阅读说明：本技术 谷胱甘肽还原酶测定试剂质控品及制备方法 (Glutathione reductase determination reagent quality control product and preparation method thereof ) 是由 万蒙 邱家明 周惠良 于 2019-09-29 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种谷胱甘肽还原酶测定试剂质控品,其特征在于,包括以下组分的冻干品：磷酸盐缓冲液50～80份,甘氨酸5～10份,黄原胶1～3份,牛血清5～10份,纯品谷胱甘肽还原酶0.1～0.5份,蔗糖2～5份,防腐剂1～2份。质控品为冻干品,能大大提升质控品在使用前的稳定性,易于保存。本发明还公开了上述质控品的制备方法,包括以下步骤：取所述纯品谷胱甘肽还原酶,加入磷酸盐缓冲液,得稀释液；向所述稀释液中加入甘氨酸,保温搅拌,将所得混合溶液等分为第一混合液和第二混合液；向所述第一混合液中加入牛血清和蔗糖,得第一冻干液；向所述第二混合液中加入牛血清、黄原胶和蔗糖,得第二冻干液；将所述第一冻干液和所述第二冻干液混合,冷冻干燥,得质控品。(The invention discloses a glutathione reductase determination reagent quality control product which is characterized by comprising a freeze-dried product of the following components: 50-80 parts of phosphate buffer solution, 5-10 parts of glycine, 1-3 parts of xanthan gum, 5-10 parts of bovine serum, 0.1-0.5 part of pure glutathione reductase, 2-5 parts of sucrose and 1-2 parts of preservative. The quality control product is freeze-dried, can greatly improve the stability of the quality control product before use, and is easy to store. The invention also discloses a preparation method of the quality control product, which comprises the following steps: adding phosphate buffer solution into the pure glutathione reductase to obtain diluent; adding glycine into the diluent, stirring at a constant temperature, and equally dividing the obtained mixed solution into a first mixed solution and a second mixed solution; adding bovine serum and sucrose into the first mixed solution to obtain a first freeze-dried solution; adding bovine serum, xanthan gum and sucrose into the second mixed solution to obtain a second freeze-dried solution; and mixing the first freeze-drying liquid and the second freeze-drying liquid, and freeze-drying to obtain a quality control product.)

谷胱甘肽还原酶测定试剂质控品及制备方法

技术领域

本发明涉及生化检测技术领域，特别是涉及一种谷胱甘肽还原酶测定试剂质控品及制备方法。

背景技术

血液中含有谷胱甘肽还原酶(GR)，需通过谷胱甘肽还原酶测定试剂来测定其含量。

在生产谷胱甘肽还原酶测定试剂的过程中，需采用校准品对样品进行校准，利用校准品能生成校准系统，然后再采用质控品检测校准系统是否合格，因此质控品要求具有较高的精度和稳定性。目前，质控品多与校准品为相同组分，组分为液态的纯品谷胱甘肽还原酶、缓冲液和稳定剂。

由于质控品的精度和稳定性要求较高，而现有的液态质控品不易保存，且开封后会快速变质，严重影响检测结果。

发明内容

本发明的一个目的在于提出一种稳定易保存的谷胱甘肽还原酶测定试剂质控品。

一种谷胱甘肽还原酶测定试剂质控品，包括以下组分的冻干品：

磷酸盐缓冲液50～80份，

甘氨酸5～10份，

黄原胶1～3份，

牛血清5～10份，

纯品谷胱甘肽还原酶0.1～0.5份，

蔗糖2～5份，

防腐剂1～2份。

本发明的有益效果是：质控品为冻干品，能大大提升质控品在使用前的稳定性，易于保存；磷酸盐缓冲液能便于质控品的制备成型，防腐剂延长质控品的质量，蔗糖能防止纯品谷胱甘肽还原酶在制备过程中失活，甘氨酸和黄原胶能保持质控品的整体活性。

