阅读说明：本技术 一种具有高消化吸收特性的鳕鱼蛋白肽的制备方法及其应用 (A kind of preparation method and applications with the high gadus protein peptides for digesting and assimilating characteristic ) 是由 杜明 许诗琦 涂茂林 吴超 王震宇 马武超 赵宁 李国栋 于 2019-08-26 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种具有高消化吸收特性的鳕鱼蛋白肽的制备方法,以鳕鱼肉为原料,经过打浆、碱性蛋白酶酶解、膜过滤和干燥,得鳕鱼蛋白肽粉。本发明制备的鳕鱼蛋白肽粉中分子量在1000Da以下的肽占蛋白含量的90％以上,易于人体消化、吸收、营养丰富且具有多种生物活性。本发明采用鳕鱼碎肉为原料开发消化吸收特性好的肽,利用了鳕鱼加工的副产物,价格低廉,能创造更多商业价值,方法简单、安全,可满足大规模工业化生产。所制备出的鳕鱼蛋白肽在功能性食品、保健食品或者药品中的开发利用具有重要的意义。(The invention discloses a kind of preparation methods with the high gadus protein peptides for digesting and assimilating characteristic, using codfish as raw material, filter and dry by mashing, alkali protease enzymatic hydrolysis, film, obtain gadus protein peptide powder.Gadus protein peptide powder middle-molecular-weihydroxyethyl prepared by the present invention accounts for 90% or more of protein content in 1000Da peptide below, be easy to human consumption, absorption, it is full of nutrition and have multiple biological activities.The present invention uses pollock offal to develop for raw material and digests and assimilates the good peptide of characteristic, and the by-product of cod processing is utilized, cheap, can create more commercial values, and method is simple, safe, can meet large-scale industrial production.Development and utilization of the prepared gadus protein peptides in functional food, health food or drug have great importance.)

一种具有高消化吸收特性的鳕鱼蛋白肽的制备方法及其应用

技术领域

本发明属于食品加工技术领域，具体涉及一种高消化吸收特性的鳕鱼蛋白肽的制备方法及其应用。

背景技术

蛋白质是一切生命的物质基础，是生物体细胞的重要组成成分，是人体组织更新和修补的主要原料，在生物体系中起着核心作用。人体的生长、发育、运动、遗传、生殖等一切生命活动都离不开蛋白质。蛋白质作为人体不可缺少的营养成分约占人体组织的16.3％，每天约有3％的蛋白质参与新陈代谢完成人体的各种生理活动。如果蛋白质长时间地摄入不足，人体的正常代谢和生长发育便会无法进行，轻者发生疾病，重者甚至可以导致死亡。蛋白质的补给是关系到身体健康的重要问题,只有不断的摄取优质的蛋白质,才能维持细胞的正常功能及其新陈代谢。

蛋白质是人体必需营养素之一，同时是产能营养素，它能提供人体所需的必需氨基酸，多项实验结果表明，人体对蛋白质的吸收是以氨基酸或者短肽等小分子物质进行的。因此，人们在摄食蛋白质后，需要对蛋白质进行分解才能更加充分的进行吸收。蛋白酶是人体内蛋白质分解的催化剂，它的存在为蛋白质的消化吸收创造了先决条件，消化道内的蛋白酶有胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、羧基肽酶和弹性蛋白酶等多种。一些缺失或是蛋白质酶分泌不足的人群对蛋白质的消化吸收存在着困难，并且未能分解的蛋白质在体内的代谢会给人体肝脏带来沉重的负担。

鳕鱼属于鳕鱼科，纯正鳕鱼指鳕属鱼类，分为大西洋鳕鱼(Gadus morhua)、格陵兰鳕鱼(Gadus ogac)和太平洋鳕鱼(Gadus macrocephalus)。鳕鱼为冷水性底层鱼类，海洋经济鱼类之一，在中国主要分布于渤海、黄海和东海北部。其含丰富的蛋白质、DHA、维生素A、维生素D、钙、镁、硒等营养元素，且肉质白细鲜嫩、清口不腻，世界上不少国家把鳕鱼作为主要食用鱼类。鳕鱼产品有冷冻鱼片、鱼段、块冻鱼排等，在加工过程中产生会大量的下脚料，大量废弃副产品造成资源浪费及环境污染。目前，下脚料酶解利用被各国广泛研究，但主要用于生产动物饲料，附加产值不高。因此，利用鳕鱼碎肉提取蛋白质，并生产小分子量的肽，具有较为广阔的市场前景。

