具体实施方式

本发明的示例实施例的描述如下。

虽然本发明已参考其示例实施例进行了具体显示和描述，但本领域的技术人员应当理解，在不偏离由所附权利要求书涵盖的本发明范围的情况下，可以在其中做出在形式和细节方面的各种改变。

本文引用的所有专利、公开的申请以及参考文献的传授内容都通过引用以其全文并入本文。

用于施用的化合物

本文描述的用于治疗脂肪性肝病(例如，NASH)的化合物为由以下结构式(I)表示的18-mer 5’至3’寡核苷酸：

5’-N¹N²N³N⁴N⁵N⁶-N⁷N⁸-dC^m-dG^c-N¹¹N¹²N¹³N¹⁴N¹⁵N¹⁶-N¹⁷N¹⁸-3’(I)或其药学上可接受的盐。

在结构式(I)中：

N¹至N⁶和N¹¹至N¹⁶各自独立地为2’-脱氧核糖核苷；

N⁷、N⁸、N¹⁷、和N¹⁸各自独立地为核糖核苷，例如，

2’-甲氧基-核糖核苷；

dC^m为具有以下结构式的5-甲基-胞嘧啶2’-脱氧核苷(“m⁵C-dRib”、“m⁵Cyt-dRib”、或“m⁵Cyt-dRibf”)：

dG^c为具有以下结构式的7-脱氮杂-鸟嘌呤2’-脱氧核苷(“c⁷G-dRib”、“c⁷Gua-dRib”、或“c⁷Gua-Ribf”)：

并且

任意两个相邻的核糖核苷是通过磷酸二酯接头或硫代磷酸酯接头来共价连接的，如由以下结构式表示：

应当理解，每个硫代磷酸酯键均引入指定为“Sp”或“Rp”的手性中心。除非另有指示，否则包括硫代磷酸酯接头的本发明的化合物可能包括Sp或Rp立体异构体。在一个实施例中，具有结构式(I)的化合物中的所有接头均为Sp硫代磷酸酯接头。

在具有结构式(I)的寡核苷酸的第一示例实施例中，N⁷为由以下结构式表示的鸟嘌呤2’-甲氧基-核苷(“G-Rib2Me”、“Gua-Rib2Me”、或“Gua-Ribf2Me”)：

在第二示例实施例中，N⁸为由以下结构式表示的尿嘧啶2’-甲氧基-核苷(“U-Rib2Me”、“Ura-Rib2Me”、或“Ura-Ribf2Me”)：

在第三示例实施例中，N¹⁷为鸟嘌呤2’-甲氧基-核苷。在第四示例实施例中，N¹⁸为尿嘧啶2’-甲氧基-核苷。

在具有结构式(I)的寡核苷酸的第五示例实施例中，N⁷为鸟嘌呤2’-甲氧基-核苷，N⁸为尿嘧啶2’-甲氧基-核苷，N¹⁷为鸟嘌呤2’-甲氧基-核苷，并且N¹⁸为尿嘧啶2’-甲氧基-核苷。

在具有结构式(I)的寡核苷酸的第六示例实施例中，N¹为胞嘧啶2’-脱氧核苷(“dC”或“dCyd”)，N²为胸腺嘧啶2’-脱氧核苷(“dT”或“dThd”)，N³为腺嘌呤2’-脱氧核苷(“dA”或“dAdo”)，N⁴为胸腺嘧啶2’-脱氧核苷，N⁵为胞嘧啶2’-脱氧核苷，并且N⁶为胸腺嘧啶2’-脱氧核苷。N⁷、N⁸、N¹⁷、以及N¹⁸的值和示例值如以上关于具有结构式(I)的寡核苷酸的第一至第五示例实施例所述。

