阅读说明：本技术 雷公藤内酯酮的应用 (Application of triptonide ) 是由 周泉生 曹志飞 于 2018-06-15 设计创作，主要内容包括：本发明涉及医药技术领域,公开了雷公藤内酯酮的应用。本发明发现中草药单体雷公藤内酯酮能显著地降低高脂饮食小鼠胸主动脉粥样斑块的形成、三尖瓣脂肪的堆积和胶原纤维的形成,并显著地降低高脂饮食小鼠的体重和脂肪堆积。此外,雷公藤内酯酮还能明显地降低高脂饮食肥胖小鼠血液中的低密度脂蛋白和胆固醇的含量。这表明雷公藤内酯酮对动脉粥样硬化具有治疗作用,因而可以应用在相关药物的制备中,又因动脉粥样硬化是冠心病、脑梗死、外周血管病的主要原因,其也可应用在冠心病、脑梗死、外周血管病的相关药物制备中。(The invention relates to the technical field of medicines, and discloses application of triptonide. The invention finds that Chinese herbal medicine monomer triptolide ketone can remarkably reduce the formation of thoracic aortic atherosclerotic plaques, the accumulation of tricuspid valve fat and the formation of collagen fibers of high-fat diet mice, and remarkably reduce the weight and fat accumulation of the high-fat diet mice. In addition, triptolide can also significantly reduce the content of low-density lipoprotein and cholesterol in the blood of high-fat diet obese mice. The triptolide ketone has a treatment effect on atherosclerosis, so that the triptolide ketone can be applied to preparation of related medicines, and can also be applied to preparation of related medicines for coronary heart disease, cerebral infarction and peripheral vascular disease because the atherosclerosis is the main reason of the coronary heart disease, the cerebral infarction and the peripheral vascular disease.)

雷公藤内酯酮的应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，特别涉及雷公藤内酯酮的应用。

背景技术

动脉粥样硬化是冠心病、脑梗死、外周血管病的主要原因。动脉粥样硬化(atherosclerosis)是严重危害人类健康的常见病。近年来，本病的发病率在我国有明显增加的趋势。据尸检结果，在40～49岁的人群中，冠状动脉和主动脉粥样硬化病变的检出率分别为58.36％和88.31％，并随着年龄的增长而逐渐增加。动脉粥样硬化一般是指一组动脉的硬化性疾病，包括：动脉粥样硬化、动脉中膜钙化和细动脉硬化。动脉粥样硬化的危险因素高脂血症众所周知，高脂血症(hyperlipemia)是动脉粥样硬化的重要危险因素。高脂血症实际上也可认为是高脂蛋白血症，一般以成人空腹12～14小时血甘油三酯超过160mg/dl(1.81mmol/L)，胆固醇超过260mg/dl(6.76mmol/L) 为高脂血症。大量流行病学调查证明，血浆胆固醇(CHO)、低密度脂蛋白 (LDL)和极低密度脂蛋白(VLDL)水平持续升高与动脉粥样硬化的发病率呈正相关。

近年来国内外学者对动脉粥样硬化的发病机制有更深入的了解，目前动脉粥样硬化的发病机理尚未完全明确，主要有脂质浸润学说、平滑肌细胞克隆学说、血栓形成学说、内皮损伤反应学说及炎性反应学说。所以对本病的预防和治疗有药物治疗和手术治疗。药物治疗只要针对调整血脂药如他丁类、抗血小板药如阿司匹林、及溶栓和抗凝药；针对缺血症状的相应治疗如心绞痛时应用血管扩张剂等；手术治疗包括对狭窄或闭塞的冠状动脉、肾动脉和四肢动脉施行再通或重建或旁路移植等外科手术，以恢复动脉的供血。已有文献报道黄氏生脉饮在预防治疗动脉粥样硬化中效果明显。目前，动脉粥样硬化的流行病学已经取得了很大的进展，但在国内仍处于薄弱环节。因此目前尚缺乏理想的治疗动脉粥样硬化的药物。因此，迫切需要开发新的抗动脉粥样硬化的作用抵抗由动脉粥样硬化引起的心脑血管疾病。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供雷公藤内酯酮(Triptonide，TN)或其药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗动脉粥样硬化药物中应用。

