阅读说明：本技术 一种雷公藤内酯酮减轻cfa诱导的小鼠痛敏反应的方法 (Method for reducing CFA (circulating fluid array) -induced nociceptive response of mice by triptonide ) 是由 董玉林 姜保春 于 2019-11-15 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种雷公藤内酯酮减轻CFA诱导的小鼠痛敏反应的方法,步骤一：小鼠单侧后足注射CFA；步骤二：注射CFA后静脉注射TPN；步骤三：检测CFA注射后背根神经节DRG及内神经元AKT的表达变化；步骤四：检测CFA注射后DRG神经元肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素6mRNA的表达变化；步骤五：使用AKT抑制剂预处理,检测CFA引起的机械性痛觉过敏和热痛觉过敏的变化,以及TNF-α、IL-1β和IL-6等促炎性细胞因子mRNA的表达变化,通过本发明方法,可以得到这些结果为TPN的抗伤害和抗炎作用提供了直接证据,提示TPN在炎症性疼痛治疗中的新应用。(The invention discloses a method for reducing mouse nociceptive response induced by CFA (circulating fluid dynamics) by triptonide, which comprises the following steps: mice were injected with CFA on one hind paw; step two: TPN was injected intravenously after CFA injection; step three: detecting expression changes of DRG and AKT of internal neurons of dorsal root ganglia after CFA injection; step four: detecting the expression changes of DRG neuron tumor necrosis factor alpha, interleukin 1 beta and interleukin 6mRNA after CFA injection; step five: the method of the invention can obtain the results which provide direct evidence for the anti-injury and anti-inflammatory effects of TPN and suggest a new application of TPN in the treatment of inflammatory pain.)

一种雷公藤内酯酮减轻CFA诱导的小鼠痛敏反应的方法

技术领域

本发明涉及痛敏反应技术领域，具体为一种雷公藤内酯酮减轻CFA诱导的小鼠痛敏反应的方法。

背景技术

雷公藤内酯酮（TPN）是雷公藤的主要成分，近年来的研究表明PI3K/AKT/mTOR通路在慢性疼痛的发病机制中起重要作用。完全弗氏佐剂(CFA)是一种常用的致炎剂，是目前动物实验中最常用的佐剂。

由于痛敏反应能够为抗伤害和抗炎作用提供了直接证据，且能够提示TPN在炎症性疼痛治疗中作用，而目前并未有关于TPN在炎症性疼痛的相关实验方法，因此，亟待一种改进的技术来解决现有技术中所存在的这一问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种雷公藤内酯酮减轻CFA诱导的小鼠痛敏反应的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种雷公藤内酯酮减轻CFA诱导的小鼠痛敏反应的方法，包括以下步骤：

步骤一：小鼠单侧后足注射CFA，随后引起足肿胀和持续性疼痛过敏；

步骤二：注射CFA后静脉注射TPN，检测足爪肿胀度、机械性痛觉过敏和热痛觉过敏等的变化；

步骤三：检测CFA注射后背根神经节DRG及内神经元AKT的表达变化，以及TPN全身治疗后AKT的改变；

步骤四：检测CFA注射后DRG神经元肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素6mRNA的表达变化，以及TPN全身治疗后这些因子的改变；

步骤五：使用AKT抑制剂预处理，检测CFA引起的机械性痛觉过敏和热痛觉过敏的变化，以及TNF-α、IL-1β和IL-6等促炎性细胞因子mRNA的表达变化。

优选的，所述步骤三中采用western blot和免疫荧光检测CFA注射后背根神经节DRG及内神经元AKT的表达变化。

优选的，所述步骤四中采用western blot和免疫荧光检测CFA注射后DRG神经元肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素6mRNA的表达变化。

优选的，所述步骤五中采用western blot和免疫荧光检测CFA引起的机械性痛觉过敏和热痛觉过敏的变化。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

通过本发明方法，可以得到这些结果为TPN的抗伤害和抗炎作用提供了直接证据，提示TPN在炎症性疼痛治疗中的新应用。

附图说明

图1为注射CFA后静脉注射TPN，CFA引起的足爪肿胀（A）、机械性痛觉过敏（B）和热痛觉过敏（C）曲线示意图。

图2为western blot和免疫荧光检测CFA注射后背根神经节（DRG）内神经元AKT的表达变化以及TPN全身治疗后AKT变化示意图。

图3为TPN抑制了CFA诱导的DRG神经元TNF-α（A）、IL-1β（B）和IL-6（C）mRNA的表达曲线示意图。

图4为AKT抑制剂预处理，可减轻CFA引起的机械性痛觉过敏（A）和热痛觉过敏（B），降低TNF-α（C）、IL-1β（D）和IL-6（E）的表达示意图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明提供一种技术方案：一种雷公藤内酯酮减轻CFA诱导的小鼠痛敏反应的方法，包括以下步骤：

步骤一：小鼠单侧后足注射完全弗氏佐剂（CFA）可引起足肿胀和持续性疼痛过敏；

步骤二：注射CFA后静脉注射TPN，检测足爪肿胀度、机械性痛觉过敏和热痛觉过敏等的变化；

步骤三：采用western blot和免疫荧光检测CFA注射后背根神经节DRG及内神经元AKT的表达变化，以及TPN全身治疗后AKT的改变；

步骤四：检测CFA注射后DRG神经元肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）和白细胞介素6（IL-6）mRNA的表达变化，以及TPN全身治疗后这些因子的改变；

步骤五：使用AKT抑制剂预处理，检测CFA引起的机械性痛觉过敏和热痛觉过敏的变化，以及TNF-α、IL-1β和IL-6等促炎性细胞因子mRNA的表达变化。

实施例的：

如图1所示，注射CFA后静脉注射TPN，可减轻CFA引起的足爪肿胀、机械性痛觉过敏和热痛觉过敏。

如图2所示，western blot和免疫荧光结果表明，CFA诱导背根神经节（DRG）内神经元AKT活化，TPN对其有抑制作用。

如图3所示，N抑制了CFA诱导的DRG神经元TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA的表达；

其中，如图3中A：PCR结果显示TPN抑制了CFA诱导的DRG神经元TNF-αmRNA的表达；

其中，如图3中B：PCR结果显示TPN抑制了CFA诱导的DRG神经元IL-1βmRNA的表达；

其中，如图3中C：PCR结果显示TPN抑制了CFA诱导的DRG神经元IL-6 mRNA的表达。

如图4所示，AKT抑制剂预处理，可减轻CFA引起的机械性痛觉过敏和热痛觉过敏，降低TNF-α、IL-1β和IL-6等的表达。

其中，如图4中A：AKT抑制剂预处理，可减轻CFA引起的机械性痛觉过敏；

其中，如图4中B：AKT抑制剂预处理，可减轻CFA引起的热痛觉过敏；

其中，如图4中C：PCR结果显示，AKT抑制剂预处理，可降低CFA诱导的DRG神经元TNF-αmRNA的表达；

其中，如图4中D：PCR结果显示，AKT抑制剂预处理，可降低CFA诱导的DRG神经元IL-1βmRNA的表达；

其中，如图4中E：PCR结果显示，AKT抑制剂预处理，可降低CFA诱导的DRG神经元IL-6mRNA的表达。

通过这些数据表明，TPN可能通过抑制AKT介导的DRG神经元内促炎性细胞因子的产生而减轻慢性炎症性疼痛，这些结果为TPN的抗伤害和抗炎作用提供了直接证据，提示TPN在炎症性疼痛治疗中的新应用。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。