在具有结构式(I)的寡核苷酸的第七示例实施例中，N¹¹为胸腺嘧啶2’-脱氧核苷，N¹²为胸腺嘧啶2’-脱氧核苷，N¹³为胞嘧啶2’-脱氧核苷，N¹⁴为胸腺嘧啶2’-脱氧核苷，N¹⁵为胞嘧啶2’-脱氧核苷，并且N¹⁶为胸腺嘧啶2’-脱氧核苷。N¹至N⁸、以及N¹⁷和N¹⁸的值和示例值如以上关于具有结构式(I)的寡核苷酸的第一至第六示例实施例所述。

在具有结构式(I)的寡核苷酸的第八示例实施例中，寡核苷酸由以下结构式表示：

5’-dC-dT-dA-dT-dC-dT-(G-Rib2Me)-(U-Rib2Me)-dC^m-dG^c-dT-dT-dC-dT-dC-dT-(G-Rib2Me)-(U-Rib2Me)-3’ (II)。

在具有结构式(I)的寡核苷酸的第九示例实施例中，寡核苷酸由以下结构式表示：

5’-dC-Sp-dT-Sp-dA-Sp-dT-Sp-dC-Sp-dT-Sp-(G-Rib2Me)-Sp-(U-Rib2Me)-Sp-dC^m-Sp-dG^c-Sp-dT-Sp-dT-Sp-dC-Sp-dT-Sp-dC-Sp-dT-Sp-(G-Rib2Me)-Sp-(U-Rib2Me)-3’(III)

或其药学上可接受的盐。在具体方面，由结构式(III)表示的寡核苷酸呈由结构式(IIIA)表示的钠盐的形式：

5’-dC-Sp-dT-Sp-dA-Sp-dT-Sp-dC-Sp-dT-Sp-(G-Rib2Me)-Sp-(U-Rib2Me)-Sp-dC^m-Sp-dG^c-Sp-dT-Sp-dT-Sp-dC-Sp-dT-Sp-dC-Sp-dT-Sp-(G-Rib2Me)-Sp-(U-Rib2Me)-3’·17Na⁺ (IIIA)。

在第十示例实施例中，在本文描述的方法中使用的寡核苷酸呈由结构式(III)表示的寡核苷酸的钠盐，并且在本领域中通常称作巴厘托兰或IMO-8400。非盐形式的IMO-8400的分子量为5800.67g/mol并且非盐形式的IMO-8400的分子式为C₁₇₉H₂₃₃N₅₂O₁₀₁P₁₇S₁₇。巴厘托兰的钠盐(在本文中也称为AVO010)由图2中示出的结构式表示。由图2中描绘的结构式表示的化合物的IUPAC名称为

5’-羟基-2’-脱氧-P-硫代胞苷酰-(3’→5’)-2’-脱氧-P-硫代胸苷酰-(3’→5’)-2’-脱氧-P-硫代腺苷酰-(3’→5’)-2’-脱氧-P-硫代胸苷酰-(3’→5’)-2’-脱氧-P-硫代胞苷酰-(3’→5’)-2’-脱氧-P-硫代胸苷酰-(3’→5’)-2’-O-甲基-P-硫代鸟苷酰-(3’→5’)-2’-O-甲基-P-硫代尿苷酰-(3’→5’)-2’-脱氧-P-硫代-5-甲基-胞苷酰-(3’→5’)-2’-脱氧-P-硫代-7-脱氮杂-鸟苷酰-(3’→5’)-2’-脱氧-P-硫代胸苷酰-(3’→5’)-2’-脱氧-P-硫代胸苷酰-(3’→5’)-2’-脱氧-P-硫代胞苷酰-(3’→5’)-2’-脱氧-P-硫代胸苷酰-(3’→5’)-2’-脱氧-P-硫代胞苷酰-(3’→5’)-2’-脱氧-P-硫代胸苷酰-(3’→5’)-2’-O-甲基-P-硫代鸟苷酰-(3’→5’)-3’-羟基-2’-O-甲基尿苷17钠盐。