另外，根据本发明提供的谷胱甘肽还原酶测定试剂质控品，还可以具有如下附加的技术特征：

进一步地，所述磷酸盐缓冲液包括磷酸氢二钠和磷酸二氢钠，质量比为2:3～6。

进一步地，所述防腐剂包括叠氮钠和谷氨酸钠，质量比为3:1～2。

本发明的另一个目的在于提出一种上述谷胱甘肽还原酶测定试剂质控品的制备方法，包括以下步骤：

(1)取所述纯品谷胱甘肽还原酶，加入磷酸盐缓冲液稀释，得稀释液；

(2)向所述稀释液中加入甘氨酸，保温搅拌，将所得混合溶液等分为第一混合液和第二混合液；

(3)向所述第一混合液中加入牛血清和蔗糖，混合均匀，低温静置1小时，得第一冻干液；

(4)向所述第二混合液中加入牛血清、黄原胶和蔗糖，混合均匀，保温静置1小时，得第二冻干液；

(5)将所述第一冻干液和所述第二冻干液混合，得冻干材料，对所述冻干材料执行冷冻干燥，得所述谷胱甘肽还原酶测定试剂质控品。

进一步地，所述磷酸缓冲液的浓度为50～400mmol/L，所述甘氨酸的浓度为50～100mmol/L，所述黄原胶的浓度为100～200mmol/L，所述牛血清的浓度为30～95％。

进一步地，所述稀释液中谷胱甘肽还原酶的浓度为10～100U/L。

进一步地，所述向所述稀释液中加入甘氨酸，保温搅拌的步骤中，所述保温搅拌为保持溶液为40℃，恒温搅拌30分钟。

进一步地，所述低温静置的温度为4℃，所述保温静置的温度为20℃。

进一步地，所述冷冻干燥步骤包括：

预冷冻，将所述冻干材料置于-30℃～-70℃的环境下保持12～24小时；

真空冷冻干燥，将经所述预冷冻后的所述冻干材料置于-20℃～-60℃的负压环境下保持24～48小时。

进一步地，所述真空冷冻干燥的步骤为：

将所述冻干材料置于大气压为5Pa的环境中，环境温度为-40～-60℃，保持24～36小时；

将所述冻干材料置于大气压为15Pa的环境中，环境温度为-20～-30℃，保持8～12小时。

本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

具体实施方式

为使本发明的目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容更加透彻全面。

实施例1

一种谷胱甘肽还原酶测定试剂质控品，包括以下组分的冻干品：磷酸盐缓冲液50份，甘氨酸5份，黄原胶1份，牛血清5份，纯品谷胱甘肽还原酶0.1份，蔗糖2份，防腐剂1份。

本发明的优势在于，磷酸盐缓冲液能便于质控品的制备成型，防腐剂延长质控品的质量，蔗糖能防止纯品谷胱甘肽还原酶在制备过程中失活，甘氨酸和黄原胶能保持质控品的整体活性。

具体的，所述磷酸盐缓冲液包括磷酸氢二钠和磷酸二氢钠，质量比为2:3，所述防腐剂包括叠氮钠和谷氨酸钠，质量比为3:1。

需要说明的是，磷酸氢二钠和磷酸二氢钠的混合溶液较单一的磷酸钠盐的效果更佳，叠氮钠和谷氨酸钠的混合物也较单一的叠氮钠或谷氨酸钠的效果更佳。

上述谷胱甘肽还原酶测定试剂质控品的制备方法，包括以下步骤：

(1)取所述纯品谷胱甘肽还原酶，加入磷酸盐缓冲液稀释，得稀释液；

(2)向所述稀释液中加入甘氨酸，保持溶液为40℃，恒温搅拌30分钟，将所得混合溶液等分为第一混合液和第二混合液；

(3)向所述第一混合液中加入牛血清和蔗糖，混合均匀，在4℃环境下静置1小时，得第一冻干液；

(4)向所述第二混合液中加入牛血清、黄原胶和蔗糖，混合均匀，在20℃环境下静置1小时，得第二冻干液；

(5)将所述第一冻干液和所述第二冻干液混合，得冻干材料，对所述冻干材料执行冷冻干燥，得所述谷胱甘肽还原酶测定试剂质控品。

需要说明的是，将混合溶液分成两组分别进行处理，再混合进行冷冻干燥，能进一步提升质控品的稳定性。

具体的，所述磷酸缓冲液的浓度为50mmol/L，所述甘氨酸的浓度为50mmol/L，所述黄原胶的浓度为100mmol/L，所述牛血清的浓度为30％，所述稀释液中谷胱甘肽还原酶的浓度为70U/L。

