一种艾司奥美拉唑钠药物中对映异构体的检测方法
阅读说明：本技术 一种艾司奥美拉唑钠药物中对映异构体的检测方法 (Method for detecting enantiomer in esomeprazole sodium medicine ) 是由 佘鹏鹏 徐浩宇 蔡伟 徐春来 周培培 蔡丽娟 刘政伟 董达文 李浩冬 吴青青 于 2019-10-15 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种艾司奥美拉唑钠药物中对映异构体的检测方法,所述检测方法包括：采用反相高效液相色谱法,以表面有纤维素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)共价键合硅胶为色谱柱填料,采用紫外检测器；流动相为碳酸氢铵水溶液、水溶性非质子有机溶剂以及低级烷醇所形成的混合体系；以所述流动相进行洗脱,检测艾司奥美拉唑钠药物中的对映异构体含量。相比于现有技术,本发明的检测方法具有更高的专属性,有效地避免了稳定性放样过程中主要降解杂质(加速和长期稳定性过程中产生)及可能存在的工艺杂质和中间体对于对映异构体检测的干扰；更能适用于注射用艾司奥美拉唑钠,具有更优越的精密度、准确度和耐用性。(The invention discloses a detection method of enantiomer in esomeprazole sodium medicine, which comprises the following steps: adopting reversed-phase high performance liquid chromatography, using cellulose-tri (3, 5-dimethyl phenyl carbamate) covalent bonding silica gel on the surface as chromatographic column packing, and adopting an ultraviolet detector; the mobile phase is a mixed system formed by ammonium bicarbonate aqueous solution, water-soluble aprotic organic solvent and lower alkanol; eluting with the mobile phase, and detecting the content of enantiomer in the esomeprazole sodium medicament. Compared with the prior art, the detection method has higher specificity, and effectively avoids the main degradation impurities (generated in the acceleration and long-term stability processes) in the stability lofting process and the possible interference of process impurities and intermediates on the enantiomer detection; the injection is more suitable for esomeprazole sodium for injection, and has more excellent precision, accuracy and durability.)
技术领域
本发明涉及但不限于药物分析技术领域，尤其涉及但不限于一种艾司奥美拉唑钠药物中对映异构体的检测方法。
背景技术
艾司奥美拉唑钠是一种手性质子泵抑制剂(PPIs)，临床主要用于治疗胃食管反流性疾病(GORD)，也与抗生素联用治疗幽门螺旋杆菌引起的十二指肠溃疡。它由阿斯利康制药有限公司研制开发，FDA于2001年2月批准在美国、欧洲等地上市；是奥美拉唑的S-异构体，能在壁细胞的高酸环境中浓集并转化为活性形式，比奥美拉唑作用更强，在控制胃酸水平、减轻疼痛症状和促进愈合方面更有效。奥美拉唑主要经CYP2C19代谢，个体差异大，艾司奥美拉唑钠经CYP3A4和CYP2C19代谢，抑酸作用较强。合成过程可能会引入微量的R-构型杂质，产生R-奥美拉唑，使注射剂中存在对映异构体，影响产品质量，故对成品中的对映异构体需加以控制。
艾司奥美拉唑钠化学名为：5-甲氧基-2-((S)-((4-甲氧基-3,5-二甲基-2-吡啶基)甲基)亚磺酰基-1H-苯并咪唑钠，结构式如下。