如本文使用，术语“核糖核苷”是指具有以下结构式的化合物：

其中碱基可以是任意一种含氮碱基，如嘧啶衍生的碱基或嘌呤衍生的碱基；以及例如，核碱基腺嘌呤(A)、尿嘧啶(U)、鸟嘌呤(G)、胸腺嘧啶(T)、以及胞嘧啶(C)，其中的每一种均可任选地被修饰。除非另有具体指示，核糖核苷包括2’-羟基。2’-脱氧核糖核苷在2’位置处包括-CH₂-基团。

脂肪性肝病

当肝脏中累积过量的脂肪时，会发生脂肪性肝病。脂肪性肝病有两种主要类型。第一种类型的脂肪性肝病为非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)。第二种类型的脂肪性肝病为酒精性脂肪性肝病(ALD)。

NAFLD包括单纯性脂肪肝和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。单纯性脂肪肝意指在肝脏中有过量的脂肪，但不存在炎症。NASH比单纯性脂肪肝严重得多。NASH意指在肝脏中有脂肪并且还有炎症，并且在一些情况下会对肝细胞造成损伤。伴随NASH发生的炎症和肝细胞损伤会造成严重的问题，如肝纤维化(肝的瘢痕形成)、肝硬化(严重的肝的瘢痕形成)以及肝癌。

ALD包括酒精性肝炎和酒精性肝硬化。

在一些实施例中，本文描述的方法可进一步包括改善受试者的NAS评分。NAS评分可改善至少30％。

如本文所述的寡核苷酸或其盐的“治疗有效量”是当施用于患有疾病或病症的受试者时具有预期的治疗效果(例如减轻、改善、缓和、或消除该疾病或病症在该受试者中的一种或多种表现)的量。具有式(I)的化合物的治疗有效量可为从约0.5mg/kg至约50mg/kg。例如，从约0.5mg/kg至约25mg/kg以及0.5mg/kg至约20mg/kg。适合的剂量包括约0.75mg/kg、约1.5mg/kg、约3mg/kg、以及约6mg/kg。在具体实施例中，剂量为3mg/kg。在另一具体实施例中，剂量为3mg/kg并且将剂量每周施用一次。

如本文所用，治疗方法意指改善、预防或缓解症状和/或与障碍或病症相关的作用。障碍或病症为脂肪性肝病。在一个实施例中，脂肪性肝病为非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)。在特定实施例中，NAFLD为单纯性脂肪肝(脂肪变性)。在另一个实施例中，NAFLD为非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。

药物组合物/施用方法

本发明的组合物和方法可用于治疗有需要的受试者。在某些实施例中，受试者为哺乳动物(如人)或非哺乳动物。当施用于受试者(如人)时，组合物或化合物优选地作为药物组合物施用，该药物组合物包含例如本发明的化合物和药学上可接受的载体。药学上可接受的载体在本领域中是熟知的，并且包括例如水性溶液，如水或生理缓冲盐水或其他溶剂或媒介物，如乙二醇、甘油、油类(如橄榄油)或可注射的有机酯。在特定的实施例中，当此类药物组合物用于人施用、特别是用于侵入式施用途径(即，如注射或植入的途径，其规避了穿过上皮屏障的运输或扩散)时，水性溶液是无热原的或基本上无热原的。可以选择赋形剂以实现例如试剂的延迟释放或选择性地靶向一个或多个细胞、组织或器官。药物组合物可呈剂量单位形式，如片剂、胶囊(包括分散胶囊(sprinkle capsule)和明胶胶囊)、颗粒剂、用于重构的冻干剂、粉剂、溶液、糖浆剂、栓剂、注射剂等。该组合物还可存在于透皮递送系统(例如，皮肤贴剂)中。该组合物还可存在于适用于局部施用的溶液(如滴眼剂)中。