雷公藤内酯酮(Triptonide，TN)是从中草药卫矛科植物雷公藤的全株或去皮木质部份中提取出的一种单体物质，纯度可达98％以上，结构如下：

已有研究报道雷公藤内酯酮具有雄性抗生育、抗白血病及抗恶性肿瘤的作用，但在抗动脉粥样硬化方面在国内外至今尚未报道。

本发明研究了雷公藤内酯酮在高脂高胆固醇饮食小鼠中的作用，证实雷公藤内酯酮治疗后能显著地降低高脂高胆固醇饮食小鼠的体重、脂肪堆积、胸主动脉粥样斑块的形成以及三尖瓣脂肪的堆积和胶原纤维的形成，降低高脂饮食肥胖小鼠血液中的LDL和CHO1含量。以上实验结果表明雷公藤内酯酮对动脉粥样硬化具有治疗作用。由于动脉粥样硬化是冠心病、脑梗死、外周血管病的主要原因，故雷公藤内酯酮或其药学上可接受的盐可预防和/或治疗冠心病、脑梗死以及外周血管病，可应用在这些疾病的药物制备中。

本发明所述雷公藤内酯酮既可以是人工提取物，如通过雷公藤的全株或去皮木质部份提取；也可以是人工化学合成物质，如按照现有化学合成工艺合成。

本发明提供了雷公藤内酯酮或其药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗动脉粥样硬化药物、治疗冠心病、脑梗死或外周血管病药物中应用，这些药物可以是医药领域中的任何适合剂型，如胶囊、微囊、片剂、颗粒剂、丸剂、分散粉末、注射剂、脂质体或口服液。

根据相关应用，本发明还提供了一种预防和/或治疗动脉粥样硬化、冠心病、脑梗死或外周血管病的药物，包括有效量的雷公藤内酯酮或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的药物辅料；或由有效量的雷公藤内酯酮或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的药物辅料组成。

作为优选，所述药物辅料根据所要制备的剂型可从本领域常规药用辅料中选择，如选自溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、渗透促进剂、 pH值调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂、反絮凝剂、助滤剂和释放阻滞剂中的一种或两种以上。

作为优选，所述雷公藤内酯酮或其药学上可接受的盐占药物总重的 0.05wt％～90wt％；进一步地，所述雷公藤内酯酮或其药学上可接受的盐占药物总重的15wt％～60wt％。

本发明所述药物可以通过以下方式中的适合方式给药：口服、直肠给药、鼻腔给药、局部给药、口腔给药、舌下给药、非肠道给药如皮下、静脉、肌肉、腹膜内、鞘内、心室内、胸骨内或颅内注射或输入，或借助一种外植的储器用药。

本发明所述药物的使用剂量和使用方法取决于诸多因素，包括患者的年龄、体重、性别、自然健康状况、营养状况、化合物的活性强度、服用时间、代谢速率、病程严重程度以及诊治医师的主观判断。本领域的技术人员根据上述因素可以容易地决定使用剂量和使用方法。

由以上技术方案可知，本发明发现中草药单体雷公藤内酯酮能显著地降低高脂饮食小鼠胸主动脉粥样斑块的形成、三尖瓣脂肪的堆积和胶原纤维的形成，并显著地降低高脂饮食小鼠的体重和脂肪堆积。此外，雷公藤内酯酮还能明显地降低高脂饮食肥胖小鼠血液中的低密度脂蛋白和胆固醇的含量。这表明雷公藤内酯酮对动脉粥样硬化具有治疗作用，因而可以应用在相关药物的制备中，又因动脉粥样硬化是冠心病、脑梗死、外周血管病的主要原因，其也可应用在冠心病、脑梗死、外周血管病的相关药物制备中。

附图说明

图1所示为雷公藤内酯酮对高脂高胆固醇饮食小鼠胸主动脉粥样硬化斑块形成的影响(图1-A)及统计结果(图1-B)；其中，高脂饲料组(HFD-TN)、正常饲料组(ND)和雷公藤内酯酮治疗组(HFD+TN)；

图2所示为雷公藤内酯酮对高脂高胆固醇饮食小鼠三尖瓣脂肪堆积的影响的油红O染色结果(200×)；其中，高脂饲料组(HFD-TN)、正常饲料组(ND)和雷公藤内酯酮治疗组(HFD+TN)；

图3所示为雷公藤内酯酮对高脂高胆固醇饮食小鼠小鼠三尖瓣织胶原沉积的影响的Masson染色结果(200×)；其中，高脂饲料组(HFD-TN)、正常饲料组(ND)和雷公藤内酯酮治疗组。

具体实施方式

本发明公开了雷公藤内酯酮的应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明所述应用已经通过实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

