC/赋形剂/可比托莫德分散性测试混合物组成(HPMC 1是Methocel K100M高粘度HPMC)

表18：高粘度和低粘度HPMC/赋形剂/可比托莫德分散性测试混合物组成(HPMC 1是Methocel K100M高粘度HPMC；HPMC 2是Methocel E3低粘度HPMC)

2.5可比托莫德/Capryol/HPMC分散性测试方法

上表17和18中列出的HPMC/Capryol/API混合物的初步分散性测试是通过将混合物在37℃在温和搅拌下加入蒸馏水中进行的，并在添加后的不同时间间隔记录观察结果。加入后5小时停止搅拌。

2.6只有Capryol的可比托莫德悬浮极限结果

表19中详细列出了使用可比托莫德和Capryol PGMC在25℃的可比托莫德悬浮极限研究的结果。数据表明在Capryol PGMC中最大值13％-14％的可比托莫德(相当于大约53mg可比托莫德/胶囊)是可比托莫德在二元体系中的可悬浮性的可能极限。

表19：API/Capryol PGMC悬浮极限研究结果

2.7 HPMC/Capryol混合物的初步分散性测试结果

基于可悬浮性极限研究，制备了5％至15％HPMC 1的HPMC在Caproyl PGMC中的五种混合物(高分子量HPMC)(表15)以及HPMC 1(高分子量HPMC)和HPMC 2(低分子量HPMC；表16)的掺合物用于分散性研究。下表20详细列出了HPMC/只有Capryol的分散性研究的结果。数据证实，高分子量HPMC 1混合物全部形成了有效的凝胶基质。HPMC 1的浓度越高，分散时间越长。

表20：HPMC/赋形剂混合物的初步分散性测试结果

2.8可比托莫德/Capryol/HPMC制剂研究结果

基于对可比托莫德和HPMC在Capryol PGMC中的悬浮负载量的研究，以及对HPMC/Capryol混合物在水中的分散特性的评估，如第2.4节中表17和表18中所描述的，制备了许多原型制剂。

在制备这些样品时，在最后添加可比托莫德后，混合物变成浓稠的不可使用的糊状物，这可能是由于在每一步添加时可比托莫德的量过多，导致使系统形成悬浮液的能力负担过重。这可以通过使总制剂中可比托莫德的总浓度为11.5％，但可比托莫德相对于Capryol PGMC赋形剂的实际浓度在12.1％和13.5％之间(这接近悬浮极限)来解释。加入额外的CaproylPGMC，并将混合物在25℃进行超声处理直至获得均匀的悬浮液。在较小的步骤中添加额外量的HPMC和可比托莫德，以使制剂达到正确的组成，然而，在最终添加API之后，所有5种混合物再次变成浓稠的糊状物。然后将混合物高剪切混合1分钟以确保温度保持低于30℃，在最终的高剪切混合之后，将所有制剂在25℃超声15分钟，结果在下表21中详述。

这些结果表明，在11.5％的可比托莫德负载量下，三元混合物中可容纳的HPMC的最高含量约为10％。

表21：可比托莫德/HPMC/Capryol混合物配制结果

2.9可比托莫德/赋形剂/HPMC分散性测试结果

使用混合物活性物质1(5％HPMC1、HMW)、活性物质2(10％HPMC 1、HMW)和活性物质4(5％HPMC1和5％HPMC2)进行分散性研究，因为这些是仅有的可使用的混合物。表22中详细列出了API/Capryol/HPMC的分散性评估结果。

还进行了活性物质和Capryol的二元混合物的分散性评估。一将制剂加入水中，该分散体似乎立即且完全分散。

表22：API/赋形剂/HPMC分散性测试结果

看来所有制剂在与水接触时都形成胶凝基质。这些基质会随着时间而侵蚀。3小时的评估数据(表22)表明，低分子量HPMC的存在会加速侵蚀过程。数据还表明，包含可比托莫德的制剂的分散性似乎快于HPMC在Capryol PGMC中的二元混合物，这表明可比托莫德的亲水性可能促进了剂型分散。