药学上可接受的载体可含有生理学上可接受的试剂，这些试剂起到例如稳定化合物(如本发明的化合物)、提高其溶解度或增加其吸收的作用。此类生理学上可接受的试剂包括例如碳水化合物(如葡萄糖、蔗糖或右旋糖酐)、抗氧化剂(如抗坏血酸或谷胱甘肽)、螯合剂、低分子量蛋白质或其他稳定剂或赋形剂。药学上可接受的载体(包括生理学上可接受的试剂)的选择取决于例如组合物的施用途径。制剂或药物组合物可以是自乳化药物递送系统或自微乳化药物递送系统。药物组合物(制剂)还可以是脂质体或其他聚合物基质，可在其中掺入例如本发明的化合物。脂质体(例如，包含磷脂或其他脂质)是无毒的、生理学上可接受的并且可代谢的载体，其制备和施用相对简单。

本文所使用的短语“药学上可接受的”是指在合理的医学判断范围内，适合于与受试者组织接触而不产生过度毒性、刺激性、过敏反应、或其他问题或并发症，同时具有相称的合理受益/风险比的那些化合物、材料、组合物、和/或剂型。

如本文所用，短语“药学上可接受的载体”意指药学上可接受的材料、组合物或媒介物，如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包封材料。在与配制品的其他成分相容并且对受试者无害的意义上，每种载体必须是“可接受的”。可用作药学上可接受的载体的材料的一些实例包括：(1)糖类，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；(4)粉末状黄芪胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，如可可脂和栓剂蜡；(9)油类，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；(10)二醇类，如丙二醇；(11)多元醇，如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；(12)酯，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲溶液；以及(21)用于药物配制品的其他无毒相容物质。

药物组合物(制剂)可通过多种施用途径中的任一种施用于受试者，这些施用途径包括例如口服(例如，水性溶液或非水性溶液或悬浮液中的灌服剂、片剂、胶囊(包括分散胶囊和明胶胶囊)、大丸剂、粉剂、颗粒剂、用于应用于舌头的糊剂)；通过口腔粘膜(例如，舌下)吸收；经肛门地、经直肠地或经阴道地(例如，以阴道栓剂、乳膏剂或泡沫剂)；肠胃外(包括以例如无菌溶液或悬浮液于肌内、静脉内、皮下或鞘内)；经鼻；腹膜内；皮下；透皮(例如作为应用于皮肤的贴剂)；以及局部(例如，作为应用于皮肤的乳膏剂、软膏剂或喷雾剂，或作为滴眼剂)。化合物还可以配制用于吸入。在某些实施例中，化合物可能会简单地溶解或悬浮于无菌水中。

配制品可以方便地以单位剂型存在并且可以通过药学领域熟知的任何方法制备。可以与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量将取决于所治疗的受试者、特定施用方式而变化。可以与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量通常是产生治疗效果的化合物的量。一般而言，在百分之百范围内，此量将在从约1％至约99％活性成分、优选地从约5％至约70％、最优选地从约10％至约30％的范围内。

制备这些配制品或组合物的方法包括将活性化合物(如本发明的化合物)与载体和任选地一种或多种辅助成分结合的步骤。通常，通过将本发明的化合物与液体载体或细碎固体载体或两者均匀且紧密地结合，并且然后如果需要，使产物成形来制备配制品。

适合用于口服施用的本发明的配制品可以呈胶囊(包括分散胶囊和明胶胶囊)、扁囊剂、丸剂、片剂、锭剂(使用调味基质，通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄芪胶)、亲液物、粉剂、颗粒剂的形式，或作为在水性液体或非水性液体中的溶液或悬浮液，或作为水包油或油包水液体乳剂，或作为酏剂或糖浆剂，或作为糖锭剂(使用惰性基质，如明胶和甘油、或蔗糖和阿拉伯胶)和/或作为漱口剂等，每一形式含有预定量的本发明的化合物作为活性成分。组合物或化合物还可以作为大丸剂、药糖剂或糊剂施用。

