阅读说明：本技术 一种燕麦ace抑制肽的制备方法及其产品 (Preparation method of oat ACE inhibitory peptide and product thereof ) 是由 任清 孙静 王晶淼 张莎莎 邓巍 左桥 于 2019-09-30 设计创作，主要内容包括：本发明涉及燕麦多肽的制备技术领域,具体为一种燕麦ACE抑制肽的制备方法及其产品,该方法是将燕麦麸加入去离子水,调节PH至9.5,超声波生化仪中,浸提,再离心；取上清液调节PH至4.0,离心,慢慢倒掉上清液,保留燕麦蛋白沉淀,并将燕麦蛋白沉淀冷冻干燥存储。通过本方法制得的ACE抑制肽的相对分子量在800Da以下,能够制得ACE抑制性达到86.34％的燕麦ACE抑制肽,同时也避免了使用蠕动泵和超滤膜而导致Alcalase酶活损失的问题,提高了燕麦ACE抑制肽的生产效率。(The invention relates to the technical field of preparation of oat polypeptide, in particular to a preparation method of oat ACE inhibitory peptide and a product thereof, wherein the method comprises the steps of adding oat bran into deionized water, adjusting pH to 9.5, leaching in an ultrasonic biochemical instrument, and centrifuging; and (3) taking the supernatant, adjusting the pH value to 4.0, centrifuging, slowly pouring out the supernatant, retaining the oat protein precipitate, and freeze-drying and storing the oat protein precipitate. The relative molecular weight of the ACE inhibitory peptide prepared by the method is below 800Da, the oat ACE inhibitory peptide with the ACE inhibitory property of 86.34% can be prepared, the problem of Alcalase enzyme activity loss caused by a peristaltic pump and an ultrafiltration membrane is avoided, and the production efficiency of the oat ACE inhibitory peptide is improved.)

一种燕麦ACE抑制肽的制备方法及其产品

技术领域

本发明涉及燕麦多肽的制备技术领域，具体为一种燕麦ACE抑制肽的制备方法及其产品。

背景技术

高血压是引起冠心病、心肌梗塞、脑卒中风和肾功能衰竭等并发症的主要原因，被喻为人类健康的“第一杀手”，血管紧张素转化酶(ACE)是使血压升高的一个关键酶，通过抑制ACE的活性就可达到预防和治疗高血压的目的。目前，治疗高血压的主要是ACE抑制剂类药物，主要通过化学合成，其虽然具有高活性和特异性，但服用过程中会出现严重的毒副作用。因此，安全无毒副作用的ACE抑制剂类药物将成为新型抗高血压药物的研究方向，而食物源ACE抑制肽正好符合这一要求，为研制新型抗高血压药物提供了一条新的途径。

燕麦是一种特殊的粮、经、饲、药多用的作物，具有高营养保健功能的谷物，燕麦中富含可溶性膳食纤维、维生素矿物质和抗氧化成分，裸燕麦中蛋白质的含量居于谷物作物之首，蛋白质含量是小麦粉、大豆蛋白的1.6-2.3倍。

现有技术中也出现了一项专利关于一种燕麦ACE抑制肽的制备方法及其产品的技术方案，如申请号为2011101125123的一项中国专利公开了一种制备燕麦ACE抑制肽的方法。通过研究酶膜反应器系统对酶活的影响，可知酶膜反应器系统对Alcalase具有很好的保留效果，其中蠕动泵运转过程对酶造成的破坏和超滤膜对酶的吸附是导致Alcalase酶活损失的主要原因。

该方法能够制备燕麦ACE，但是该方法中，蠕动泵运转过程会对酶造成的破坏和超滤膜对酶的吸附也会导致Alcalase酶活损失，降低了燕麦ACE抑制肽的生产效率，同时所生产的燕麦ACE抑制肽的ACE抑制性较弱，因此提出一种能够高效生产燕麦ACE抑制肽以及保持较高ACE抑制性的制备方法和产品。

本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。

鉴于上述中存在的问题，提出了本发明。

为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：

本发明所述的一种燕麦ACE抑制肽的制备方法，包括：

燕麦蛋白的提取：将燕麦麸按照料液比1:18g/ml加入去离子水，调节PH至9.5，超声波生化仪中，浸提60min，再5000r/min离心10min；取上清液调节PH至4.0，在4000r/min离心15min，慢慢倒掉上清液，保留燕麦蛋白沉淀，并将燕麦蛋白沉淀冷冻干燥存储；

