一种泳池水微生物检测方法
阅读说明：本技术 一种泳池水微生物检测方法 (Method for detecting microorganisms in swimming pool water ) 是由 张梦娜 耿亚丹 温义香 李萌 于 2021-02-05 设计创作，主要内容包括：本申请涉及一种泳池水微生物检测方法,属于水质检测技术领域。其包括下述步骤：1)、通过采水设备进行样水采集；1.1)、对各个采样点的泳池水进行采集；1.2)、把采集的各个采样点的泳池水混合；1.3)、从混合的泳池水中抽取样水；2)、制备储备培养基；3)、制备平皿培养基；4)、制备乳糖蛋白胨培养液；5)、滤膜灭菌；6)、滤器灭菌；7)、水样过滤；8)、培养；9)、挑取符合的菌落进行革兰氏染色和镜检；10)、将革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌接种到乳糖蛋白胨培养液中,于36℃±1℃的环境下培养48h,产酸产气者证实为大肠菌群阳性；11)、计算滤膜上生长的证实为大肠菌群的菌落数。本申请具有泳池水日常检测方便的效果。(The application relates to a method for detecting microorganisms in swimming pool water, and belongs to the technical field of water quality detection. Which comprises the following steps: 1) collecting sample water through water collecting equipment; 1.1) collecting the swimming pool water at each sampling point; 1.2) mixing the collected swimming pool water at each sampling point; 1.3) extracting sample water from the mixed swimming pool water; 2) preparing a reserve culture medium; 3) preparing a plate culture medium; 4) preparing lactose peptone culture solution; 5) sterilizing the filter membrane; 6) sterilizing a filter; 7) filtering the water sample; 8) and culturing; 9) picking the bacterial colony to perform gram staining and microscopic examination; 10) inoculating gram-negative bacillus-free bacillus into lactose peptone culture solution, and culturing for 48h in an environment with the temperature of 36 +/-1 ℃, wherein a person producing acid and gas is proved to be positive in coliform; 11) the number of colonies on the filter which were confirmed to be coliform colonies was counted. This application has the convenient effect of daily detection of swimming pool water.)
