阅读说明：本技术 Jmjd3抑制剂gsk-j1 hcl在制备治疗心肌纤维化药物中的用途 (Application of JMJD3 inhibitor GSK-J1 HCL in preparation of drugs for treating myocardial fibrosis ) 是由 刘新华 朱依谆 龙芬 于 2019-10-09 设计创作，主要内容包括：本发明属制药领域,涉及化合物GSK-J1 HCL在制药中的新用途,具体涉及组蛋白去甲基酶JMJD3抑制剂GSK-J1 HCL在制备治疗心肌纤维化药物中的用途。本发明通过建立的小鼠左冠状动脉结扎手术引起的心肌纤维化模型和Ang II诱导NRCFs的体外心肌纤维化模型实验,结果表明GSK-J1 HCL通过抑制JMJD3的表达降低胶原含量,减少纤维化相关蛋白的表达对心肌纤维化起到调控作用。所述化合物GSK-J1 HCL(C22H23N5O2.HCL)及其相关抑制剂可用于制备防治心肌纤维化疾病的药物。(The invention belongs to the field of pharmacy, relates to a new application of a compound GSK-J1 HCL in pharmacy, and particularly relates to an application of a histone demethylase JMJD3 inhibitor GSK-J1 HCL in preparation of a medicine for treating myocardial fibrosis. According to the invention, the established myocardial fibrosis model caused by mouse left coronary artery ligation operation and the in vitro myocardial fibrosis model experiment of Ang II induced NRCFs show that the GSK-J1 HCL can reduce the collagen content by inhibiting the expression of JMJD3 and reduce the expression of fibrosis-related protein to play a role in regulating and controlling myocardial fibrosis. The compound GSK-J1 HCL (C22H23N5O2.HCL) and related inhibitors thereof can be used for preparing medicines for preventing and treating myocardial fibrosis diseases.)

JMJD3抑制剂GSK-J1 HCL在制备治疗心肌纤维化药物中的 用途

技术领域

本发明属制药领域，涉及化合物GSK-J1 HCL在制药中的新用途，具体涉及组蛋白去甲基酶JMJD3抑制剂GSK-J1 HCL在制备治疗心肌纤维化药物中的用途。

背景技术

现有技术公开了心肌梗死(myocardial infarction，MI)是因冠状动脉血供急剧减少或中断，使相应的心肌严重而持久的缺血而导致的心肌坏死，可导致心室重构，并可逐步进展为心力衰竭，严重威胁人类的健康和生命。研究显示，心肌纤维化(myocardialfibrosis，MF)是多种心脏疾病发展到一定阶段的共同病理改变，是最具特征性的结构改变之一，为MI后心室重构的主要表现之一，可促进心肌收缩和舒张功能失调；还有研究显示，心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts，CFs)的长期激活，即增强的胶原含量、肌成纤维细胞分化和伴随的细胞外基质分泌，可导致心肌纤维化。

化合物GSK-J1 HCL是有效的组蛋白甲基转移酶JMJD3抑制剂，在肿瘤和炎症方面的研究居多；在有关病理过程中，JMJD3所介导的H3K27位点的甲基化修饰的去除能对疾病发生发展过程中基因表达的活跃状态进行调控，有关实验结果也揭示GSK-J1 HCL通过抑制JMJD3参与胶原沉积改善，对心肌纤维化效应进行调控，迄今为止，尚未见化合物GSK-J1HCL对心肌纤维化治疗作用的相关报道。

基于现有技术的现状，本申请的发明人拟提供涉及化合物GSK-J1 HCL在制药中的新用途，具体涉及组蛋白去甲基酶JMJD3抑制剂GSK-J1 HCL在制备治疗心肌纤维化药物中的用途。

发明内容

本发明的目的是基于现有技术的现状，提供涉及化合物GSK-J1 HCL在制药中的新用途，具体涉及组蛋白去甲基酶JMJD3抑制剂GSK-J1 HCL在制备治疗心肌纤维化药物中的用途。

本发明提供了化合物GSK-J1 HCL在心血管方面的新药理作用和用途，尤其涉及GSK-J1 HCL可用于制备治疗心肌纤维化的药物中的应用。

本发明所述的GSK J1的分子式为:C22H23N5O2.HCL。

本发明通过建立的小鼠左冠状动脉结扎手术引起的心肌纤维化模型和Ang II诱导NRCFs的体外心肌纤维化模型实验，结果表明GSK-J1 HCL通过抑制JMJD3的表达降低胶原含量，减少纤维化相关蛋白的表达对心肌纤维化起到调控作用。所述化合物GSK-J1 HCL(C22H23N5O2.HCL)及其相关抑制剂可用于制备防治心肌纤维化疾病的药物。

更具体的，

本发明采用C57BL/6J对建立的小鼠左冠状动脉前降支的心肌梗死模型进行试验研究，心脏超声检测心功能参数；western-blotting法检测GSK J1对心肌胶原(collagen)和效应蛋白结缔组织生长因子(CTGF)蛋白及纤维连接蛋白(FN)表达水平的影响；HE染色法检测GSK J1对心脏梗死区及梗死边缘区形态学的影响；Masson染色法检测对梗死区及梗死边缘区胶原含量的影响；结果显示，GSK-J1 HCL能显著提高射血分数(EF％)和左室短轴缩短率(FS％)的值，减少心肌纤维化面积，并有效抑制collagen，CTGF和FN的蛋白表达水平。