在本发明具体实施例中，涉及到对比试验，各试验组除了应有的区别外，其余试验环境和原材料等均保持一致。

以下就本发明所提供的雷公藤内酯酮做进一步说明。

实施例1：雷公藤内酯酮给药对小鼠体重及血液生化指标的影响

(一)实验材料

(1)实验动物：

品系：C57-ApoE敲除小鼠，雄鼠；

来源：苏州大学医学院实验动物中心；

体重：18-25g；

每组动物数：10只。

(2)小鼠饲料配方：麦芽糊精(12％)，蔗糖(18％)，胆固醇(2％)，进口猪油(21％)，酪蛋白(21％)，全脂奶粉(5％)，苜蓿草粉(3％)，玉米淀粉(8.5％)，L-胱氨酸(0.5％)，植物油(3％)，预混料(6％)。

(3)受试药物：雷公藤内酯酮用生理盐水稀释成试验所需浓度。

(二)实验方法

C57-ApoE敲除小鼠30只，体重18-25g。随机分为三组，每组10只：高脂饲料组(HFD-TN)、高脂饲料+雷公藤内酯酮治疗组(HFD+TN)和普通饲料喂养组(ND)。HFD-TN组和HFD+TN组给予高脂饲料饮食，ND组给予正常饲料饮食。C57-ApoE敲除小鼠经喂养饲料，同时给予雷公藤内酯酮进行预防给药，HFD+TN组灌胃给药(5mg/kg/d)雷公藤内酯酮，HFD-TN组和ND 组灌胃给予生理盐水，持续给予12周，每周称体重两次并记录。实验结束后， 4％水合氯醛麻醉小鼠，下腔静脉采集小鼠血液，离心后得到血浆，采用全自动生化分析仪测定小鼠血液相关指标的变化。采用SPSS11.5统计软件进行统计学分析。组间比较采用独立样本t检验。

(三)实验结果

载脂蛋白E(apolipoprotein E，ApoE)是一种富含精氨酸的碱性多态性蛋白，参与脂蛋白的转化与代谢过程，其基因可以调节许多生物学功能。载脂蛋白E主要存在于CM、VLDL、LDL和部分HDL中，正常人血浆其浓度与血浆甘油三酯含量呈正相关，与动脉粥样硬化发生发展密切相关。

C57-ApoE敲除小鼠经喂养饲料，同时给予雷公藤内酯酮进行预防，持续 12周。如表1所示，不给药的高脂饲料组小鼠体重增长很快，而雷公藤内酯酮预防后能够有效地抑制小鼠体重的生长，并且一个月后有显著性差异 (P<0.01)，表明雷公藤内酯酮治疗后能显著降低高脂高胆固醇饲料小鼠的体重。如表2所示，高脂饲料组(HFD-TN)小鼠的生殖器脂肪(G-WAT)和皮下脂肪(I-WAT)的重量显著高于正常饲料组(ND)小鼠(均P<0.01)，而雷公藤内酯酮治疗后对高脂饲料小鼠生殖器脂肪(G-WAT)和皮下脂肪 (I-WAT)的重量显著低于高脂饲料组小鼠(均P<0.01)。

表1雷公藤内酯酮对高脂高胆固醇模型小鼠体重的影响

与对照组相比，^##P<0.01；与高脂饲料对照组相比，**P<0.01

表2雷公藤内酯酮对高脂高胆固醇饮食小鼠脂肪重量的影响

与对照组相比，^##P<0.01，^#P<0.05；与高脂饲料对照组相比，**P<0.01，,*P<0.05

此外，采用全自动血液生化分析仪测定了雷公藤内酯酮对肥胖模型小鼠血液指标的影响，结果如表3所示。高脂高胆固醇饲料使得小鼠血液低密度脂蛋白胆固醇(LDL)和胆固醇(CHO1)均明显升高(P<0.01)，而雷公藤内酯酮灌胃治疗高脂饲料小鼠后，其LDL和CHO1均显著降低(P<0.01)。

表3雷公藤内酯酮对高脂高胆固醇饮食小鼠血液生化指标的影响

与对照组相比，^##P<0.01；与高脂饲料对照组相比，**P<0.01

实施例2：雷公藤内酯酮抑制动脉粥样硬化模型小鼠胸主动脉粥样斑块的形成

(一)实验材料

小鼠胸主动脉来自实施例1；苏丹IV染色液购自南京建成生物有限公司。

(二)实验方法

收样检测前，小鼠饥饿过夜，小鼠用4％水合氯醛麻醉，解剖，下腔静脉采血，心脏灌流，在手术显微镜下取出完整的胸主动脉于已加好4％多聚甲醛的1.5mL离心管中，固定过夜，用苏丹IV染色液染色，在手术显微镜辅助下剥离胸主动脉血管外的被染成红色的脂肪组织。然后展开血管，暴露血管内腔，将其平展固定于黑石蜡中，体式显微镜拍照，整个操作必须使血管保持完整性。可以看到胸主动脉内腔有被苏丹IV染成的红色斑块即为动脉粥样硬化斑块，通过形成面积的大小计算斑块形成的能力。