技术领域
本申请涉及水质检测的领域，尤其是涉及一种泳池水微生物检测方法。
背景技术
水中微生物的计量，在保证水源安全和控制传染病上有极其重要的意义，同时也是评价水质状况的重要指标，特别是泳池需要定期对泳池水进行微生物检测，特别是大肠菌群的检测，大肠菌群指的是一群在36℃±1℃的环境下培养24h能发酵乳糖、产酸、产气的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
水中微生物的计量，有平板计数法，即将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液涂布到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞，统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。其次还有一种滤膜法，即将适当孔径的滤膜放入滤器，过滤样品，由于滤膜的作用将微生物保留在膜的表面上，样品中微生物生长抑制剂可在过滤后用无菌水冲洗滤器而除去，然后，将滤膜放在培养基上培养，营养物和代谢物通过滤膜的微孔进行交换，在滤膜表面上培养出的菌落可以计数，并和样品量相关。
针对上述中的相关技术，发明人认为在对泳池进行水质检测时，需要在泳池确定多个采样点，通过对各个采样点的样水进行检测汇总才能得出一个较为准确的数据，费时费力，对于水池的日常管理而言过于麻烦。
发明内容
为了方便对泳池水进行日常检测，本申请提供一种泳池水微生物检测方法。
本申请提供的一种泳池水微生物检测方法采用如下的技术方案：
一种泳池水微生物检测方法，该方法包括下述步骤：
1）、通过采水设备进行样水采集；
1.1）、对各个采样点的泳池水进行采集；
1.2）、把采集的各个采样点的泳池水混合；
1.3）、从混合的泳池水中抽取样水；
2）、制备储备培养基；
3）、制备平皿培养基；
4）、制备乳糖蛋白胨培养液；
5）、滤膜灭菌；
6）、滤器灭菌；
7）、水样过滤；
8）、培养；
9）、挑取符合的菌落进行革兰氏染色和镜检；
10）、将革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌接种到乳糖蛋白胨培养液中，于36℃±1℃的环境下培养48h，产酸产气者证实为大肠菌群阳性；
11）、计算滤膜上生长的证实为大肠菌群的菌落数。
通过采用上述技术方案，通过把各个采样点的水样进行混合处理，然后抽取混合后的泳池水作为样水，然后进行后续的水样检测，减少水样的数量的同时，又能得到一个较为准确可以反映泳池水情况的数据，方便对泳池水进行日常检测。
可选的，步骤1.1）中每个采集点对中层到表层之间的水样进行采集。
通过采用上述技术方案，每个采集点对泳池水表层到中层的水样进行采集，使得每个采集点采集的水样更加准确，由于泳池水底部的情况影响较小，泳池水表层到中层之间的部分是主要的接触水，且相应的表层水中的病菌量较多，这样的检测方式，可以使得检测出的数据更加的准确，降低泳池水底层部分对检测结果的影响。
可选的，步骤1.1）中在确定采集点前调研泳池各区域人员分布情况，根据区域人员进行采集点划分，人员密集处设置更多的采集点。
通过采用上述技术方案，根据泳池区域人员分布情况进行相应的采集点划分，使得采集点的设置更加合理，检测时可以更好的反应泳池水的情况。
可选的，步骤1）中所述采水设备包括采水壳、采水活塞、采水杆、混合活塞和混合杆，所述采水壳内设置有混合腔和位于混合腔外圈的若干个采水腔，所述采水活塞有若干并一一对应滑移安装于所述采水腔内，所述采水杆有若干，若干所述采水杆一一对应固定于所述采水活塞上，所述混合活塞滑移安装于所述混合腔内并固定所述混合杆，所述混合腔与若干所述采水腔均相互连通并设置有单向阀，所述采水腔腔底设置有连通外部的吸水软管并设置有单向阀，所述混合腔的腔底设置有连通外部的出样管并安装有单向阀。