为制备用于口服施用的固体剂型(胶囊(包括分散胶囊和明胶胶囊)、片剂、丸剂、糖衣丸、粉剂、颗粒剂等)，将活性成分与一种或多种药学上可接受的载体(如柠檬酸钠或磷酸二钙)和/或以下任一种混合：(1)填充剂或增量剂，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和/或硅酸；(2)粘合剂，例如像羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯胶；(3)保湿剂，如甘油；(4)崩解剂，如琼脂-琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；(5)溶液阻滞剂，如石蜡；(6)吸收促进剂，如季铵化合物；(7)润湿剂，例如像鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(8)吸附剂，如高岭土和膨润土；(9)润滑剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠及其混合物；(10)络合剂，如经修饰的和未经修饰的环糊精；以及(11)着色剂。在胶囊(包括分散胶囊和明胶胶囊)、片剂和丸剂的情况下，药物组合物还可以包含缓冲剂。还可以使用如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等赋形剂，将相似类型的固体组合物用作软填充和硬填充明胶胶囊中的填充剂。

片剂可以通过任选地与一种或多种辅助成分压缩或模制来制备。可以使用粘合剂(例如明胶或羟丙基甲基纤维素)、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(例如羟基乙酸淀粉钠或交联的羧甲基纤维素钠)、表面活性剂或分散剂来制备压缩片剂。可以通过在合适的机器中模制用惰性液体稀释剂湿润的粉状化合物的混合物来制备模制的片剂。

药物组合物的片剂和其他固体剂型，如糖衣丸、胶囊(包括分散胶囊和明胶胶囊)、丸剂和颗粒剂，可以任选地刻痕(scored)或制备有用包衣和外壳，例如肠溶包衣和药物配制领域中熟知的其他包衣。也可以使用例如不同比例的羟丙基甲基纤维素将它们配制成使其中的活性成分缓慢或受控释放以提供所希望的释放曲线、其他聚合物基质、脂质体和/或微球。可以将它们例如通过细菌截留过滤器滤过，或通过并入呈无菌固体组合物形式的灭菌剂来灭菌，这些无菌固体组合物可以在使用前立即溶解于无菌水或一些其他无菌可注射介质中。任选地，这些组合物也可以含有遮光剂并且可以是如下组合物，该组合物仅或者优先在胃肠道的某一部分，任选地以延迟的方式释放一种或多种活性成分。可使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。活性成分还可以呈微囊化形式，如果适当，具有一种或多种上述赋形剂。

可用于口服施用的液体剂型包括药学上可接受的乳剂、用于重构的亲液物、微乳剂、溶液、悬浮液、糖浆剂和酏剂。除了活性成分以外，液体剂型可以含有本领域中常用的惰性稀释剂，例如像水或其他溶剂、环糊精及其衍生物、增溶剂和乳化剂，如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油类(特别地，棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢呋喃醇、聚乙二醇和山梨聚糖的脂肪酸酯类、及其混合物。

除了惰性稀释剂以外，口服组合物还可以包括辅助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂、着色剂、芳香剂和防腐剂。

除了活性化合物以外，悬浮液可以含有悬浮剂，例如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇和山梨聚糖酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂-琼脂和黄芪胶、及其混合物。

用于直肠、阴道、或尿道施用的药物组合物的配制品可以作为栓剂呈递，该栓剂可以通过将一种或多种活性化合物与一种或多种合适的无刺激性赋形剂或载体混合而制备，这些赋形剂或载体包含例如可可脂、聚乙二醇、栓剂蜡或水杨酸盐，并且该栓剂在室温下是固体但在体温下是液体，并且因此将在直肠或阴道腔中融化并释放活性化合物。

用于施用至口的药物组合物的配制品可以作为漱口剂、或口腔喷雾剂、或口腔软膏剂呈递。

可替代地或另外地，组合物可以配制用于经由导管、支架、线、或其他管腔内装置而递送。经由此类装置的递送对于递送至膀胱、尿道、输尿管、直肠、或小肠来说可能尤其有用。

适用于阴道施用的配制品还包括含有如在本领域已知是适当的此类载体的阴道栓剂、棉塞剂、乳膏剂、凝胶、糊剂、泡沫剂或喷雾剂配制品。

用于局部或透皮施用的剂型包括粉剂、喷雾剂、软膏剂、糊剂、乳膏剂、洗剂、凝胶、溶液、贴剂和吸入剂。可以将活性化合物在无菌条件下与药学上可接受的载体、以及与可能需要的任何防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。