2.10结论

该研究已经表明，可比托莫德与Capryol PGMC结合的二元系统的极限约为13％。可以使用5％-15％HPMC制备基于HPMC的凝胶系统，该凝胶系统可潜在地调节药物释放。基于该理解，对五种包含11.5％可比托莫德、5-15％HPMC的原型制剂进行了评估。选择相对于完全制剂为11.5％w/w的可比托莫德负载量，因为这样相对于Capryol PGMC，可比托莫德的负载量为13.7％至15.6％(假设HPMC不会有助于改善可比托莫德的负载量，但将其加入作为释放改性剂)。基于对这些制剂的分散特性的评估，建议可将5％-10％的高分子量HPMC 1用作基础制剂，用于评估包衣靶向结肠释放的研究。

实施例3-含有抗氧化剂和缓冲剂的核心制剂的制备

下表23中详细列出了该实施例中使用的赋形剂和其他材料。

表23：材料

3.1 Capryol PGMC和可比托莫德基础制剂的制备

表24中详细列出了Capryol PGMC和可比托莫德基础制剂的组成。如下制备Capryol PGMC和可比托莫德基础制剂，称量13.37g Capryol PGMC放入容器中。向其中分多次添加1.84g的可比托莫德API，每次0.4g至0.5g。在每次添加API之间，用刮刀将制剂混合，然后进行30℃高剪切混合，持续时间不超过1分钟，直到获得流体和明显均匀的悬浮液。向该悬浮液中添加0.8g的Methocel K100M HPMC并用刮刀混合，然后再次进行30℃高剪切混合，持续时间不超过1分钟，直至获得流体和明显均匀的悬浮液。转移两个大约2g的悬浮液样品。在分析之前，将一个样品存储在2℃-8℃，然后将第二个样品静置在40°/75％RH下稳定。

表24

3.2 Capryol PGMC、可比托莫德以及抗氧化剂制剂的制备

表25中详细列出了Capryol PGMC、可比托莫德以及抗氧化剂制剂的组成。从在3.1节中制备的制剂，Capryol PGMC和可比托莫德基础制剂中，将12g样品称量到容器中，并向其中加入0.012g BHT。然后将制剂进行高剪切混合，持续时间不超过1分钟或30℃，直到获得流体和明显均匀的悬浮液。转移大约两个2g的悬浮液样品。在分析之前，将一个样品存储在2℃-8℃，然后将第二个样品静置在40°/75％RH下稳定。

表25：Capryol PGMC、可比托莫德以及抗氧化剂制剂组成

*认为量对制剂的总体组成的影响可忽略不计，因此无需重新计算组成

3.3 Capryol PGMC、可比托莫德、抗氧化剂以及pH缓冲液制剂的制备

表26中详细列出了Capryol PGMC、可比托莫德、抗氧化剂以及pH缓冲液制剂的组成。从在3.2节中制备的样品，Capryol PGMC、可比托莫德以及抗氧化剂制剂中，将6g样品称量到容器中，并向其中加入0.03g氨丁三醇。然后将制剂进行高剪切混合，持续时间不超过1分钟或30℃，直到获得流体和明显均匀的悬浮液。转移两个大约2g的悬浮液样品。在分析之前，将一个样品存储在2℃-8℃，然后将第二个样品静置在40°/75％RH下稳定。

表26：Capryol PGMC、可比托莫德、抗氧化剂以及pH缓冲液制剂组成

*认为量对制剂的总体组成的影响可忽略不计，因此无需重新计算组成

3.4物理和化学稳定性评估

在初始和在40℃/75％Rh下储存四个星期后，对本体混合物进行了物理和化学评估。对于物理评估，肉眼评估样品的外观变化，重点是颜色和物理性质。

对于化学分析，使用以下方法：

将样品在X Bridge BEH C18、2.5μm，4.6mm×50mm柱上在60℃下以0.4ml/min的流速运行，运行时间为60分钟，检测波长为260nm。进样量为40μl，进样器温度为5℃。流动相组成如下：