中国药典2015年版公开了艾司奥美拉唑钠原料药中对映异构体的测定方法，采用AGP手性柱(α1-酸性糖蛋白键合硅胶柱)结合高效液相色谱系统进行分离检测。
其它专利采用正相高效液相色谱法(专利CN106093233A)，该方法使用样品浓度较大，正相方法具有一定的局限性(处方中含有强极性辅料氢氧化钠，色谱峰保留时间出现持续波动，方法重现性差)，且在注射用艾司奥美拉唑钠检测过程中，正相色谱柱柱效下降较快。因此，新建立一种可靠的注射用艾司奥美拉唑钠对映异构体的检测方法，对其质量控制具有重要意义。
发明内容
以下是对本文详细描述的主题的概述。本概述并非是为了限制权利要求的保护范围。
本申请的发明人开发了一种艾司奥美拉唑钠药物中对映异构体的分析检测方法，该方法专属性好，能将可能的工艺杂质、中间体及降解杂质与主成分及对映异构体有效分开，该方法灵敏度高、重复性好、准确度高、耐用性好，可用于检测艾司奥美拉唑钠原料药或其制剂中的对映异构体含量，有效控制产品的质量。
本发明的目的是提供一种艾司奥美拉唑钠药物中对映异构体的检测方法。
本发明提供了一种艾司奥美拉唑钠药物中对映异构体的检测方法，所述检测方法包括如下步骤：
采用反相高效液相色谱法，以表面有纤维素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)共价键合硅胶为色谱柱填料，采用紫外检测器；流动相为碳酸氢铵水溶液、水溶性非质子有机溶剂以及低级烷醇所形成的混合体系；以所述流动相进行洗脱，检测艾司奥美拉唑钠药物中的对映异构体含量。
在本申请的实施方案中，所述艾司奥美拉唑钠药物为艾司奥美拉唑钠原料药、或者艾司奥美拉唑钠注射剂，优选地，所述艾司奥美拉唑钠注射剂为冻干粉针即注射用艾司奥美拉唑钠。
在本申请的实施方案中，所述流动相中水溶性非质子有机溶剂选自乙腈、四氢呋喃、丙酮和二氧六环中的一种，优选地，为乙腈。
在本申请的实施方案中，所述流动相中低级烷醇选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇和叔丁醇中的一种；优选地，为甲醇。
在本申请的实施方案中，所述流动相中碳酸氢铵水溶液浓度为10mM～50mM，优选地，为20mM。
在本申请的实施方案中，所述流动相中碳酸氢铵水溶液:水溶性非质子有机溶剂:低级烷醇的体积比为(48～52):(29～31):(19～21)，优选地，为50:30:20。
在本申请的优选实施方案中，所述流动相为20mM碳酸氢铵水溶液、乙腈以及甲醇所形成的混合体系，其中，20mM碳酸氢铵水溶液:乙腈:甲醇的体积比为(48～52):(29～31):(19～21)，优选地，为50:30:20。
在本申请的实施方案中，所述反相高效液相色谱法的色谱条件还包括：
流速为0.7～0.9ml/min，优选为0.8ml/min；
柱温为23～27℃，优选条件为25℃；
检测波长为298nm～306nm，优选为302nm；
进样量为10μl～50μl，优选为20μl。
在本申请的一些实例中，所述反相高效液相色谱法的色谱条件还包括：色谱柱为Phenomenex chiral MZ(2)-RH，规格为4.6×250mm，5μm。
在本申请的实施方案中，所述的检测方法还包括：
制备R-奥美拉唑溶液：精密称定R-奥美拉唑对照品约12mg，置20mL量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀；再精密量取1mL该溶液置100mL量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀；这里，所述的稀释剂为1mM氢氧化钠水溶液和乙腈的混合物，优选地，1mM氢氧化钠水溶液与乙腈体积比为90:10。
在本申请的实施方案中，所述的检测方法还包括：
制备供试品溶液：取艾司奥美拉唑钠药物约15mg，置50mL量瓶中，用适量稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀；这里，所述的稀释剂为1mM氢氧化钠水溶液和乙腈的混合物，优选地，1mM氢氧化钠水溶液与乙腈体积比为90:10。
在本申请的实施方案中，所述的检测方法还包括：
取溶液分别注入色谱仪，记录色谱图，以R-奥美拉唑色谱峰峰面积计，用外标法按峰面积计算对映异构体的含量
本发明的实施方案中，本发明提供的一种艾司奥美拉唑钠对映异构体的检测方法，其中，在计算对映异构体含量时，采用外标法按峰面积计进行准确定量。
在本申请的实施方案中，所述的检测方法还包括：
制备灵敏度溶液：取上述R-奥美拉唑溶液2.5mL至100mL容量瓶中，加稀释剂稀释并定容至刻度，摇匀；这里，所述的稀释剂为1mM氢氧化钠水溶液和乙腈的混合物，优选地，1mM氢氧化钠水溶液与乙腈体积比为90:10；或者
