阅读说明：本技术 一种海参活性肽纳米颗粒的制备方法 ([db:专利名称-en]) 是由 姜燕斌 高雅馨 赵梓璇 于 2019-10-23 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种海参活性肽纳米颗粒的制备方法,属于海洋食品领域,其特征是以壳聚糖、多聚磷酸钠及海参活性肽为原料,经离子凝胶法制得稳定性好的壳聚糖-海参活性肽纳米粒,并经低温喷雾干燥而成；该技术不需要昂贵复杂的设备,生产成本低,易于实现产业化生产；本发明技术制备的海参活性肽稳定性好,克服了传统寡肽制品稳定性差、易于降解的障碍,极具推广前景。([db:摘要-en])

一种海参活性肽纳米颗粒的制备方法

技术领域

本发明属于海洋食品领域，具体涉及一种海参活性肽纳米颗粒的制备方法。

背景技术

“寡肽”在此一般指含有10个以下氨基羧的肽类和蛋白质。由于寡肽类或蛋白质类药物具有生物活性和特异性较高、可溶性强、低毒性等优点，现已成为药物研发的热点领域。虽然肽类制品具有较强的生物学活性，但在体内发挥生理学作用时，也具有以下限制因素:(1)膜屏障与粘液：胃肠粘膜的低透过性，有粘液屏障、小肠绒毛刷状缘肽酶，有限制细胞通透性的紧密连接，上皮及内皮细胞膜，这些肽类分子的通透性差；(2)酶屏障：在消化吸收过程中，如胃蛋白酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶、小绒毛刷状缘肽酶等，极易肽类制品发生降解。

壳聚糖是由甲壳素经脱乙酰反应生成的衍生物，壳聚糖中的活性氨基使其具有许多特殊功能，可进行多功能基活血反应和立体结构修饰。目前寡肽稳定化技术常用的技术是化学修饰，但化学修饰药物会改变活性肽的结构，进而影响其生活活性，而将活性肽包裹于亚微粒载药系统中可以绕开消化道屏障，提高活性肽的稳定性，亚微粒及其纳米技术已开始在活性肽研究中应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种海参活性肽纳米颗粒的制备方法，从而提供一种稳定性好、生物利用度高的海参活性肽制品，以弥补已有肽类制品易降解、易变性的不足。

为了解决上述问题，本发明提供一种海参活性肽纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：

1)壳聚糖溶液制备：将壳聚糖溶解于0.5％的乙酸溶液中，形成质量体积比为10mg/mL的壳聚糖溶液，隔夜充分溶胀；

2)海参活性肽制备：按每克海参添加胰蛋白酶0.01-0.05％进行酶解，酶解温度50℃，酶解时间6h，pH值7.0条件制备海参酶解液，酶解液经Sephadex G-25凝胶柱层析、喷雾干燥得海参活性肽；

3)海参活性肽溶液制备：将步骤2)制得的海参活性肽与三聚磷酸钠溶解于纯净水中，形成质量体积比为5-10mg/mL的海参活性肽溶液，并使三聚磷酸钠的质量体积比为10-20mg/mL；

4)壳聚糖-海参活性肽胶体溶液制备：将步骤3)制得的海参活性肽溶液滴加到步骤1)制得的壳聚糖溶液内，并在滴加过程中加入甘露醇，同时搅拌；

5)干燥：将步骤4)制得的壳聚糖-海参活性肽-甘露醇胶体溶液进行喷雾干燥，得到海参活性肽-壳聚糖纳米粒。

进一步，所述步骤2)制得的海参活性肽分子量在1000Da以下。

进一步，所述壳聚糖分子量为5-10万Da，脱乙酰度大于90％。

进一步，甘露醇的添加量为质量体积比3-5％。

有益效果

本发明技术工艺简单，易于产业化，反应条件温和，是一种绿色加工技术。经本发明技术制备的产品稳定性好，克服了传统寡肽制品稳定性差、易于降解的障碍，是一种极具推广前景的肽类制品制备技术。