通过采用上述技术方案，设置的若干个采水腔用于一一对应接收各个采集点采集的泳池水，通过采水杆带动采水活塞在采水腔内运动，采水腔内形成真空环境，然后吸水软管从采集点吸收泳池水送入采水腔，然后通过混合杆带动混合活塞在混合腔内上移，混合腔内形成真空环境，从而把各个采水腔内的水吸入混合腔进行混合，混合腔底部设置的出样管用于把混合的泳池水送出，整个设备集采集点采水、混合各个采集点采集的泳池水以及从混合的泳池水中抽取样水等功能于一体，操作更加方便，相互之间的关联性更好，进一步简化采水时的步骤和繁琐程度，方便对泳池水进行日常检测。
可选的，所述采水壳上设置有若干连动组件，若干所述连动组件一一对应若干所述采水杆，所述连动组件包括支撑杆和连动杆，所述支撑杆竖向固定于所述采水壳上，所述连动杆中部转动安装于所述支撑杆远离所述采水壳的一端，所述连动杆一端位于所述采水杆上方另一端位于所述混合杆上方。
通过采用上述技术方案，连动杆位于采水杆上方的一端一方面用于限制采水杆脱离采水腔，同时又用于混合杆带动采水杆下移，混合腔从采水腔抽取泳池水以及采水腔向混合腔挤入泳池水同时进行，使得泳池水的混合更加简便，采水杆上移从泳池抽取泳池水时，不会受到连动杆的干涉，方便泳池水的采集，混合杆下移时又不会受到采水杆的限制，方便样水的挤出。
可选的，所述混合杆侧壁设置有悬伸板，所述连动杆一端位于所述悬伸板上侧，所述采水杆上设置有连接柱和拉拔柱，所述连接柱以及所述拉拔柱均与所述采水杆同轴，且所述连接柱的直径小于所述采水杆的直径以及所述拉拔柱的直径，所述连动杆另一端位于所述拉拔柱和所述采水杆之间。
通过采用上述技术方案，设置悬伸板，通过悬伸板推动连动杆一端上移，使得混合杆的直径无需很大，减少混合杆的质量和空间占比，有利于混合杆的拉动，同时保持对连动杆的推动作用，连动杆的长度要求更低，相邻连动杆之间更加不容易干涉。
可选的，所述出样管上安装有出样胶管，所述出样胶管上设置有两个出样分管所述采水设备还包括无菌采水袋和止水夹，所述止水夹设置于一个所述出样分管上，另一根所述出样分管与所述无菌采水袋的无菌进样管插装固定，所述止水夹与无菌采水袋固定。
通过采用上述技术方案，使用时止水夹先固定在一根出样分管上，然后通过另一根出样分管挤出部分样水，把无菌采水袋与另一根出样分管插装固定，注入样水，然后取下止水夹，从另一根出样分管排出剩余的样水，一方面，可以清洗需要输出样水的出样分管，降低干扰，另一方面，可以通过另一根出样分管排出过多的样水，减少步骤，在抽取样水时就完成剩余样水的处理，简化操作流程。
可选的，所述采水壳下方设置若干支撑脚，所述支撑脚下设置有刹车脚轮，若干所述支撑脚之间设置废水盒，所述废水盒中部设置用于放置无菌采水袋的支撑柱。
通过采用上述技术方案，使得采水设备可以方便的移动进行各个采集点泳池水的采集，刹车脚轮把采水设备固定在原地，便于采水操作，废水盒接收多余的样水，方便后期处理废水，支撑柱用于放置无菌采水袋进行样水的接收。
可选的，所述采水设备还包括扇叶，所述扇叶包括若干叶片，所述扇叶转动安装于所述混合腔的腔底，所述混合活塞朝向所述混合腔腔底的侧壁开设有供扇叶进入的安置腔，若干所述混合孔的轴线朝向所述扇叶的叶片设置。
通过采用上述技术方案，从采水腔吸入的泳池水带动扇叶旋转，使得步骤1.1）和步骤1.2）可以同时进行，简化操作步骤，提高采水效率，各个采水腔中的泳池水之间的混合效果更好。
可选的，所述扇叶还包括安装片，所述出样管一端凸出所述混合腔的腔底设置，所述安装片套装于所述出样管位于所述混合腔内的一端，若干所述叶片固定于所述安装片外沿并沿所述安装片周向间隔设置，所述出样管端部凸出所述安装片设置，所述出样管侧壁沿周向间隔开设有若干限位水口，所述限位水口内安装有限制扇叶脱离并连通出样管的限位水管。
