阅读说明：本技术 一种细鳞鲑遗传性别鉴定引物以及鉴定方法 (Scleroderma lenok genetic sex identification primer and identification method ) 是由 佟广香 张庆渔 张永泉 匡友谊 尹家胜 于 2021-01-20 设计创作，主要内容包括：一种细鳞鲑遗传性别鉴定引物以及鉴定方法,它涉及一种鱼类的遗传性别鉴定引物以及鉴定方法。本发明提供了一种利用分子标记技术快速准确鉴定细鳞鲑的遗传性别的方法。本发明细鳞鲑遗传性别鉴定引物对上游引物序列为5’-GTGCCTGTCTGAGGTGTGAG-3’；引物对下游引物序列为5’-AGCTGTGTCAGGTTGTCGTG-3’。鉴定方法：一、待鉴定个体DNA提取；二、用引物进行PCR扩增；三、凝胶电泳,仅有1条235bp条带的为雌鱼,有207bp条带的为雄鱼。利用本发明方法可以快速、准确鉴定细鳞鲑的遗传性别,节省人力和物力,在亲本培育和养殖过程中做到合适的雌、雄比例,节约养殖成本。(A primer and a method for identifying the genetic sex of brachymystax lenok relate to a primer and a method for identifying the genetic sex of fish. The invention provides a method for rapidly and accurately identifying the genetic sex of brachymystax lenok by using a molecular marker technology. The sequence of the upstream primer of the brachymystax lenok genetic sex identification primer pair is 5'-GTGCCTGTCTGAGGTGTGAG-3'; the primer sequence downstream of the primer pair is 5'-AGCTGTGTCAGGTTGTCGTG-3'. The identification method comprises the following steps: firstly, extracting DNA of an individual to be identified; secondly, PCR amplification is carried out by using a primer; and thirdly, performing gel electrophoresis, wherein only 1 band with 235bp is female fish, and a band with 207bp is male fish. The method can quickly and accurately identify the genetic sex of the brachymystax lenok, saves manpower and material resources, achieves proper female-male ratio in the parent cultivation and breeding process, and saves the breeding cost.)

一种细鳞鲑遗传性别鉴定引物以及鉴定方法

技术领域

本发明涉及一种鱼类的遗传性别鉴定引物以及鉴定方法。

背景技术

细鳞鲑[Brachymystax lenok(Pallas)]，属鲑形目(Salmoniformes)、鲑科(Salmonidae)，细鳞鱼属Brachymystax是我国珍稀、名贵的冷水性鱼类，1998年被列入中国濒危动物红皮书，濒危等级为濒危。细鳞鲑第一次性成熟需要3～4年，性成熟前无法通过外观形态来判断其性别，性成熟后，在生殖季节成鱼体色暗，背鳍前部鳍条变黑，体侧出现隐约红色斑。在不同年龄大小和不同栖息环境中，其体色变化较大，一般老龄鱼较幼龄鱼体色深，很难通过婚姻色鉴定雌、雄。

发明内容

本发明要提供一种利用分子标记技术快速准确鉴定细鳞鲑的遗传性别的方法。

本发明细鳞鲑遗传性别鉴定引物对上游引物序列为5’-GTGCCTGTCTGAGGTGTGAG-3’；引物对下游引物序列为5’-AGCTGTGTCAGGTTGTCGTG-3’。

本发明鉴定细鳞鲑遗传性别的方法：

一、待鉴定个体DNA提取；

二、用引物进行PCR扩增，引物对上游引物序列为5’-GTGCCTGTCTGAGGTGTGAG-3’；引物对下游引物序列为5’-AGCTGTGTCAGGTTGTCGTG-3’；

三、凝胶电泳，仅有1条235bp条带的为雌鱼，有207bp条带的为雄鱼。

利用本发明方法可以快速、准确鉴定细鳞鲑的遗传性别，节省人力和物力，在亲本培育和养殖过程中做到合适的雌、雄比例，节约养殖成本。

附图说明

图1是细鳞鲑雌、雄鱼采用本发明方法鉴定的凝胶电泳图，其中1-3泳道为细鳞鲑雌鱼，4～6泳道为细鳞鲑雄鱼，M泳道为Marker。

具体实施方式

本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。

具体实施方式一：本实施方式细鳞鲑遗传性别鉴定引物对上游引物序列为5’-GTGCCTGTCTGAGGTGTGAG-3’；引物对下游引物序列为5’-AGCTGTGTCAGGTTGTCGTG-3’。

具体实施方式二：本实施方式鉴定细鳞鲑遗传性别的方法：

一、待鉴定个体DNA提取；

二、用引物进行PCR扩增，引物对上游引物序列为5’-GTGCCTGTCTGAGGTGTGAG-3’；引物对下游引物序列为5’-AGCTGTGTCAGGTTGTCGTG-3’；

三、凝胶电泳，仅有1条235bp条带的为雌鱼，有207bp条带的为雄鱼(图1所示)。

本实施方式中细鳞鲑雄鱼除扩增出207bp条带外，部分还扩增出235bp的条带。

本发明方法操作方便，仅通过琼脂糖凝胶电泳比较雌、雄鱼扩增产物大小进行鉴别，无需测序。所需设备简单，在生产方面具有重要的应用价值。

本发明从分子水平探索细鳞鲑的遗传性别，不受年龄的限制，可以用于细鳞鲑早期性别选择，解决了幼鱼无法从形态上鉴别雌、雄的难题。

具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式二的不同点是：步骤二PCR扩增反应体系为20μl，包括2×PCR mix 10μl、浓度为30ng/μl待鉴定个体DNA 2μl、浓度为10μM的所述上下游引物各1μl、剩余用超纯水补足。其它步骤及参数与实施方式二相同。

具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式二或三的不同点是：步骤二PCR反应程序为95℃预变性3min，95℃变性30sec、60℃退火30sec、72℃延伸30sec，33个循环，72℃延伸5min。其它步骤及参数与实施方式二或三相同。

在本实施方式条件下，靶序列变性彻底，且不影响Taq酶的活性，引物延伸完全，能够达到有效的扩增量。

实施例1

已知性别的群体获得：中国水产科学研究院黑龙江水产研究所渤海冷水性鱼实验站产卵时鉴定雌、雄，采集雌、雄鱼样本各50尾，剪取鳍条样本贴在滤纸上阴干。

鉴定细鳞鲑遗传性别的方法：

一、待鉴定个体DNA提取：采用动物组织基因组DNA试剂盒提取DNA，用Qubit3测定DNA浓度，稀释至30ng/μl，备用；

二、用引物进行PCR扩增，引物对上游引物序列为5’-GTGCCTGTCTGAGGTGTGAG-3’；引物对下游引物序列为5’-AGCTGTGTCAGGTTGTCGTG-3’；PCR扩增反应体系为20μl，包括2×PCR mix 10μl、浓度为30ng/μl待鉴定个体DNA 2μl、浓度为10μM的所述上下游引物各1μl、剩余用超纯水补足；PCR反应程序为95℃预变性3min，95℃变性30sec、60℃退火30sec、72℃延伸30sec，33个循环，72℃延伸5min；

三、凝胶电泳：获得PCR产物取6μl用2.0％琼脂糖凝胶电泳分析。

鉴定结果：

50条雌鱼全部仅扩增出1条条带，大小为235bp；50条雄鱼均增出207bp条带，部分雄鱼可扩增出235bp条带；鉴定结果与采样相符。