本发明中，通过体外建立血管紧张素(Ang II)诱导大鼠乳鼠原代成纤维细胞(NRCFs)心肌纤维化模型实验，检测GSK-J1 HCL对纤维化效应的影响，结果显示，GSK-J1HCL能显著抑制Ang II诱导的纤维化效应蛋白的表达；实验结果证明所述化合物对原代心肌成纤维细胞的纤维化效应产生抑制，起到治疗作用。

本发明提供了化合物GSK-J1 HCL在心血管方面的新药理作用和用途，经小鼠心肌纤维化模型和体外心肌纤维化模型实验，结果证实，所述的GSK-J1 HCL通过抑制JMJD3的表达降低胶原含量，减少纤维化相关蛋白的表达对心肌纤维化起到调控作用；所述化合物GSK-J1 HCL可用于制备防治心肌纤维化疾病的药物。

附图说明

图1：GSK-J1 HCL对心功能的影响，其中，

sham:假手术组，MI:左冠状动脉前降支结扎手术组，MI+GSK-J1 HCL：左冠状动脉前降支结扎手术+GSK-J1 HCL给药组，20mg/kg/day，#:MI组与sham组相比，p<0.05；*:MI+GSK-J1 HCL组与MI组相比，p<0.05。

图2:GSK-J1 HCL对心脏组织中纤维化效应蛋白表达水平的影响，其中，

sham:假手术组，MI:左冠状动脉前降支结扎手术组，MI+GSK-J1 HCL：左冠状动脉前降支结扎手术+GSK-J1 HCL给药组，20mg/kg/day。

图3：GSK-J1 HCL对心脏梗死区及梗死边缘区的形态学影响，其中，

sham:假手术组，MI:左冠状动脉前降支结扎手术组，MI+GSK-J1 HCL：左冠状动脉前降支结扎手术+GSK-J1 HCL给药组，20mg/kg/day。

图4：GSK-J1 HCL对心脏梗死区及梗死边缘区胶原含量的影响，其中，sham:假手术组，MI:左冠状动脉前降支结扎手术组，MI+GSK-J1 HCL：左冠状动脉前降支结扎手术+GSK-J1 HCL给药组，20mg/kg/day。

图5：GSK-J1 HCL对Ang II诱导的NRCFs细胞中胶原含量的影响，其中，

control：正常对照组，Ang II：模型组，Ang II+GSK-J1 HCL:Ang II+GSK-J1 HCL。

图6：GSK-J1 HCL对Ang II诱导的NRCFs细胞纤维化效应蛋白CTGF表达水平的影响，其中，control：正常对照组，Ang II：模型组，Ang II+GSK-J1 HCL:Ang II+GSK-J1 HCL。

具体实施方式

实施例1 GSK-J1 HCL提高心梗后EF％和FS％值，降低组织中胶原沉积，抑制心脏组织中纤维化效应蛋白的表达动物实验

体重25-30g雄性C57BL/6J小鼠，异氟烷气麻后仰卧固定，胸部备皮。于左侧胸腔第三、第四肋间开胸，用7-0号带线缝合针在左心耳和肺动脉圆锥之间，距主动脉根部约1mm处永久性结扎左冠状动脉前降支，观察到供血区域心肌变白为模型成功标准。迅速关闭胸腔，无菌生理盐水清洁后缝合皮肤，保温待小鼠清醒后给予水和标准饲料分笼饲养。假手术组除不结扎冠状动脉外，其余操作相同。GSK-J1 HCL以生理盐水溶解。随机分为假手术组(sham，生理盐水，ip.n＝6)，模型组(MI，生理盐水，ip.n＝6),模型+GSK-J1 HCL组(MI+GSK-J1 HCL，20mg/kg/day，ip.n＝6)。连续给药14天后，心脏超声法检测小鼠心功能，处死后迅速取出心脏，4％多聚甲醛固定，包埋做石蜡切片，HE染色观察组织形态学，Masson染色法检测组织胶原含量。

与模型组相比，GSK-J1 HCL组能显著提高小鼠心脏EF％和FS％值(如图1所示)。Western-blotting结果提示GSK-J1 HCL显著降低纤维化效应蛋白CTGF的表达(如图图2所示)。HE染色结果显示GSK-J1 HCL显著改善心梗边缘区残存的心肌细胞肥大、梗死区炎性细胞的侵润，使心肌组织排列整齐、边界清楚，细胞核大小均一(如图3所示)。Masson染色结果显示GSK-J1 HCL可明显减少心脏梗死区及梗死边缘区的胶原沉积(如图4所示)。

实施例2 GSK-J1 HCL降低Ang II诱导的NRCFs细胞胶原含量及效应蛋白水平实验

大鼠乳鼠原代心肌成纤维细胞(NRCFs)培养于含10％胎牛血清的DMEM培养基中，置于37℃，5％CO2孵箱中培养，当细胞汇合度达80-90％时传代；细胞种于24孔板，设置正常对照组(Control，无药物干预，不加Ang II)，模型组(Model，无药物干预，Ang II刺激48h),GSK-J1 HCL组(GSK-J1 HCL，20μM，提前4h预处理后以Ang II刺激)；免疫荧光法结果显示，GSK-J1 HCL能有效降低原代心肌成纤维细胞中胶原含量；细胞种于6孔板，各试验对照组以Ang II诱导48h后裂解细胞提取蛋白；Western-Blotting法检测心肌纤维化效应蛋白CTGF和FN，结果显示GSK-J1 HCL能明显降低纤维化效应蛋白的表达水平。