·流动相A 3％乙腈的0.2％TEA溶液、1％HFIP，

·流动相B 12％乙腈的0.2％TEA溶液、1％HFIP，

·流动相C乙腈，

·流动相D水。

稳定下来的样本的标识如下。

·1233/071/01T＝0周时间点的第3.1节的Capryol PGMC和可比托莫德基础制剂

·1233/071/02T＝4周时间点的第3.1节的Capryol PGMC和可比托莫德基础制剂

·1233/072/01T＝0周时间点的第3.2节的Capryol PGMC、可比托莫德以及抗氧化剂制剂

·1233/072/02T＝4周时间点的第3.2节的Capryol PGMC、可比托莫德以及抗氧化剂制剂

·1233/072/03T＝0周时间点的第3.3节的Capryol PGMC、可比托莫德、抗氧化剂以及pH缓冲液制剂

·1233/072/04T＝4周时间点的第3.3节的Capryol PGMC、可比托莫德、抗氧化剂以及pH缓冲液制剂

3.5物理评估

在40℃/75％RH下进行四周稳定性储存之前和之后，对制剂进行物理评估。所有这三种制剂均形成白色悬浮液，稳定性储存后无明显物理变化。

3.6化学评估

在40℃/75％RH下进行四周稳定性储存之前和之后，对制剂的测定和相关物质进行化学评估。平均结果汇总在表27中，个体结果汇总在表28中。测定结果显示出，在初始和四周时间点之间存在一些差异(基础制剂增加13.8％，含抗氧化剂的基础制剂减少9.1％，含抗氧化剂和pH缓冲液的基础制剂增加8.9％)，但是在该阶段这是常见的，因为少量样品的均质化以及该方法不是特定于制剂的。因此，使用相关物质含量作为稳定性的指标。结果显示出，对于所有三种制剂，在4周时间内的相关物质的变化非常低。对于基础制剂，相关物质增加0.67％，对于含抗氧化剂的基础制剂，相关物质减少0.67％，而对于含抗氧化剂和pH缓冲剂的基础制剂，相关物质减少0.07％。在40℃/75％Rh下储存四周后，两种含有其他赋形剂的制剂均表现出比基础制剂提高的化学稳定性。

基本制剂结果与实施例1的先前结果相比具有优势。与本研究中的5.31％(T＝0)和6.07％(T＝4)相比，先前研究中的相关物质显示为5.24％(对于T＝0)和7.05％(对于T＝4)，表明该基础制剂确实有轻微降解。基于观察到的结果，建议在制剂中包含抗氧化剂。另外，为了支持在制造过程中增加操控，建议还包含氨丁三醇pH缓冲液。

此外，参照物可比托莫德原料的杂质含量(5.3面积％)与T＝0结果相似，表明该物质在配制过程中是稳定的。

还应注意的是，在制造过程中，氨丁三醇pH缓冲液在Capryol PGMC中显示出一定的不溶性，剩余的不溶性氨丁三醇形成非常细的悬浮液。因此，氨丁三醇可能悬浮在继续制备的原型制剂中。

表27：T＝0周和T＝4周时间点的结果

*结果是重复分析的平均值。

表28：T＝0周和T＝4周时间点的个体结果

3.7结论

结果显示出，对于所有三种制剂，在升高的温度下，在4周内相关物质的变化非常低。对于基础制剂，据报告杂质增加最多。在40℃/75％Rh下储存四周后，两种含有其他赋形剂的制剂均表现出不变的或降低的杂质含量。根据观察到的结果，添加抗氧化剂与pH缓冲液/添加抗氧化剂不添加pH缓冲液，与Capryol PGMC/可比托莫德相容，并且对化学降解具有积极的稳定作用。另外，配制过程没有引起混合物的任何化学降解。

实施例4-包衣

下表29中详细列出了本研究中使用的赋形剂、API和其他材料，并与之前的实施例相同。

表29：使用的材料

4.1用于未包衣胶囊的本体混合物的制备和胶囊的制备

首先在不锈钢容器中制备本体混合物。表30详细列出了140粒胶囊的制剂组成和所需重量。将所需量的Capryol PGMC(41.604g)分配到合适的容器中，并向其中添加0.050g的BHT和0.200g的氨丁三醇。然后将制剂进行30℃高剪切混合，持续时间不超过5分钟，直到所有固体材料完全溶解。然后将所需量的可比托莫德(6.663g)等分分配到混合物中，并用刮刀混合以润湿粉末。然后将制剂进行30℃高剪切混合，持续时间不超过5分钟，直到获得均匀的悬浮液。从该混合开始，向均匀的悬浮液中，加入所需量的Methocel K100M(2.281g)，并用刮刀混合以润湿粉末。然后将制剂再次进行30℃高剪切混合，持续时间不超过5分钟为，直到获得均匀的悬浮液。

制备后，将混合物手工填充到1号白色明胶Coni-Snap胶囊中，达到目标填充重量362.6mg，上限389.8mg，下限335.4mg。然后在Quali-Seal台式刻度带封机(Quali-Sealbench scale banding machine)上，使用标准25％明胶带封溶液对已填充胶囊进行带封。然后将带封胶囊置于室温下风干至少6小时。此后，对胶囊进行真空测试(＜-20mmHg)，然后目视检查胶囊是否有泄漏迹象。最后，将胶囊存储在2℃-8℃的冰箱中的双层聚乙烯袋中，直到需要进行包衣。