除活性化合物之外，软膏剂、糊剂、乳膏剂和凝胶还可以含有赋形剂，如动物和植物脂肪、油类、蜡、石蜡、淀粉、黄芪胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、硅酸、滑石和氧化锌、或其混合物。

除活性化合物之外，粉剂和喷雾剂可以含有赋形剂，如乳糖、滑石、硅酸、氢氧化铝、硅酸钙以及聚酰胺粉剂、或这些物质的混合物。另外，喷雾剂可以含有常规的推进剂，如氯氟烃类和挥发性未经取代的烃类，如丁烷和丙烷。

透皮贴剂具有向身体受控递送本发明的化合物的另外优势。此类剂型可以通过将活性化合物溶解或分散于适当介质中来制备。吸收促进剂还可用于增加化合物经皮肤的通量。此通量速率可以通过提供速率控制膜或将化合物分散在聚合物基质或凝胶中来控制。

如本文所用，短语“肠胃外施用(parenteral administration和administeredparenterally)”意指除了肠内施用和局部施用之外的施用方式，通常是通过注射，并且包括但不限于，静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、真皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内和胸骨内注射和输注。

适合用于肠胃外施用的药物组合物包含与以下项组合的活性化合物：一种或多种药学上可接受的无菌等渗水性或非水性溶液、分散液、悬浮液或乳剂、或可以在使用之前即刻重构于无菌可注射溶液或分散液的无菌粉剂，这些溶液、分散液、悬浮液或乳剂、或无菌粉剂可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、使配制品与预期接受者的血液等渗的溶质、或悬浮剂或增稠剂。

可用于本发明药物组合物中的合适水性和非水性载体的实例包括水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)、及其合适的混合物、植物油(如橄榄油)、和可注射的有机酯(如油酸乙酯)。例如，可以通过使用包衣材料(如卵磷脂)、在分散液的情况下通过维持所需粒径、以及通过使用表面活性剂来维持适宜的流动性。

这些组合物还可以含有辅助剂，如防腐剂、润湿剂、乳化剂以及分散剂。可以通过包括多种抗细菌剂和抗真菌剂(例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚山梨酸等)来确保防止微生物的作用。还希望在组合物中包括等渗剂，如糖、氯化钠等。此外，可以通过包括延迟吸收的药剂(如单硬脂酸铝和明胶)来实现可注射药物形式的延长吸收。

在一些情况下，为了延长药物的作用，希望减慢来自皮下或肌内注射的药物的吸收。这可以通过使用水溶性不佳的结晶或无定形材料的液体悬浮液来实现。然后，药物的吸收速率取决于其溶解速率，而溶解速率又可能取决于晶体大小和结晶形式。可替代地，肠胃外施用的药物形式的延迟吸收通过将该药物溶解或悬浮在油媒介物中而实现。

可注射的贮库形式是通过在生物可降解的聚合物(如聚乳酸交酯-聚乙交酯)中形成主题化合物的微胶囊基质来制备。取决于药物与聚合物的比率以及所使用的特定聚合物的性质，可以控制药物的释放速率。其他可生物降解的聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。还通过将药物裹入与机体组织相容的脂质体或微乳剂中来制备可注射贮库配制品。

为了在本发明的方法中使用，活性化合物可以本身或作为药物组合物给予，该药物组合物含有与药学上可接受的载体组合的例如0.1％至99.5％(更优选地，0.5％至90％)的活性成分。

引入方法还可通过可再充电的或可生物降解的装置来提供。近年来已经开发了多种缓释聚合物装置，并且已经在体内针对药物(包括蛋白质生物药物)的受控递送进行了测试。多种生物相容性聚合物(包括水凝胶)，包括可生物降解的和不可降解的聚合物，可以用于在特定靶位点形成用于化合物持续释放的植入物。