发明内容

本发明的目的是基于鳕鱼高蛋白的特点，对鳕鱼加工产生的下脚料中的鳕鱼碎肉加以利用，从中提取蛋白质，并通过酶解生产一种小分子的便于消化吸收的鳕鱼蛋白肽，使其中分子量在1000Da以下的占到蛋白含量的90％以上，从而提供一种具有高消化吸收特性的鳕鱼蛋白肽及其制备方法。

为了达到上述目的，本发明提供一种具有高消化吸收特性的鳕鱼蛋白肽的制备方法，包括步骤：

S1、原料预处理：将去皮的鳕鱼碎肉洗净，按照料液比1:3～5(w/v)g/ml加水，20000～30000rpm、打浆3～5min，得原料液；

S2、酶解：将步骤S1所述原料液加入碱液，调pH至8.0～8.5，按步骤S1所述鳕鱼碎肉重量的0.1～0.2％加入碱性蛋白酶，在45～60℃搅拌酶解，整个过程中随时加入碱液维持pH8.0～8.5不变，持续2～10h完成酶解过程，所得混合物灭酶，得到酶解液；所述碱性蛋白酶活力为15万U/g；所述酶解液为混合物；

S3、离心：将步骤S2所述酶解液冷却至室温，离心取上清液，即为鳕鱼蛋白肽溶液；

S4、膜过滤：使用分子量为3kDa的超滤管在3000～4000rpm下离心50～70min，对步骤S3所述鳕鱼蛋白肽溶液进行膜过滤，取下层滤液(即分子量小于3kDa的滤过液)，为鳕鱼蛋白肽滤过液；

S5、干燥：将步骤S4所述鳕鱼蛋白肽滤过液置于60～65℃旋蒸，浓缩至所述鳕鱼蛋白肽滤过液体积的1/5～1/7，再经过干燥处理，得鳕鱼蛋白肽粉。

优选方式下，步骤S2所述灭酶为具体为：将所述混合物置于85℃加热15min；所述碱液为1mol/L NaOH溶液。

优选方式下，步骤S3所述离心的参数为：4℃、9000r/min、20min。

优选方式下，步骤S5所述干燥处理为真空冷冻干燥，参数为：真空度0～10Pa，梯度温度：-50℃，2h；-40℃，2h；-30℃，2h；-20℃，2h；-10℃，2h；0℃，2h；10℃，2h；20℃，48h。

优选方式下，步骤S5所述干燥处理为喷雾干燥，参数为：进口温度140℃，进样速度4ml/min，干燥时间60min。

优选方式下，所述具有高消化吸收特性的鳕鱼蛋白肽的制备方法，包括步骤：

S1、原料预处理：将鳕鱼加工的下脚料去皮取肉，得鳕鱼碎肉，洗净，按照料液比1:3(w/v)加去离子水g/ml，30000rpm打浆3min，得到原料液；

S2、酶解：将步骤S1所述原料液在搅拌下加入1mol/L NaOH溶液，调整pH至8.5，按步骤S1所述鳕鱼碎肉重量的0.2％加入碱性蛋白酶，在60℃下水浴加热并搅拌酶解，整个过程中随时加入1mol/L NaOH溶液维持pH8.5不变，持续10h完成酶解过程，所得混合物85℃灭酶15min，得到酶解液；所述碱性蛋白酶活力为15万U/g；

S3、离心：将步骤S2所述酶解液冷却至室温，以转速为9500r/min在4℃下离心20min，取上清液，为鳕鱼蛋白肽溶液；

S4、膜过滤：使用分子量为3kDa的超滤管在3500rpm下对步骤S3所述鳕鱼蛋白肽溶液离心60min，取下层超滤离心管的滤液，即分子量3kDa以下的滤过液，为鳕鱼蛋白肽滤过液；

S5、干燥：将步骤S4所述鳕鱼蛋白肽滤过液在65℃旋蒸浓缩至所述鳕鱼蛋白肽滤过液体积的1/5，再通过真空冷冻干燥，对蛋白肽溶液进行干燥处理，得到鳕鱼蛋白肽粉；所述真空冷冻干燥的参数为：真空度6Pa，梯度温度：-50℃，2h；-40℃，2h；-30℃，2h；-20℃，2h；-10℃，2h；0℃，2h；10℃，2h；20℃，48h。