ACE抑制肽的制备：将燕麦蛋白加入去离子水进行溶解，制成5％质量浓度的蛋白液，加入蛋白酶，并置于60-100℃恒温酶反应器中，进行酶解1-4h，酶解所采用的蛋白酶为Alcalase、Trypsin、Pepsin、Pancreatin、Neutrase、Flavourzyme和Protamex中的一种或多种组合。

优选的，在ACE抑制肽的制备中，所采用的蛋白酶为Alcalase。

优选的，在ACE抑制肽的制备中，所述恒温酶反应器的温度设置为85℃。

优选的，在ACE抑制肽的制备中，所述酶解时间为3h。

优选的，在所述ACE抑制肽的制备中，还包括有脱色处理；

脱色处理：在酶反应器对燕麦蛋白进行酶解时，加入活性炭颗粒进行脱色1h，脱色时，通过搅拌器对酶反应器中进行100r/min的搅拌，再通过滤膜对酶液进行抽滤，所述滤膜的截留分子量量为400-500Da。

一种燕麦ACE抑制肽的产品，将燕麦ACE抑制肽与石斛多糖进行混合，所述ACE抑制肽与石斛多糖的质量比为1:1，再讲燕麦ACE抑制肽与石斛多糖的混合物按照质量比1:5-20加入到维生素C片中。

优选的，所述ACE抑制肽、石斛多糖和维生素C按照质量比1:1:5-20混合后，加入燕麦麸混合，并通过药片压片机压成片状产品。

与现有技术相比：本发明所述的一种燕麦ACE抑制肽的制备方法，通过将燕麦麸按照料液比1:18g/ml加入去离子水，调节PH至9.5，超声波生化仪中，浸提60min，再5000r/min离心10min；取上清液调节PH至4.0，在4000r/min离心15min，慢慢倒掉上清液，保留燕麦蛋白沉淀，并将燕麦蛋白沉淀冷冻干燥存储；进行酶解，通过本方法制得的ACE抑制肽的相对分子量在800Da以下，能够制得ACE抑制性达到86.34％的燕麦ACE抑制肽，同时也避免了使用蠕动泵和超滤膜而导致Alcalase酶活损失的问题，提高了燕麦ACE抑制肽的生产效率；一种燕麦ACE抑制肽的产品，将燕麦ACE抑制肽与石斛多糖进行混合，所述ACE抑制肽与石斛多糖的质量比为1:1，再讲燕麦ACE抑制肽与石斛多糖的混合物按照质量比1:15加入到维生素C片；利用燕麦ACE抑制肽降低血压，此石斛多糖的抗氧化活性以及维生素C对血管进行修复，能够对高血压、脑血栓进行有效的治疗。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

下述实施例的方法，如无特别说明，均为常规方法。

下述实施例中所述的百分含量，如无特别说明，均为质量百分含量。

下述实施例中所用的材料：燕麦麸由山西大同燕麦加工厂提供；ACE和马尿酸-组氨酸-亮氨酸购于Sigma公司；蛋白酶均购于Novo公司，所用试剂均为分析纯；

下述实施例中所用的仪器：HSG电热恒温水浴锅由上海仪表(集团)供销公司；CS501型超级恒温器由重庆实验设备厂提供；90-2型恒温磁力搅拌器由上海亚荣生化仪器厂；UV-2800型紫外可见分光光度计由尤尼克仪器有限公司。

实施例1

1)将燕麦麸按照料液比1:18g/ml加入去离子水，调节PH至9.5，超声波生化仪中，浸提60min，再5000r/min离心10min；取上清液调节PH至4.0，在4000r/min离心15min，慢慢倒掉上清液，保留燕麦蛋白沉淀，并将燕麦蛋白沉淀冷冻干燥存储；

2)将燕麦蛋白加入去离子水进行溶解，制成5％质量浓度的蛋白液，加入蛋白酶，并置于恒温酶反应器中，进行酶解，酶解所采用的蛋白酶分别采用Alcalase、Trypsin、Pepsin、Pancreatin、Neutrase、Flavourzyme和Protamex做7组实验，并增加一组空白对照实验；每组实验中，恒温酶反应器的酶解温度和PH以该水解酶的最佳水解温度和PH为准；

水解度的计算：采用PH-stat法进行测定，水解度即蛋白质中被水解肽键的比例，具体计算公式为：

式中：B为碱液消耗的体积(ml)；N为碱液浓度(mol/l)；α为α氨基解离度；M_P为底物中蛋白质质量(g)；h_tot为底物中蛋白质肽键总数(mmol/g)；