另外，所述冷冻干燥步骤包括：

i.预冷冻，将所述冻干材料置于-30℃℃的环境下保持12小时；

ii.真空冷冻干燥，将所述冻干材料置于大气压为5Pa的环境中，环境温度为-40℃，保持24小时,再将所述冻干材料置于大气压为15Pa的环境中，环境温度为-20℃，保持8小时。

取所得质控品，分为低值组、中值组和高值组加水复溶，其初始GR浓度分别为30U/L、60U/L和120U/L，连续检测7天GR浓度，计算其变异系数CV，结果见表1。

表1

实施例2

一种谷胱甘肽还原酶测定试剂质控品，包括以下组分的冻干品：磷酸盐缓冲液80份，甘氨酸10份，黄原胶3份，牛血清10份，纯品谷胱甘肽还原酶0.5份，蔗糖5份，防腐剂2份。

具体的，所述磷酸盐缓冲液包括磷酸氢二钠和磷酸二氢钠，质量比为2:6，所述防腐剂包括叠氮钠和谷氨酸钠，质量比为3:2。

上述谷胱甘肽还原酶测定试剂质控品的制备方法，包括以下步骤：

(1)取所述纯品谷胱甘肽还原酶，加入磷酸盐缓冲液稀释，得稀释液；

(2)向所述稀释液中加入甘氨酸，保持溶液为40℃，恒温搅拌30分钟，将所得混合溶液等分为第一混合液和第二混合液；

(3)向所述第一混合液中加入牛血清和蔗糖，混合均匀，在4℃环境下静置1小时，得第一冻干液；

(4)向所述第二混合液中加入牛血清、黄原胶和蔗糖，混合均匀，在20℃环境下静置1小时，得第二冻干液；

(5)将所述第一冻干液和所述第二冻干液混合，得冻干材料，对所述冻干材料执行冷冻干燥，得所述谷胱甘肽还原酶测定试剂质控品。

具体的，所述磷酸缓冲液的浓度为400mmol/L，所述甘氨酸的浓度为100mmol/L，所述黄原胶的浓度为200mmol/L，所述牛血清的浓度为95％，所述稀释液中谷胱甘肽还原酶的浓度为70U/L。

另外，所述冷冻干燥步骤包括：

i.预冷冻，将所述冻干材料置于-70℃的环境下保持24小时；

ii.真空冷冻干燥，将所述冻干材料置于大气压为5Pa的环境中，环境温度为-60℃，保持36小时，再将所述冻干材料置于大气压为15Pa的环境中，环境温度为-30℃，保持12小时。

取所得质控品，分为低值组、中值组和高值组加水复溶，其初始GR浓度分别为30U/L、60U/L和120U/L，连续检测7天GR浓度，计算其变异系数CV，结果见表2。

表2

分组	低值组	中值组	高值组
				第1天(U/L)	32.3	62.5	118.8
第2天(U/L)	32.2	63.2	117.3
				第3天(U/L)	31.4	63.8	117.8
第4天(U/L)	32.9	62.9	116.3
				第5天(U/L)	33.7	64.2	116.9
第6天(U/L)	34.0	65.5	115.5
				第7天(U/L)	33.8	66.9	115.4
CV(％)	2.99	2.44	1.06

实施例3

一种谷胱甘肽还原酶测定试剂质控品，包括以下组分的冻干品：磷酸盐缓冲液55份，甘氨酸5份，黄原胶2.5份，牛血清9份，纯品谷胱甘肽还原酶0.5份，蔗糖5份，防腐剂1份。

本发明的优势在于，磷酸盐缓冲液能便于质控品的制备成型，防腐剂延长质控品的质量，蔗糖能防止纯品谷胱甘肽还原酶在制备过程中失活，甘氨酸和黄原胶能保持质控品的整体活性。