本发明的另一目的是提供所述具有高消化吸收特性的鳕鱼蛋白肽的应用，用于制备食品。

与现有技术相比，本发明鳕鱼酶解制备蛋白肽的方法包含以下有益效果：

1、以鳕鱼为原料制备小分子量蛋白肽，目前并未见相关专利文献报道；采用绿色、安全的酶法提取技术分解成的小分子蛋白肽，其中分子量在1000Da以下的占到蛋白含量的90％以上，对于人体易消化、易吸收、营养丰富且具有多种生物活性。

2、采用鳕鱼碎肉为原料开发消化吸收特性好的肽，利用了鳕鱼加工的副产物，价格低廉，能创造更多商业价值，方法简单、安全，可满足大规模工业化生产。本发明所所制备出的鳕鱼蛋白肽肽可以用于普通食品如功能性基料粉、饮料产品(如微量元素口服液，固体饮料)、焙烤产品(如添加到面包、蛋糕等产品中)、面制品(如强化面粉、面条、方便面等)、乳制品(如乳粉、乳饮料、酸奶、再制奶酪等)、压片糖果(如直接压片、添加到牛奶片)、以胶囊形式包装的功能食品等方面；也可用于功能性食品、保健食品或者药品中的开发利用，具有重要的意义。

3、本发明是在多次反复实验的基础上得出的，其中步骤S2所述酶解过程中使用的酶的种类、酶解时间及各步骤的组合顺序均会显著影响所得鳕鱼蛋白肽粉的消化吸收特性。

附图说明

图1是本发明测定蛋白肽相对分子质量的标准品的高效液相色谱图。

图2是本发明实施例1制备的鳕鱼蛋白肽粉的高效液相色谱图。

图3是本发明实施例2制备的鳕鱼蛋白肽粉的高效液相色谱图。

图4是本发明实施例3制备的鳕鱼蛋白肽粉的高效液相色谱图

具体实施方式

本发明酶解提取方法，对蛋白肽的制备工艺进行研究，制备的鳕鱼肽具有多种人体代谢和生理调节功能，有促进免疫、激素调节、抗菌、抗病毒、降血压、降血脂、关节润滑、伤口愈合、抗衰老等作用，易消化吸收，可在医药领域、保健领域、食品领域、化妆品领域中广泛应用。

本发明具有高消化吸收特性的鳕鱼蛋白肽的制备方法按以下步骤实现：

一、原料预处理：将鳕鱼碎肉去皮、洗净，按照料液比1：3～5加去离子水，30000rpm，打浆3～5min，得到原料液；

二、酶解：搅拌下加入碱液，调整pH至8.0～8.5，按鱼肉质量的0.1～0.2％加入碱性蛋白酶，在45～60℃下水浴加热并搅拌，整个过程中随时加入碱液维持pH 8.0～8.5不变，持续2～10h完成酶解过程，85℃灭酶15min，得到酶解液；

三、离心：将酶解液冷却，以转速为9500r/min在4℃下离心20min,取上清液，为鳕鱼蛋白肽溶液；

四、膜过滤：使用分子量为3kDa的超滤管在3500rpm下离心60min，对鳕鱼蛋白肽溶液进行膜过滤，取下层滤液，为鳕鱼蛋白肽滤过液。

五、浓缩：将鳕鱼蛋白肽滤过液在60～65℃旋蒸4～6h进行浓缩，或者采用双效或者多效蒸发器进行浓缩。

六、干燥：通过真空冷冻干燥或者喷雾干燥方式，对蛋白肽滤过液进行干燥处理，得到鳕鱼蛋白肽粉。

参考方法：参考国家标准，测定鳕鱼蛋白肽粉的理化性质、氨基酸含量。采用高效液相色谱法测定肽粉的分子量。

其中所述的碱液为1mol/L NaOH溶液，碱性蛋白酶活力约为15万U/g。

实施例1：

本实施例具有高消化吸收特性的鳕鱼蛋白肽的制备方法按以下步骤实现：

S1、原料预处理：将鳕鱼加工的下脚料去皮取肉，得鳕鱼碎肉，洗净，按照料液比1:3(w/v)g/ml加去离子水，30000rpm打浆5min，得到原料液；

S2、酶解：将步骤S1所述原料液在搅拌下加入1mol/L NaOH溶液，调整pH至8.0，按步骤S1所述鳕鱼碎肉重量的0.1％加入碱性蛋白酶，在60℃下水浴加热并搅拌酶解，整个过程中随时加入1mol/L NaOH溶液维持pH 8.0不变，持续2h完成酶解过程，所得混合物85℃灭酶15min，得到酶解液；所述碱性蛋白酶活力为15万U/g；