表30：制剂组成。

*校正的可比托莫德的批量计算为：[(目标批次尺寸)×(41.7×1.14)](计算结果四舍五入到小数点后第二位)

用于可比托莫德测定的校正因子为1.14。Capryol PGMC的校正量计算为：总批量-[(可比托莫德的校正批量)+(Methocel K100M的批量)+(BHT的批量)+(氨丁三醇的批量)]。

4.2包衣溶液1和包衣溶液2的制备

下面详细介绍下面两种包衣溶液的制备方法。表31详述了包衣溶液1所需的组成和重量，表32详述了包衣溶液2所需的组成和重量。将所需量的Eudragit L30和EudragitFs30分配到合适的容器中，并使用磁力搅拌板搅拌至少10分钟。混合后，将所需量的无菌水(254.15g)分配到一个单独的容器中。向其中分配所需量的滑石粉，并用刮刀混合以润湿滑石粉(27.50g)。然后将所需量的柠檬酸三乙酯分配到装有水和滑石粉的容器中，并将混合物高剪切混合至少10分钟，直到形成均匀的悬浮液。将水/滑石粉/柠檬酸三乙酯混合物缓慢添加到Eudragit L30和FS30混合物中，将悬浮液搅拌至少10分钟，然后通过≤500μm的不锈钢筛过滤。使过滤的混合物保持搅拌直到需要进行包衣。

表31：包衣溶液1所需的组成和重量

表32：包衣溶液2所需的组成和重量

4.3胶囊包衣

用包衣溶液1或包衣溶液2对胶囊进行包衣。每种包衣溶液总共包覆43个胶囊。将所需数量的要包衣的胶囊添加到包衣机碗中。使用流化床包衣机(Strea-1)对胶囊进行包覆。在整个包覆过程中定期检查胶囊的重量，并根据需要调整包覆的施用率。继续包覆直到将胶囊包覆至每个胶囊50mg的目标。接着使胶囊在室温下固化，然后目视分类除去任何有缺陷的胶囊。最后，在溶出测试之前，将胶囊保存在2℃-8℃的冰箱中。

4.4溶出测试

溶出测试是在37℃在两个缓冲阶段过程中进行的(最初使用0.1M HCl，通过目视检查胶囊是否破裂，然后将胶囊转移至pH 6.8磷酸缓冲液(phosphate buffer)阶段直至完成)。使用USP设备2，搅棒速度为50rpm，介质体积为900ml，样品体积为1ml。在pH 6.8缓冲液阶段期间，在5、10、15、20、30、45、60、90、120分钟，然后3、4、5、6、7、8、12、18、24小时的时间点采集样品。对于每个胶囊批次和时间点，测试两个胶囊(n＝2)。然后在每个时间点每个胶囊进行一次注射来分析样品。

对于化学分析，使用以下方法。

样品在X Bridge BEH C18、2.5μm柱上在60℃下以0.4ml/min的流速运行，运行时间为16分钟，检测波长为260nm，采样器温度为5℃。流动相组成如下：

流动相A 3％乙腈的0.2％TEA溶液、1％HFIP，

流动相B 12％乙腈的0.2％TEA溶液、1％HFIP，

4.5制剂pH缓冲液水平的评估

为了评估氨丁三醇的溶解度和该缓冲液对pH的影响，在以下条件下制备了10g混合物：在闪烁瓶中，氨丁三醇在Capryol PGMC中的负载量为0.01％、0.05％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％和0.5％。然后将小瓶高剪切混合至少2×2分钟，然后使其沉降，所有样品均具有可见的不溶物，因此将样品再次高剪切混合2分钟，并在取样进行pH分析之前进行目测评估。pH分析包括将样品在14000RPM下离心10分钟以分离出不溶物，然后用3g去离子水稀释1g澄清上清液，充分混合并测量pH。