通过采用上述技术方案，安装片通过限位水管限制在出样管上，限位水管可以从四周吸收搅拌后的水样进入出样管，使得扇叶的安装不影响水样的输出，各个采水腔中输入混合腔的泳池水通过叶片之间的间隙进入若干叶片围出的中间区域，进行涡流，混合效果进一步提高。
综上所述，本申请包括以下至少一种有益技术效果：
1.通过把各个采样点的水样进行混合处理，然后抽取混合后的泳池水作为样水，然后进行后续的水样检测，减少水样的数量的同时，又能得到一个较为准确可以反映泳池水情况的数据，方便对泳池水进行日常检测；
2.设置的若干个采水腔用于一一对应接收各个采集点采集的泳池水，通过采水杆带动采水活塞在采水腔内运动，采水腔内形成真空环境，然后吸水软管从采集点吸收泳池水送入采水腔，然后通过混合杆带动混合活塞在混合腔内上移，混合腔内形成真空环境，从而把各个采水腔内的水吸入混合腔进行混合，混合腔底部设置的出样管用于把混合的样水送出，整个设备集采集点采水、混合各个采集点采集的泳池水以及从混合的泳池水中抽取样水等功能于一体，操作更加方便，相互之间的关联性更好，进一步简化采水时的步骤和繁琐程度，方便对泳池水进行日常检测；
3.连动杆位于采水杆上方的一端一方面用于限制采水杆脱离采水腔，同时又用于混合杆带动采水杆下移，混合腔从采水腔抽取泳池水以及采水腔向混合腔挤入泳池水同时进行，使得泳池水的混合更加简便，采水杆上移从泳池抽取泳池水时，不会受到连动杆的干涉，方便泳池水的采集，混合杆下移时又不会受到采水杆的限制，方便样水的挤出。
附图说明
图1是采水设备的结构示意图1；
图2是采水设备的结构示意图2；
图3是采水设备采水腔处的局部剖视图；
图4是无混合活塞和混合杆装置的采水设备结构示意图：
图5是出样管与扇叶的安装结构示意图；
图6是混合杆的结构示意图；
图7是出样胶管、止水夹与无菌采水袋的安装结构示意图。
附图标记说明：1、采水壳；11、采水活塞；12、采水杆；121、连接柱；122、拉拔柱；13、混合活塞；131、安置腔；14、混合杆；141、把手；142、悬伸板；15、混合孔；16、出样管；161、限位水口；162、限位水管；21、支撑杆；22、连动杆；3、扇叶；31、安装片；32、叶片；4、无菌采水袋；41、无菌进样管；42、无菌出样管；5、止水夹；6、支撑脚；7、刹车脚轮；8、废水盒；81、废水口；82、塞子；91、吸水软管；92、出样胶管；921、出样分管；93、系带；94、支撑柱。
具体实施方式
以下结合附图1-6对本申请作进一步详细说明。
本申请实施例公开一种泳池水微生物检测方法。一种泳池水微生物检测方法，该方法包括下述步骤：
1）、通过采水设备进行样水采集；
参照图1和图2，采水设备包括采水壳1、采水活塞11、采水杆12、混合活塞13、混合杆14、连动组件、扇叶3、无菌采水袋4和止水夹5，采水壳1上侧开口且内部分隔成若干个腔室包括位于中间最大的混合腔和位于混合腔室外圈的若干个采水腔，采水壳1下方设置有支撑脚6，支撑脚6的数量可以为四个，四个支撑脚6分设采水壳1的四侧，支撑脚6上端与采水壳1焊接固定，每个支撑脚6下端固定一个刹车脚轮7，使得采水设备可以方便的移动又可以安置在原地。
参照图1和图2，四个支撑脚6之间设置废水盒8，废水盒8的四侧与四个支撑脚6的中部一一对应焊接固定，废水盒8内中部竖直一体设置有支撑柱94用于无菌采水袋4的安置，废水盒8上开设废水口81并安装塞子82，用于排出接收的废水。
参照图1，采水活塞11有若干并一一对应滑移安装于若干采水腔内，且采水活塞11与采水腔的腔壁贴合，使得采水活塞11在采水腔内滑移时，采水腔与采水活塞11之间保持密封状态，采水活塞11外套装并胶黏固定有一层密封橡胶层，采水杆12有若干，若干采水杆12一一对应一体固定于采水活塞11上，采水杆12上一体设置有连接柱121和拉拔柱122，连接柱121以及拉拔柱122均与采水杆12同轴，且连接柱121的直径小于采水杆12的直径以及拉拔柱122的直径，拉拔柱122方便拉动采水杆12，从而带动采水活塞11在采水腔内滑移。