可以改变药物组合物中活性成分的实际剂量水平，以获得一定量的活性成分，该活性成分的量有效实现对于特定的患者、组合物和施用方式的所希望的治疗响应，而对该患者没有毒性。

所选择的剂量水平将取决于多种因素，包括所使用的特定化合物或化合物的组合或其酯、盐或酰胺的活性，施用途径，施用时间，正在使用的一种或多种特定化合物的排泄速率，治疗持续时间，与所使用的一种或多种特定化合物组合使用的其他药物、化合物和/或材料，正在治疗的受试者的年龄、性别、体重、病症、一般健康状况以及既往病史，以及医学领域熟知的类似因素。

具有本领域普通技术的医师或兽医可以容易地确定并开出治疗有效量的所需药物组合物。例如，医师或兽医能以低于实现所希望的治疗效果所需的水平开始给药药物组合物和化合物，并且逐渐增加剂量直至实现所希望的效果。“治疗有效量”意指足以产生所希望的治疗效果的化合物浓度。通常应理解的是化合物的有效量将会根据受试者的体重、性别、年龄、以及病史而变化。影响有效量的其他因素可能包括但不限于受试者病症的严重程度、所治疗的障碍、化合物的稳定性、以及(如果需要)与本发明化合物一起施用的另一类治疗剂。更大的总剂量可以通过多次施用药剂来递送。确定功效和剂量的方法对本领域技术人员是已知的(Isselbacher等人(1996)Harrison’s Principles of InternalMedicine 13ed.[哈里森内科学原理(第13版)],1814-1882，将其通过引用并入本文)。

通常，本发明的组合物和方法中所使用的活性化合物的合适的日剂量将是化合物有效产生治疗效果的最低剂量的量。通常这种有效剂量将取决于上文所述的因素。

如果需要，活性化合物的有效日剂量可以在全天以适当的间隔作为单个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个亚剂量分开施用，任选地以单位剂型施用。在本发明的某些实施例中，活性化合物可能每天施用两或三次。在具体的实施例中，活性化合物将每天施用一次。

在某些实施例中，本发明的化合物是单独使用或与另一类治疗剂联合施用。如本文所用，短语“联合施用”是指两种或更多种不同治疗化合物的任一施用形式，该施用形式使得先前施用的治疗化合物仍在体内有效时施用第二化合物(例如，两种化合物在受试者中同时有效，这可能包括两种化合物的协同作用)。例如，不同的治疗化合物可以同时或依次在同一配制品或单独配制品中施用。在某些实施例中，不同的治疗化合物可以在一小时、12小时、24小时、36小时、48小时、72小时、或一周时间内相继施用。因此，接受此治疗的受试者可以得益于不同治疗化合物的组合作用。

在某些实施例中，相对于本发明化合物或一种或多种另外的治疗剂的每个单独施用，本发明化合物与一种或多种另外的治疗剂的联合施用提供了改善的功效。在某些实施例中，联合施用提供了累加效应，其中累加效应是指本发明化合物和一种或多种另外的治疗剂单独施用的每种效果的总和。

本发明包括本发明化合物的药学上可接受的盐在本发明组合物和方法中的用途。“药学上可接受的盐”意指在向接受者施用后能够直接或间接提供本发明化合物的任何无毒盐。“药学上可接受的抗衡离子”是在向接受者施用后从盐释放时并非毒性的盐的离子部分。在某些实施例中，本发明所设想的盐包括但不限于Na盐、Ca盐、K盐、Mg盐、Zn盐或其他金属盐。在具体实施例中，本发明的盐(由式(I)表示的化合物的盐)是钠盐。

湿润剂、乳化剂和润滑剂(如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁)以及着色剂、释放剂、包衣剂、甜味剂、调味剂和芳香剂、防腐剂和抗氧化剂也可以存在于组合物中。

药学上可接受的抗氧化剂的实例包括：(1)水溶性抗氧化剂，如抗坏血酸、半胱氨酸盐酸盐、硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠等；(2)油溶性抗氧化剂，如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基羟基茴香醚(BHA)、丁基羟基甲苯(BHT)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等；以及(3)金属螯合剂，如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。