制备分离度溶液：称取艾司奥美拉唑镁对照品约15mg，精密称定，置于50mL容量瓶中，加入5mL R-奥美拉唑溶液，用稀释剂稀释溶解并定容，摇匀；这里，所述的稀释剂为1mM氢氧化钠水溶液和乙腈的混合物，优选地，1mM氢氧化钠水溶液与乙腈体积比为90:10；或者
制备对照溶液1：精密称定R-奥美拉唑对照品约12mg，精密称定，置20mL量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀；再精密量取1mL该溶液置100mL量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取5mL该溶液置50mL量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀；这里，所述的稀释剂为1mM氢氧化钠水溶液和乙腈的混合物，优选地，1mM氢氧化钠水溶液与乙腈体积比为90:10；或者
制备对照溶液2：精密称定R-奥美拉唑对照品约12mg，精密称定，置20mL量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀；再精密量取1mL该溶液置100mL量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取5mL该溶液置50mL量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀；这里，所述的稀释剂为1mM氢氧化钠水溶液和乙腈的混合物，优选地，1mM氢氧化钠水溶液与乙腈体积比为90:10。
在本申请的实施方案中，所述的检测方法，其中，可能干扰对映异构体检测的杂质包括但不限以下已知杂质，杂质化学结构如下：
在本申请中，艾司奥美拉唑钠对映异构体的化学结构为：
即对映异构体(R-Omeprazole)或R-奥美拉唑。
经系统适用性试验、杂质定位试验、定量限检测限试验、线性试验和准确度试验对本发明的方法进行了方法学验证，证明本发明提供的艾司奥美拉唑钠药物中对映异构体的检测方法具有下述优点：
(1)本方法系统适用性良好。
(2)对映异构体与主峰及各杂质峰之间均能达到良好分离。
(3)本方法灵敏度高，能够有效检测的对映异构体浓度均低于报告限。
(4)本方法准确度高。
(5)对映异构体在一定浓度范围内，呈现良好线性关系。
本发明的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本发明而了解。本发明的目的和其他优点可通过在说明书、权利要求书以及附图中所特别指出的结构来实现和获得。
附图说明
附图用来提供对本发明技术方案的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本申请的实施例一起用于解释本发明的技术方案，并不构成对本发明技术方案的限制。
图1表示的是根据中国药典2015年版的艾司奥美拉唑钠原料药中对映异构体的测定方法应用于注射用艾司奥美拉唑钠，出现降解杂质H干扰对映异构体检测色谱图；
图2为本申请实施例2的杂质分离色谱图(艾司奥美拉唑与其他杂质混合溶液)；
图3为本申请实施例6的杂质分离色谱图(艾司奥美拉唑与对映异构体的分离度溶液)；
图4为本申请实施例6的注射用艾司奥美拉唑钠稳定性样品对映异构体检测色谱图(未检出对映异构体)。
具体实施方式
为使本申请的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下文中将对本发明的实施例进行详细说明。需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互任意组合。
实施例1
艾司奥美拉唑钠的对映异构体系统适用性试验
仪器(Agilent HPLC 1260)及色谱条件：
色谱柱：菲罗门Chiral ME(2)-RH 4.6×250mm 5μm
流动相：20mM NH4HCO3溶液-乙腈-甲醇(体积比为50：30：20)混匀；
稀释剂：1mM NaOH-乙腈(体积比为90：10)，在下面的实例中如无特别说明，所用稀释剂同实施例1；
流速：0.8mL/min，柱温：25℃，检测波长：302nm，进样量：20μl；
运行时间：45min。
取下述溶液分别注入色谱仪，记录色谱图，以R-奥美拉唑色谱峰峰面积计，用外标法按峰面积计算对映异构体的含量。
实验步骤：
溶液配制(需避光使用棕色容量瓶和棕色进样瓶)：
R-奥美拉唑溶液：精密称定R-奥美拉唑对照品约12mg，精密称定，置20mL量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀；再精密量取1mL该溶液置100mL量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