参照图3，采水腔的腔底设置有连通外部的吸水软管91并设置有单向阀，吸水软管91上的单向阀控制水可以进入采水腔却不能流出采水腔，通过吸水软管91从泳池吸收泳池水。
参照图1，混合活塞13滑移安装于混合腔内，且混合活塞13与混合腔的腔壁贴合，使得混合活塞13在混合腔内滑移时，混合腔与混合活塞13之间保持密封状态，混合活塞13外也套装并胶黏固定有一层密封橡胶层，混合杆14与混合活塞13一体固定，混合杆14远离混合活塞13的一端设置有把手141，方便拉动混合杆14。
参照图1，连动组件有若干，若干连动组件一一对应若干采水杆12，连动组件包括支撑杆21和连动杆22，每个连动组件包括两根支撑杆21，两根支撑杆21竖向固定于混合腔和相应采水腔之间的部分上，连动杆22的中部位于两根支撑杆21之间并铰接于两根支撑杆21之间。
参照图1，混合杆14侧壁设置有若干悬伸板142，连动杆22一端位于悬伸板142上侧，悬伸板142的设置，使得混合杆14可以更好的推动连动杆22的同时，混合杆14的直径和重量不至于过大，相邻连动杆22之间不容易干涉，连动杆22另一端位于拉拔柱122和采水杆12之间，且连动杆22位于采水杆12和拉拔柱122之间一端开设有圆弧缺口，使得连接柱121与连动杆22之间不会干涉。
参照图4，混合腔与若干采水腔之间一一对应通过开设混合孔15相互连通，每个混合孔15内均安装有单向阀，混合孔15内的单向阀控制水可以从采水腔进入混合腔却不能流回采水腔。
参照图4和图5，混合腔的腔底中部设置有连通外部的出样管16并安装有单向阀，出样管16上的单向阀控制混合腔内的样水只能通过出样管16流出混合腔，而无法通过出样管16流入混合腔。
参照图4和图5，扇叶3包括安装片31和若干叶片32，出样管16一端凸出混合腔的腔底设置，安装片31套装于出样管16位于混合腔内的一端，且出样管16端部高出安装片31，若干叶片32沿安装片31周向间隔设置，相邻叶片32之间的间隙供样水通过。
参照图4和图6，混合活塞13朝向混合腔腔底的侧壁开设有安置腔131，使得混合活塞13与混合腔的腔底抵接时，扇叶3可以进入安置腔131，扇叶3不会阻碍混合活塞13下移。
参照图4和图5，若干混合孔15的轴线朝向扇叶3的叶片32设置，且若干混合孔15流入的泳池水对叶片32的作用力呈螺旋形，推动扇叶3朝同一个方向旋转，混合孔15部分开设有混合腔的腔底和采水腔的腔底，使得混合孔15部分与混合腔的腔底连通，混合活塞13移动时产生的负压环境可以第一时间作用在混合孔15内的单向阀上，有利于水样的流入。
参照图4和图5，出样管16侧壁沿周向间隔开设有若干限位水口161，限位水口161内安装有限制扇叶3脱离并连通出样管16的限位水管162，限位水管162一端插装于限位水口161内另一端悬伸设置限制扇叶3脱离，限位水管162悬伸的一端的上部敞口，有利于水顺着流入出样管16中。
参照图2和图7，出样管16位于混合腔外的一端上插装固定有出样胶管92，出样胶管92一端与出样管16插装固定，出样胶管92另一端一体设置并分出两个出样分管921，无菌采水袋4放置于支撑柱94上，无菌采水袋4上设置有无菌进样管41和无菌出样管42，无菌进样管41和无菌出样管42上均设置有单向阀，使得无菌采水袋4只能通过无菌进样管41输入样水，通过无菌出样管42排出样水，止水夹5设置于一个出样分管921上，另一根出样分管921与无菌采水袋4的无菌进样管41插装固定，止水夹5与无菌采水袋4直接通过一根系带93固定，由于止水夹5和无菌采水袋4必有一个和出样分管921固定，使得无菌采水袋4不容易落入废水盒8中。
1.1）、对各个采样点的泳池水进行采集；
调研泳池各区域人员分布情况，根据区域人员进行采集点划分，人员密集处设置更多的采集点，每个采集点对中层到表层之间的水样进行采集，采集时，通过手持吸水软管91，拉动采水杆12的同事，放下吸水软管91从采集点的表层往中层运动，在吸水软管91运动到中层的过程中完成泳池水的采集，用同样的方法对各个采集点进行泳池水采集，每个采水腔采集一个或多个采集点；