除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语均具有与本披露所属领域中的普通技术人员通常所理解的相同含义。虽然其他化合物或方法可用于实践或测试，但某些优选的方法现描述于以下制备和方案的上下文中。

实验方法

IMO-8400在饮食诱导的NAFLD/NASH食蟹猴中的功效

本研究的目的是确定以3mg/kg每周一次皮下(SC)施用IMO-8400连续12周后，IMO-8400在饮食诱导的NAFLD/NASH雄性食蟹猴中的功效。

基于肝组织病理学和cfDNA水平，鉴定了十二只NAFLD/NASH雄性食蟹猴。将动物随机分成以下组：

组1:n＝5；通过皮下注射施用媒介物(无菌盐水)，每周一次，连续12周。

组2:n＝7；通过皮下注射施用IMO-8400溶液，每周一次，连续12周。

结果详细呈现如下，并且包括以下观察：

a)脂联素水平：与给药前(基线)水平相比，施用IMO-8400的7只动物中有6只动物的脂联素水平在第12周显著增高。

b)体重：与第1天相比，第84天(治疗结束)时组1(对照组)中的平均动物体重下降了3.27％，并且组2(治疗组)中的平均动物体重下降了10.87％。

c)NAS评分：组2(治疗组)中有7分之4的动物的NAS评分减少了2个点或更多，其具有临床意义。组1(对照组)中仅有5分之1的动物减少了2个点。

剂量施用：在每天给药的剂量施用前对动物称重，以计算实际剂量体积。使用约26号针在动物背部进行皮下注射。组1的所有动物每周一次接受无菌盐水的皮下施用，持续12周。组2的动物每周一次接受IMO-8400溶液的皮下施用，持续12周。

血浆制备：在第1天(给药前)、第42天和第84天早晨，收集过夜禁食动物的全血(约10mL)。将样品收集至含有EDTA-K2(作为抗凝剂)的商用真空管中。将收集的血液样品置于湿冰上，并且在收集的30分钟内在约4℃下以3000g进行离心处理15分钟，以得到血浆。分析前将血浆上清液储存在-60℃下。

通过人HMW脂联素/Acrp30 Quantikine ELISA试剂盒(批号P172678，R&D系统公司(R&D Systems))检测脂联素水平。

分析。

通过如下所述的标准化准则评估NAS评分：Brunt EM,Kleiner DE,Wilson LA,Belt P,Neuschwander-Tetri BA；NASH Clinical Research Network(CRN).[NASH临床研究网(CRN)]Nonalcoholic fatty liver disease(NAFLD)activity score and thehistopathologic diagnosis in NAFLD:distinct clinicopathologic meanings.[非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)活动性评分及NAFLD中的组织病理学诊断：具有明显的临床病理学意义]Hepatology[肝病学]2011；53:810-820；以及Kleiner DE,Brunt EM,Van Natta M,Behling C,Contos MJ,Cummings OW,Ferrell LD,Liu YC,Torbenson MS,Unalp-Arida A,Yeh M,McCullough AJ,Sanyal AJ；Nonalcoholic Steatohepatitis Clinical ResearchNetwork.[非酒精性脂肪性肝炎临床研究网]Design and validation of a histologicalscoring system for nonalcoholic fatty liver disease.[用于非酒精性脂肪性肝病的组织学评分体系的设计与验证]Hepatology[肝病学]2005；41:1313-1321。

下表提供了评分框架：

下表1中显示的结果示出了对照组(组1)和治疗组(组2)的脂联素水平。

表1：

人水平：2-38μg/ml(取决于性别和BMI)

下表2中显示的结果示出了对照组(组1)和治疗组(组2)的NAS评分。

表2：

在表2中，ST＝脂肪变性，BAL＝气球样变，以及INF＝炎症

图1中显示了对照组(组1)和治疗组(组2)在12周测试期的体重减轻的结果。