具体的，所述磷酸盐缓冲液包括磷酸氢二钠和磷酸二氢钠，质量比为2:5，所述防腐剂包括叠氮钠和谷氨酸钠，质量比为3:1。

上述谷胱甘肽还原酶测定试剂质控品的制备方法，包括以下步骤：

(1)取所述纯品谷胱甘肽还原酶，加入磷酸盐缓冲液稀释，得稀释液；

(2)向所述稀释液中加入甘氨酸，保持溶液为40℃，恒温搅拌30分钟，将所得混合溶液等分为第一混合液和第二混合液；

(3)向所述第一混合液中加入牛血清和蔗糖，混合均匀，在4℃环境下静置1小时，得第一冻干液；

(4)向所述第二混合液中加入牛血清、黄原胶和蔗糖，混合均匀，在20℃环境下静置1小时，得第二冻干液；

(5)将所述第一冻干液和所述第二冻干液混合，得冻干材料，对所述冻干材料执行冷冻干燥，得所述谷胱甘肽还原酶测定试剂质控品。

具体的，所述磷酸缓冲液的浓度为300mmol/L，所述甘氨酸的浓度为90mmol/L，所述黄原胶的浓度为110mmol/L，所述牛血清的浓度为35％，所述稀释液中谷胱甘肽还原酶的浓度为70U/L。

另外，所述冷冻干燥步骤包括：

预冷冻，将所述冻干材料置于-60℃的环境下保持21小时；

真空冷冻干燥，将所述冻干材料置于大气压为5Pa的环境中，环境温度为-60℃，保持28小时，再将所述冻干材料置于大气压为15Pa的环境中，环境温度为-25℃，保持8小时。

取所得质控品，分为低值组、中值组和高值组加水复溶，其初始GR浓度分别为30U/L、60U/L和120U/L，连续检测7天GR浓度，计算其变异系数CV，结果见表3。

表3

对照例1

本对照例与实施例3基本一致，不同之处在于：

所述质控品未采用冷冻干燥，所述质控品为液态。

对照例2

本对照例与实施例3基本一致，不同之处在于：

谷胱甘肽还原酶测定试剂质控品，包括以下组分的冻干品：磷酸盐缓冲液50份，牛血清5份，纯品谷胱甘肽还原酶0.1份，蔗糖2份，防腐剂1份。

对照例3

本对照例与实施例3基本一致，不同之处在于：

步骤(2)中未将混合溶液分组，保持混合溶液温度为20℃直接加入牛血清、黄原胶和蔗糖。

对照例4

本对照例与实施例3基本一致，不同之处在于：

真空冷冻干燥为将所述冻干材料置于大气压为10Pa的环境中，环境温度为-50℃，保持36小时。

取上述对照例所得质控品，分为低值组、中值组和高值组加水复溶，其初始GR浓度分别为30U/L、60U/L和120U/L，连续检测7天GR浓度，计算其变异系数CV，结果见表4。

表4

由于对质控品的精度要求较高，因此，针对质控品需对不同GR浓度的进行测定，当所测得结果均满足要求时，才证明该谷胱甘肽还原酶测定试剂质控品为合格产品。本发明分别采用低值组、中组组和高值组进行检测，并以7天内GR浓度变化的变异系数作为参考，评价质控品的稳定性。CV值越小说明质控品越稳定，越易于保存，当三组均满足CV<3％时，判断其为合格产品。

从表4可以看出，实施例1～3较对照例1～4均达到了更好的效果，即实施例的CV值普遍低于对照例的，说明本发明的技术方案能达到更优的效果；

其中，对照例1的CV值明显高于实施例1～3和其余对照例，说明液体质控品开封后会快速变质，不利于检测；

对照例2虽然效果较对照例1好，但其CV值均大于3％，仍为不合格产品，说明甘氨酸和黄原胶能促进质控品的质量稳定；

对照例3和对照例4在低值组和高值组均能达到CV<3％，而中值组的CV值还是大于3％，仍不能作为合格产品，说明将混合溶液分组和分别真空冷冻干燥均会对质控品的稳定性产生一定程度的促进作用。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。