灵敏度溶液：取上述R-奥美拉唑溶液2.5mL至100mL容量瓶中，加稀释剂稀释并定容至刻度，摇匀。
分离度溶液：称取艾司奥美拉唑镁对照品约15mg，精密称定，置于50mL容量瓶中，加入5mL R-奥美拉唑溶液，用稀释剂稀释溶解并定容，摇匀。
对照品溶液：精密称定R-奥美拉唑对照品约12mg，精密称定，置20mL量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀；再精密量取1mL该溶液置100mL量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取5mL该溶液置50mL量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
系统适用性中艾司奥美拉唑异构体(R-奥美拉唑)的保留时间及峰面积结果见下表：
空白溶液对R-奥美拉唑(对映异构体)检测无干扰；灵敏度溶液中R-奥美拉唑的信噪比(S/N)为10.43，分离度溶液中主峰与R-奥美拉唑的分离度为6.47；6针对照溶液1中R-奥美拉唑峰面积的RSD为2.5％,保留时间的RSD为0.2％；6针对照溶液1和2针对照溶液2中R-奥美拉唑f值的RSD为3.3％，系统适用性良好。
实施例2已知杂质定位试验
色谱条件同实施例1
实验步骤：
空白辅料贮备溶液：取依地酸二钠225.72mg和氢氧化钠约54.47mg至20mL量瓶中，用稀释液溶解稀释定容，摇匀；精密移取1mL至100mL量瓶中，用稀释液稀释定容，摇匀。空白辅料溶液：精密移取5mL空白辅料贮备溶液至50mL量瓶中，用稀释液稀释定容，摇匀。
R-奥美拉唑溶液：精密称定R-奥美拉唑对照品12.14mg，置20mL量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀；再精密量取1mL该溶液置100mL量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
分离度溶液：称取艾司奥美拉唑镁对照品15.03mg，置于50mL容量瓶中，加入5mLR-奥美拉唑溶液，用稀释剂稀释溶解并定容，摇匀。
各杂质定位溶液：分别精密称定上述杂质A-H对照品约10mg，置于不同25mL量瓶中，用50％乙醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀；精密移取5mL至50mL量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀。
艾司奥美拉唑钠定位溶液：称取艾司奥美拉唑镁对照品15.22mg，置50mL量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
供试品溶液：取注射用艾司奥美拉唑钠15.66mg，置50mL量瓶中，用适量稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
已知杂质分离度溶液：取注射用艾司奥美拉唑钠30.31mg，加适量稀释剂溶解置于100mL容量瓶中，移取杂质A-H定位溶液各1.5mL及5ml R-奥美拉唑溶液至此容量瓶中，加稀释剂定容至刻度，摇匀。
备注：艾司奥美拉唑钠和艾司奥美拉唑镁进入HPLC体系后，均表现为艾司奥美拉唑的色谱峰，因暂无艾司奥美拉唑钠的标准品故选用艾司奥美拉唑镁标准品配制艾司奥美拉唑钠定位溶液。
取上述各杂质的定位溶液、分离度溶液和已知杂质分离度溶液分别注入液相色谱仪，记录色谱图(分离情况见图2)。各杂质保留时间见下表：
名称
保留时间(min)
杂质F
4.780
杂质A
5.602
杂质G
6.229
杂质E
10.906
杂质D
12.225
艾司奥美拉唑
15.692
R-奥美拉唑
22.254
杂质B
23.849
杂质H
25.812，26.620(双峰)
杂质C
34.206
结果显示：从已知杂质分离度溶液中其他已知杂质出峰时间可知均不干扰对映异构体的检测，分离度溶液中主峰与对映异构体的分离度为6.47，达到基线分离。
注：杂质B与R-奥美拉唑的分离度为1.5，符合规定。杂质B为工艺杂质，多批次原料药中均未检出该杂质，故不会干扰注射用艾司奥美拉唑钠中对映异构体的检测。
实施例3检测限与定量限试验
色谱条件同实施例1
实验步骤：
R-奥美拉唑溶液：精密称定R-奥美拉唑对照品12.62mg，置20mL量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀；再精密量取1mL该溶液置100mL量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