结果和讨论

4.6胶囊制造

制剂制备没有问题，并且均质性的目视评估是可以接受的。通过手工填充并使用Qualiseal台式刻度带封机带封将制剂封装，没有任何明显的观察结果或问题。将所有胶囊填充在可接受的重量范围内，最小填充重量为355.3mg，最大填充重量为383.0mg。在真空分选中，没有发现胶囊泄漏，因此所有胶囊均被认为是可接受的。为了使膨胀胶囊和活性胶囊流化，使用了从4.75至7.25的风扇速度。将胶囊均匀地包覆并且包衣的表面是光滑的。

4.7未包衣和包衣胶囊溶出测试的结果

表33和图3详细描述了未包衣和包衣胶囊的溶出测试结果。未包衣胶囊不进行两阶段缓冲液溶解评估，仅在pH 6.8缓冲液中进行测试。结果显示出，未包衣胶囊在暴露于pH6.8缓冲液后5至10分钟内开始释放出可比托莫德，其中80％的可比托莫德释放发生在大约1.5小时内。然后，胶囊在大约3小时内达到完全释放。结果表明，HPMC凝胶基质可能会通过形成物理屏障而具有减慢可比托莫德从胶囊的释放速率的效果。制剂产生的屏障延迟了可比托莫德从制剂基质向溶出介质的迁移。

包覆有包衣溶液1(50：50L：S的聚合物比例)的胶囊在暴露于0.1M HCl的2小时期间没有显示出可见的胶囊破裂迹象。转移至pH 6.8缓冲液后，胶囊显示出可比托莫德释放开始的延迟，大约1小时后开始释放。释放延迟归因于所用的Eudragit聚合物的组合，L30聚合物在暴露于pH 6.8介质时发生溶解。与L30聚合物相比，S聚合物对介质的抵抗力更大，并且随着L30聚合物的溶解，胶囊壳将变得部分暴露，从而使可比托莫德能够移入溶出介质。然后，可比托莫德在大约10小时内稳定释放，这是由于L30聚合物产生的孔径降低了溶出介质的流入和流出以及HPMC凝胶基质限制了从胶囊芯释放的制剂量的组合效果。6小时后释放了大约80％的可比托莫德，此后释放速度减慢，直到大约12小时后达到完全释放。

包覆有包衣溶液2(25：75L：S的聚合物比例)的胶囊在暴露于0.1M HCl的2小时期间没有显示出可见的胶囊破裂迹象。转移至pH 6.8缓冲液后，胶囊显示出可比托莫德释放开始的延迟，大约2小时后开始释放。释放延迟归因于所用的Eudragit聚合物的组合，L30聚合物在暴露于pH 6.8介质时发生溶解。与50：50包衣聚合物制剂相比，较高的S聚合物含量将提供对介质的更大抵抗力，因此释放延迟更大。然后，可比托莫德在大约16小时内稳定释放，这是由于L30聚合物产生的孔径降低了溶出介质的流入和流出以及HPMC凝胶基质限制了从胶囊芯释放的制剂量的组合效果。

表33：未包衣胶囊和包衣胶囊的溶出测试结果。

RSD＝相对标准偏差

4.8制剂pH缓冲液水平的评估

表34详细列出了该研究的结果。所有样品均显示出氨丁三醇的些许不溶性，较低负载量的样品0.05％和0.01％显示出最小不溶性，仅剩下一些细小的不溶物。所有样品的pH值始终保持稳定，尽管在0.01％的负载水平下pH值可能开始降低。

表34：氨丁三醇溶解度和pH评估结果

4.9结论

已成功制造了含有可比托莫德和赋形剂的胶囊。然后用Eudragit L30 D-55和FS30D的组合以50：50或25：75的比例包覆胶囊。包衣和未包衣的胶囊均进行溶出测试。未包衣胶囊仅经受pH 6.8缓冲液，并在3小时内显示出持续释放。将包衣胶囊在0.1M HCl中放置2小时，然后在pH 6.8磷酸盐缓冲液中放置24小时。两种包覆均能防止胶囊在酸性介质中破裂，然后通过使包衣聚合物与HPMC胶凝基质结合，能够在pH 6.8磷酸盐缓冲液中持续释放。基于获得的结果，可通过改变L与S包衣聚合物的比例来改变释放曲线，同时保持胶囊填充制剂。