蛋白质浓度的测定：采用215nm与225nm紫外吸收差法测定；

ACE抑制活性的测定：将5mmol/l的HCL溶液80μl与40μl的ACE抑制肽混合，37℃水浴预热5min，加入0.1U/mlACE溶液10μl，继续37℃水浴30min，随后加入1mol/L的HCL溶液200μl终止反应的进行，再加入1.2ml乙酸乙酯混合，加入萃取反应体系中的马尿酸，1000r/min离心10min，取脂层溶液，80℃烘干，并重新溶于2ml去离子水中，在228nm处测定吸光值，ACE抑制率的计算公式：

式中：OD_a为ACE及ACE抑制肽都存在条件下的吸光度；OD_b不存在ACE抑制肽条件下的吸光度；OD_c为ACE不参与反应条件下的吸光度；

表1不同蛋白酶的燕麦蛋白水解物的ACE抑制活性

参考表1，对于未加酶处理的燕麦蛋白几乎没有ACE抑制活性，酶的水解产物表现除了抑制作用，通过对比上述的数据，得出在Alcalase作为水解酶时，其ACE抑制活性最强，且在1h的水解后即可达到88.46％，水解所需要的时间短，且水解后所得到的ACE抑制肽的ACE抑制活性最强；

进行响应面分析法优化实验：

通过进行单因素实验，以Alcalase作为水解酶，在酶解时间、酶解温度

和初始PH这三种因素筛选出对燕麦ACE抑制肽的有显著影响的因素，然后再单因素实验结果的基础上，采用Box-Behnkend的中心组合设计原理，以ACE抑制率为响应值，根据Design-Expert8.0软件提供的实验方案进行实验，实验设计见表2，并运用此软件对实验数据进行回归拟合方差分析从而得出各水平的最优值；

表2燕麦ACE抑制肽制备的响应面实验设计

表3响应面分析方案及结果

在a＝0.05显著水平上，回归方程分析显著性检验表明失拟项P值为0.3263＞0.05，失拟项不显著，回归显著，相关数R²＝0.9815，回归模型P值＜0.0001，回归方差高度显著，最终得到的最佳酶解工艺为酶解时间3h，酶解温度85℃，酶解PH8.5。

实施例2

1)将燕麦麸按照料液比1:18g/ml加入去离子水，调节PH至9.5，超声波生化仪中，浸提60min，再5000r/min离心10min；取上清液调节PH至4.0，在4000r/min离心15min，慢慢倒掉上清液，保留燕麦蛋白沉淀，并将燕麦蛋白沉淀冷冻干燥存储；

2)将燕麦蛋白加入去离子水进行溶解，制成5％质量浓度的蛋白液，加入蛋白酶，并置于85℃恒温酶反应器中，进行酶解3h，酶解所采用的蛋白酶为Alcalase。

3)在酶反应器对燕麦蛋白进行酶解时，加入活性炭颗粒进行脱色1h，脱色时，通过搅拌器对酶反应器中进行100r/min的搅拌，再通过滤膜对酶液进行抽滤，所述滤膜的截留分子量量为400-500Da。

实施例3

燕麦ACE抑制肽的产品，将燕麦ACE抑制肽与石斛多糖进行混合，所述ACE抑制肽与石斛多糖的质量比为1:1，再讲燕麦ACE抑制肽与石斛多糖的混合物按照质量比1:15加入到维生素C片；利用燕麦ACE抑制肽降低血压，此石斛多糖的抗氧化活性以及维生素C对血管进行修复，能够对高血压、脑血栓进行有效的治疗。

实施例4

燕麦ACE抑制肽的产品，将燕麦ACE抑制肽与石斛多糖进行混合，所述ACE抑制肽与石斛多糖的质量比为1:1，再讲燕麦ACE抑制肽与石斛多糖的混合物按照质量比1:20加入维生素C片，ACE抑制肽、石斛多糖和维生素C的混合物中按照质量比1:1:20混合后，在该混合物中以质量比1:2的比例加入燕麦麸混合，并通过药片压片机压成片状产品；利用成本较低的燕麦麸作为产品的填充物，可以降低产品的生产成本，同时产品在胃部消化溶解时，燕麦麸的加入会减缓产品溶解的速度，会缓慢的释放出ACE抑制肽、石斛多糖和维生素C，从而使得ACE抑制肽、石斛多糖和维生素C可以被充分的吸收。虽然在上文中已经参考实施例对本发明进行了描述，然而在不脱离本发明的范围的情况下，可以对其进行各种改进并且可以用等效物替换其中的部件。尤其是，只要不存在结构冲突，本发明所披露的实施例中的各项特征均可通过任意方式相互结合起来使用，在本说明书中未对这些组合的情况进行穷举性的描述仅仅是出于省略篇幅和节约资源的考虑。因此，本发明并不局限于文中公开的特定实施例，而是包括落入权利要求的范围内的所有技术方案。