(三)实验结果

为了验证雷公藤内酯酮对高脂高胆固醇模型小鼠动脉粥样硬化的抑制作用，对小鼠胸主动脉粥样硬化进行了苏丹IV染色。结果如图1A-1B所示，高脂饲料使得小鼠粥样硬化斑块的形成明显增多，而雷公藤内酯酮灌胃治疗高脂高胆固醇饲料小鼠后，其粥样斑块显著降低。以上结果表明雷公藤内酯酮治疗后能显著抑制高脂高胆固醇模型小鼠动脉粥样硬化斑块的形成。

实施例3：油红染色实验

(一)实验材料

小鼠三尖瓣来自实施例1；油红染色试剂盒购自南京建成生物有限公司。

(二)实验方法

解剖小鼠时，取出已灌流过的心脏，用4％多聚甲醛固定过夜，剪心脏根部带有三尖瓣进行OCT包埋剂包埋，-80℃冰箱保存备用。染色前，取出保存在-80℃冰箱的组织，放入冰冻切片机中切片，切片机室内温度保持在-20℃。固定好OCT包埋的组织，进行切片。

切片厚度为12um，贴片与粘附性载玻片，室温中放置一会；取出冰冻切片，室温回温，蒸馏水洗掉包埋剂；60％异丙醇浸洗2min,提前润洗，便于油红o染色；油红o工作液染色2-5min，60％异丙醇调色，需要在显微镜的辅助下完成，调出合适的颜色；调色结束后，立即水洗；苏木素复染1min，流水反蓝，显微镜下观察；水性封片剂封片；尽快用正置显微镜拍照，统计油红o染色结果。

(三)实验结果

为了验证雷公藤内酯酮对高脂高胆固醇模型小鼠脂肪堆积的抑制作用，对三尖瓣进行了油红染色。结果如图2所示，高脂饲料使得小鼠三尖瓣脂肪滴堆积明显增多(附图中红色标记区域，黑白图中箭头所指深色区域)，而雷公藤内酯酮灌胃治疗高脂高胆固醇饲料小鼠后，其三尖瓣的脂肪堆积显著降低(附图中红色标记区域，黑白图中箭头所指深色处)。以上结果表明雷公藤内酯酮治疗后能显著抑制高脂高胆固醇模型小鼠三尖瓣的脂肪生成。

实施例4：Masson染色实验

(一)实验材料

小鼠三尖瓣来自实施例1；Masson染色试剂盒购自南京建成生物有限公司。

(二)实验方法

取出冰冻切片，室温回温，蒸馏水洗掉包埋剂；染色前先用蒸馏水润湿玻片30-60秒；R1核染液染色60秒左右，倒掉，冲洗液冲洗30秒左右；R2 浆染液染色30-60秒左右，倒掉，冲洗液冲洗30秒左右(R2染色时间不可太久否则导致胞浆着色过深，R3不易褪色)；R3黄色分色液分色10分钟，弃去分色液，注意不需冲洗；直接用R4蓝色复染液染色5分钟左右，倒掉，用无水乙醇冲洗干净；吹干后，直接用中性树脂封固剂封片、镜检。染色结果：胶原纤维呈蓝色；胞浆呈红色；胞核呈蓝紫色。

(三)实验结果

为了验证雷公藤内酯酮对高脂高胆固醇模型小鼠动脉粥样硬化斑块稳定性的影响，对三尖瓣进行了Masson染色。结果如图3所示，高脂高胆固醇饲料使得小鼠三尖瓣的胶原纤维沉积明显增多(附图中蓝色标记区域，黑白图中箭头所指区域)，而雷公藤内酯酮灌胃治疗高脂高胆固醇饲料小鼠后，其三尖瓣的胶原纤维沉积显著降低(附图中蓝色标记区域，黑白图中箭头所指处)。以上结果表明雷公藤内酯酮治疗后能显著抑制高脂高胆固醇模型小鼠三尖瓣的胶原纤维沉积，进而影响动脉粥样硬化斑块的稳定性。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。