具体实施方式

以下结合具体实施方式来进一步说明本发明。

实施例1：

一种海参活性肽纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：

1)壳聚糖溶液制备：将壳聚糖溶解于0.5％的乙酸溶液中，形成质量体积比为10mg/mL的壳聚糖溶液，隔夜充分溶胀；

2)海参活性肽制备：按每克海参添加胰蛋白酶0.01％进行酶解，酶解温度50℃，酶解时间6h，pH值7.0条件制备海参酶解液，酶解液经Sephadex G-25凝胶柱层析、喷雾干燥得海参活性肽；

3)海参活性肽溶液制备：将步骤2)制得的海参活性肽与三聚磷酸钠溶解于纯净水中，形成质量体积比为5mg/mL的海参活性肽溶液，并使三聚磷酸钠的质量体积比为10mg/mL；

4)壳聚糖-海参活性肽胶体溶液制备：将步骤3)制得的海参活性肽溶液滴加到步骤1)制得的壳聚糖溶液内，并在滴加过程中加入甘露醇，同时搅拌；

5)干燥：将步骤4)制得的壳聚糖-海参活性肽-甘露醇胶体溶液进行喷雾干燥，得到海参活性肽-壳聚糖纳米粒。

进一步，所述步骤2)制得的海参活性肽分子量在1000Da以下。

进一步，所述壳聚糖分子量为5万Da，脱乙酰度91％。

进一步，甘露醇的添加量为质量体积比3％。

实施例2：

一种海参活性肽纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：

1)壳聚糖溶液制备：将壳聚糖溶解于0.5％的乙酸溶液中，形成质量体积比为10mg/mL的壳聚糖溶液，隔夜充分溶胀；

2)海参活性肽制备：按每克海参添加胰蛋白酶0.05％进行酶解，酶解温度50℃，酶解时间6h，pH值7.0条件制备海参酶解液，酶解液经Sephadex G-25凝胶柱层析、喷雾干燥得海参活性肽；

3)海参活性肽溶液制备：将步骤2)制得的海参活性肽与三聚磷酸钠溶解于纯净水中，形成质量体积比为10mg/mL的海参活性肽溶液，并使三聚磷酸钠的质量体积比为20mg/mL；

4)壳聚糖-海参活性肽胶体溶液制备：将步骤3)制得的海参活性肽溶液滴加到步骤1)制得的壳聚糖溶液内，并在滴加过程中加入甘露醇，同时搅拌；

5)干燥：将步骤4)制得的壳聚糖-海参活性肽-甘露醇胶体溶液进行喷雾干燥，得到海参活性肽-壳聚糖纳米粒。

进一步，所述步骤2)制得的海参活性肽分子量在1000Da以下。

进一步，所述壳聚糖分子量为10万Da，脱乙酰度98％。

进一步，甘露醇的添加量为质量体积比5％。

实施例3：

一种海参活性肽纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：

1)壳聚糖溶液制备：将壳聚糖溶解于0.5％的乙酸溶液中，形成质量体积比为10mg/mL的壳聚糖溶液，隔夜充分溶胀；

2)海参活性肽制备：按每克海参添加胰蛋白酶0.03％进行酶解，酶解温度50℃，酶解时间6h，pH值7.0条件制备海参酶解液，酶解液经Sephadex G-25凝胶柱层析、喷雾干燥得海参活性肽；

3)海参活性肽溶液制备：将步骤2)制得的海参活性肽与三聚磷酸钠溶解于纯净水中，形成质量体积比为8mg/mL的海参活性肽溶液，并使三聚磷酸钠的质量体积比为15mg/mL；

4)壳聚糖-海参活性肽胶体溶液制备：将步骤3)制得的海参活性肽溶液滴加到步骤1)制得的壳聚糖溶液内，并在滴加过程中加入甘露醇，同时搅拌；

5)干燥：将步骤4)制得的壳聚糖-海参活性肽-甘露醇胶体溶液进行喷雾干燥，得到海参活性肽-壳聚糖纳米粒。

进一步，所述步骤2)制得的海参活性肽分子量在1000Da以下。

进一步，所述壳聚糖分子量为8万Da，脱乙酰度95％。

进一步，甘露醇的添加量为质量体积比4％。

本发明技术制备的海参活性肽抵抗蛋白酶的降解，本发明技术使用的甘露醇可稳定海参活性肽在喷雾干燥中的变性，经本技术制备的海参活性肽在配制及贮存过程均很稳定，不易发生变性与降解。