1.2）、把采集的各个采样点的泳池水混合；
通过把手141带动混合杆14，混合杆14带动混合活塞13，在混合腔内形成负压，从而把采水腔内的泳池水吸入混合腔进行混合；
1.3）、从混合的泳池水中抽取样水；
通过混合活塞13下移，把混合腔内的泳池水通过出样胶管92排出，其中一根出样分管921通过止水夹5封闭，然后通过另一根出样分管921挤出部分样水，把无菌采水袋4与另一根出样分管921插装固定，注入样水，然后取下止水夹5，从另一根出样分管921排出剩余的样水；
2）、制备储备培养基；
将3.5g磷酸氢二钾、5g酵母浸膏、5g牛肉膏及10g蛋白胨加到含有900mL蒸馏水的烧杯中，溶解后调pH值到7.27.4，加入10~20g琼脂加热溶解，用蒸馏水补足至1000mL，趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加人10g乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，115℃高压灭菌20min，置冷暗处备用；
3）、制备平皿培养基；
将步骤2）中的培养基加热融化，根据培养基的用量，碱性品红乙醇溶液与培养基按1：50的比例，用灭菌吸管吸取一定量的碱性品红溶液置于灭菌空试管中；再按1：200的比例称取所需的无水亚硫酸钠置于另一个灭菌空试管内，加灭菌水少许使其溶解，在沸水浴中煮沸灭菌10min。用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液，滴加于碱性品红乙醇溶液至深红色褪成淡粉红色为止；将此亚硫酸钠与碱性品红的混合液全部加入已融化的储备培养基中，并充分混匀，立即将此种培养基适量倾入灭菌的空平皿内，待其冷却凝固后置冰箱内备用；此培养基于冰箱中保存不宜超过两周，如培养基已由淡红色变成深红色，则不能再用；
4）、制备乳糖蛋白胨培养液；
5）、滤膜灭菌：将滤膜放入含蒸馏水的烧杯中，煮沸灭菌三次，每次15min。前两次煮沸后需更换水洗涤2~3次，以除去残留溶剂；
6）、滤器灭菌：用121℃高压灭菌20min或用点燃的酒精棉球火焰灭菌；
7）、水样过滤：用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗面向上，贴放在滤床上；固定好滤器，将100mL水样如水样含菌数较多，可减少滤水样量或将水样稀释）注入滤器中，打开滤器门，在一0.5×10Pa（-0.5大气压）下抽滤；
8）、培养:水样滤完后，再抽气约5s，关上滤器阀门，取下滤器。用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，移放在乳糖琼脂分离培养基上，滤膜截留面向上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者之间不得留有气泡；然后将平皿倒置，放人36℃±1℃恒温箱内培养18~24h；
9）、挑取符合的菌落进行革兰氏染色和镜检:
紫红色，具有金属光泽的菌落；
深红色，不带或略带金属光泽的菌落；
淡红色，中心色较深的菌落；
10）、将革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌接种到乳糖蛋白胨培养液中，于36℃±1℃的环境下培养48h，产酸产气者证实为大肠菌群阳性；
11）、计算滤膜上生长的证实为大肠菌群的菌落数：
计算滤膜上生长的证实为大肠菌群的菌落数，再乘以10即为每1000mL水样中的大肠菌群数。
以上均为本申请的较佳实施例，并非依此限制本申请的保护范围，故：凡依本申请的结构、形状、原理所做的等效变化，均应涵盖于本申请的保护范围之内。