实施例5-批量测试数据

作为技术批量生产的一部分，在填充期间评估了本体混合物的均匀性和胶囊含量的均匀性。

5.1材料

表35概述了整个研究中使用的所有材料的详细信息。

表35：用于技术批量生产的材料

5.2本体混合物制备

表36提供了制剂组成的详细信息。在带盖的标记的不锈钢容器中制备制剂，并添加114.0g Capryol PGMC。向Capryol PGMC中加入0.139g BHT，并将所得混合物在氮气下以全速高剪切混合2分钟，直到BHT完全溶解。此后，向混合物中加入0.278g氨丁三醇，并在氮气下，使用高剪切混合器以全速搅拌5分钟进行均质化，进行两次，直至氨丁三醇明显完全均匀。将总计18.26g的可比托莫德以等分添加到本体混合物中，并在氮气下以全速高剪切混合4×5分钟和1×2分钟的时间，直至达到明显均匀的悬浮液。最后，等分添加6.24g的Methocel K100M，并在氮气下以全速高剪切混合1×5分钟和1×4分钟时间，直至获得明显均匀的悬浮液。然后将混合物在-21in汞柱(英寸汞柱)的真空下脱气8分钟，以除去本体混合物中存在的空气，并确保在Hibar填充机上进行有效填充。

表36：41.7mg的可比托莫德本体混合物制剂

5.3胶囊填充和带封，本体混合物采样和pH评估方法

HiBar填充机装配1号工具。计算12粒胶囊的空重，并用于计算填充重量控制图上的极限。然后将本体混合物转移到HiBar料斗中，保持在氮气下，并使用设置为112rpm的顶置式搅拌器搅拌。然后将HiBar设置为以目标重量362.6mg进行填充，极限为389.8mg(上限)和335.4mg(下限)。开始填充，并且在整个运行过程中以15分钟的间隔对胶囊重量进行监控。

通过从制造运行开始、中间和结束采样0.5g的本体混合物，并用5g的去离子水(最初使用4g的去离子水，但为了加工性能又添加了1g去离子水)稀释样品来评估制剂的pH值。然后使用手持式pH探针测量pH。

然后，使用1号工具在Quailseal台式刻度带封机用25％明胶带封溶液对胶囊进行带封。填充和带封阶段完成后，将胶囊置于环境温度下干燥。在胶囊带封期间，从制造运行开始、中间和结束，每个时间点分离出十个胶囊用于含量均匀性评估。

5.4包衣悬浮液的制备

使用以下方法制备包衣悬浮液，将156.28g的Eudragit L30 D-55和156.30g的Eudragit FS 30D称取到容器中，并使用磁力搅拌器搅拌至少10分钟(表37)。向第二个容器中称取381.27g无菌水，并向其中添加41.26g滑石粉，然后通过刮刀混合以润湿滑石粉。当滑石粉完全润湿时，加入15.01g柠檬酸三乙酯，并用刮刀搅拌混合物。然后将该混合物以全速高剪切混合至少10分钟，以产生明显均匀的悬浮液。然后将得到的悬浮液添加到Eudragit混合物中，并使用磁力搅拌器搅拌至少10分钟，然后通过500μm不锈钢筛过滤。将过滤的悬浮液保持在恒定搅拌下。

表37：包衣悬浮液的标称组成

5.5胶囊包衣方法

对填充并带封的胶囊计数，以给出要包衣的胶囊的确切数目，并使用填充并带封的胶囊的平均重量来计算目标包衣胶囊重量。设置包衣机，并调整蠕动泵的设置以提供所需的包衣悬浮液的流速。然后将胶囊转移到包衣机中，使之流化并开始包覆。胶囊上的包衣看起来是均匀和光滑的。然后使胶囊在环境温度下固化。接着目视检查胶囊并除去任何有缺陷的胶囊。确定剩余的包衣胶囊的平均重量，然后将胶囊储存在2℃-8℃的双层聚乙烯袋中。

5.6泡罩包装方法。

设置台式泡罩包装机，并准备10条空的泡罩带进行泄漏测试，以确认机器性能。然后将10个空的泡罩带浸入水中，并经历0.5巴的绝对真空30秒，然后目视评估是否有任何不合格的囊袋。接着对胶囊进行泡罩包装直至完成，此后再制备10个空的泡罩，并重复进行泄漏测试。然后将完整的泡罩贴上标签，之后在稳定下来之前将其储存在2℃-8℃下。

结果和讨论

5.7技术批量制造

填充和带封后可获得总计306粒胶囊，从这些胶囊中取样30粒胶囊用于含量均匀性测试。由于带中的气泡或不完整的带封，目视分类除去了9粒胶囊。对胶囊进行包衣，在包衣过程中没有发生问题。对总计267粒进行了包衣。最后，由于将胶囊泡罩包装在含有十个胶囊的泡罩中，260粒胶囊进行了泡罩包装，因此将剩余的7胶囊进行泡罩包装，并切掉空的泡囊袋。图5中示出了初始溶出测试的结果。