艾司奥美拉唑储备溶液：称取艾司奥美拉唑镁对照品14.99mg，置50mL量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1mL该溶液置50mL量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
LOQ溶液：分别精密量取5mL艾司奥美拉唑储备溶液和5mL R-奥美拉唑溶液置200mL量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
LOD溶液：精密量取3mL LOQ溶液置10mL量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
取上述溶液分别进样，定量限溶液中R-奥美拉唑的信噪比(S/N)约为10；检测线溶液信噪比(S/N)约为3。
数据结果如下表：
结果显示：R-奥美拉唑定量限浓度小于供试品浓度的0.1％(报告限)，能够准确控制对映异构体的含量。
实施例4线性试验
色谱条件同实施例1
实验步骤：
R-奥美拉唑溶液：精密称定R-奥美拉唑对照品12.62mg，置20mL量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀；再精密量取1mL该溶液置100mL量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
R-奥美拉唑线性溶液按下表配制：
取上述溶液分别进样并记录色谱图，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，作R-奥美拉唑的线性回收方程。
线性结果如下：
结果显示：R-奥美拉唑在0.14671μg/mL(LOQ)～1.17366μg/mL(200％限度水平)浓度范围内，呈现良好的线性。
实施例5准确度试验
色谱条件同实施例1
实验步骤：
R-奥美拉唑溶液：精密称定R-奥美拉唑对照品12.62mg，置20mL量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀；再精密量取1mL该溶液置100mL量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
供试品溶液：取注射用艾司奥美拉唑钠15.42mg，置50mL量瓶中，用适量稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
准确度溶液(0.05％)：称取注射用艾司奥美拉唑钠约30mg，精密称定，置于100mL容量瓶中，加入R-奥美拉唑溶液2.5mL，用稀释剂稀释溶解并定容。平行配制3份。
准确度溶液(0.2％)-1：称取注射用艾司奥美拉唑钠约15mg，精密称定，置于50mL容量瓶中，加入R-奥美拉唑溶液5mL，用稀释剂稀释溶解并定容。平行配制3份。
准确度溶液(0.3％)-1：称取注射用艾司奥美拉唑钠约15mg，精密称定，置于50mL容量瓶中，加入R-奥美拉唑溶液7.5mL，用稀释剂稀释溶解并定容。平行配制3份。
分别进样并记录色谱图，计算回收率，结果如下表：
结果表明：R-奥美拉唑在定量限～0.3％(150％限度水平)浓度水平范围内，回收率均在95％～120％之间，本法的准确度良好。
实施例6稳定性样品检测
根据中国药典2015版四部通则要求，对制剂样品进行稳定性留样并进行对映异构体检测。
色谱条件同实施例1
实验步骤：
R-奥美拉唑溶液：精密称定R-奥美拉唑对照品11.89mg，置20mL量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀；再精密量取1mL该溶液置100mL量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。平行配制2份。
分离度溶液：称取艾司奥美拉唑镁对照品14.85mg，置于50mL容量瓶中，加入5mLR-奥美拉唑溶液，用稀释剂稀释溶解并定容，摇匀。
制剂样品溶液(25℃±2℃、RH60％±10％，24月)：取注射用艾司奥美拉唑钠15.78mg，置50mL量瓶中，用适量稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
分别进样并记录色谱图(分离度溶液见图3、制剂样品溶液见图4)，制剂样品溶液中未检出对映异构体。
虽然本申请所揭露的实施方式如上，但所述的内容仅为便于理解本申请而采用的实施方式，并非用以限定本申请。任何本申请所属领域内的技术人员，在不脱离本申请所揭露的精神和范围的前提下，可以在实施的形式及细节上进行任何的修改与变化，但本申请的专利保护范围，仍须以所附的权利要求书所界定的范围为准。