5.8本体混合和含量均匀性评估

由于个体胶囊的含量均匀性结果在90％至100％之内，因此没有对从料斗中取出的本体混合物样品(如上所述)进行测试。表38、表39和图4详细介绍了制造运行开始、中间和结束的含量均匀性结果。含量均匀性结果符合平均偏差(Average variation，AV)小于15的验收标准。所有个体结果在90％至110％之内。运行的中间产生的胶囊显示出非常好的一致性，AV为2.4。运行结束时生产的胶囊也显示出良好的一致性，AV为5.5。所有结果均显示可接受的变化，且均在AV限度(小于15)内。在所有样品中，胶囊填充重量和可比托莫德浓度之间没有显示出明显的关系(表39)。

表38：含量均匀性测定结果

表39：含量均匀性胶囊重量

5.9 pH评估结果

将该本体混合物按第5.2节进行取样，在运行开始、中间和结束时对该本体混合物进行pH评估的结果在下表40中详细列出。在整个运行过程中，pH保持在7.62至7.88之间，这表明与包含氨丁三醇缓冲液的pH值一致性。本体混合物的pH与先前对氨丁三醇的CapryolPGMC溶液的评估、以及对溶解在去离子水中的未包衣的完整胶囊的评估(给出在7.6至7.8之间的pH结果)一致，。

表40：pH评估结果

5.10结论

成功地将胶囊填充、带封和包衣，没有任何显著问题。由于API的低密度和物理性质，将API分批添加到容器中。含量均匀性结果满足AV小于15的验收标准。所有个体结果在90％至110％之内。

分析和生成的相关物质数据表明，API在制造过程中是稳定的，因为最终产品中相关物质的含量与起始材料中报告的相关物质相当。另外，参见图5，大规模制造的胶囊所产生的溶出曲线与先前实施例中获得的结果一致。

实施例6-稳定性测试

对上述实施例5中描述的包装在泡罩包装中的胶囊进行测试以评估API在长期储存期间的稳定性。使胶囊在25℃60％相对湿度(RH)下保存，或在40℃75％相对湿度下保存。

在开始时、一个月后和六个月后，记录总杂质和API的释放曲线。如上述实施例3的3.4节所述，使用HPLC确定总杂质。如上述实施例4的4.7节和实施例5中的溶出试验一样记录释放曲线。

表41：杂质评估结果

表41示出了所调查时间点的总杂质的结果。六个月后的少量降解显示出该胶囊适合长期储存。

图6示出了在测试开始时(点线)、在25℃/60％RH储存一个月后(虚线)以及在25℃/60％RH储存六个月后(实线)从胶囊中释放的API的释放曲线。

图7示出了在测试开始时(点线)、在40℃/75％RH储存一个月后(虚线)以及在40℃/75％RH储存六个月后(实线)从胶囊中释放的API的释放曲线。

图6和7均显示出API的释放曲线在调查的储存期间内不会随时间变化。这表明胶囊的内容物随着时间的流逝保持稳定并保持其释放特性。而且，即使在储存条件不理想的情况下也是如此，如在升高的温度(40℃)和相对湿度(75％)下储存的胶囊的情况也是如此。总之，实施例6中的结果证明了该胶囊在长期内具有良好的稳定性并保持其释放特性。

序列表

SEQ ID NO：1

5’-G*G*A*ACAGTTCGTCCAT*G*G*C-3’，其中星号(*)表示硫代磷酸酯键

SEQ ID NO：2

5’-GGAACAGTTCGTCCATGGC-3’

序列表

<110> 英德克斯制药公司

<120> 制剂

<130> N413008WO

<150> GB1807312.2

<151> 2018-05-03

<160> 2

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 19

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> SEQ ID NO: 1 Cobitolimod

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(4)

<223> phosphorothioate linkage between bases: 1-2, 2-3 and 3-4

<220>

<221> misc_feature

<222> (16)..(20)

<223> phosphorothioate linkage between bases: 16-17, 17-18 and 18-19

<400> 1

ggaacagttc gtccatggc 19

<210> 2

<211> 19

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> SEQ ID NO: 2

<400> 2

ggaacagttc gtccatggc 19