S3、离心：将步骤S2所述酶解液冷却至室温，以转速为9500r/min在4℃下离心20min，取上清液，为鳕鱼蛋白肽溶液；

S4、膜过滤：使用分子量为3kDa的超滤管在3500rpm对步骤S3所述鳕鱼蛋白肽溶液进行离心60min，，取分子量小于3kDa的下层滤液，为鳕鱼蛋白肽滤过液；

S5、干燥：将步骤S4所述鳕鱼蛋白肽滤过液在60℃旋蒸浓缩至所述鳕鱼蛋白肽滤过液体积的1/5，再通过喷雾干燥，对蛋白肽溶液进行干燥处理，得到鳕鱼蛋白肽粉；所述喷雾干燥的参数为：进口温度140℃，进样速度4ml/min，干燥时间60min。

实施例2：

本实施方式具有高消化吸收特性的鳕鱼蛋白肽的制备方法按以下步骤实现：

S1、原料预处理：将800g去皮的鳕鱼肉洗净，加入2400ml去离子水，30000rpm打浆5min，得到原料液；

S2、酶解：将步骤S1所述原料液在搅拌下加入1mol/L NaOH溶液，调整pH至8.5，再加入1.44g碱性蛋白酶，在45℃下水浴加热并搅拌，整个过程中随时加入1mol/L NaOH溶液维持pH8.5不变，持续2h完成酶解过程，所得混合物85℃灭酶15min，得到酶解液约3200ml；所述碱性蛋白酶活力为15万U/g；

S3、离心：将步骤S2所述酶解液冷却至27℃，以转速为9500r/min在4℃下离心20min，取上清液，为鳕鱼蛋白肽溶液约2300ml；

S4、膜过滤：使用分子量为3kDa的超滤管在3500rpm对步骤S3所述鳕鱼蛋白肽溶液进行下离心60min，取超滤离心管中的下层滤液(分子量小于3kDa)，为鳕鱼蛋白肽滤过液约2000ml；

S5、干燥：将步骤S4所述鳕鱼蛋白肽滤过液在60℃旋蒸6h进行浓缩至约300ml，再通过真空冷冻干燥，对蛋白肽溶液进行干燥处理，得到鳕鱼蛋白肽粉；所述真空冷冻干燥的参数为：真空度6Pa，梯度温度：-50℃，2h；-40℃，2h；-30℃，2h；-20℃，2h；-10℃，2h；0℃，2h；10℃，2h；20℃，48h。

实施例3：

本实施方式具有高消化吸收特性的鳕鱼蛋白肽的制备方法按以下步骤实现：

S1、原料预处理：将鳕鱼加工的下脚料去皮取肉，得鳕鱼碎肉，洗净，按照料液比1:3(w/v)加去离子水g/ml，30000rpm打浆3min，得到原料液；

S2、酶解：将步骤S1所述原料液在搅拌下加入1mol/L NaOH溶液，调整pH至8.5，按步骤S1所述鳕鱼碎肉重量的0.2％加入碱性蛋白酶，在60℃下水浴加热并搅拌酶解，整个过程中随时加入1mol/L NaOH溶液维持pH8.5不变，持续10h完成酶解过程，所得混合物85℃灭酶15min，得到酶解液；所述碱性蛋白酶活力为15万U/g；

S3、离心：将步骤S2所述酶解液冷却至室温，以转速为9500r/min在4℃下离心20min，取上清液，为鳕鱼蛋白肽溶液；

S4、膜过滤：使用分子量为3kDa的超滤管在3500rpm下对步骤S3所述鳕鱼蛋白肽溶液离心60min，取下层超滤离心管的滤液，为鳕鱼蛋白肽滤过液；

S5、干燥：将步骤S4所述鳕鱼蛋白肽滤过液在65℃旋蒸浓缩至所述鳕鱼蛋白肽滤过液体积的1/5，再通过真空冷冻干燥，对蛋白肽溶液进行干燥处理，得到鳕鱼蛋白肽粉；所述真空冷冻干燥的参数为：真空度6Pa，梯度温度：-50℃，2h；-40℃，2h；-30℃，2h；-20℃，2h；-10℃，2h；0℃，2h；10℃，2h；20℃，48h。

蛋白肽的表征

实施例1～3中的鳕鱼蛋白肽粉体颜色均为白色，无异味，粉末状。

一、理化检测：取实施例1～3制备的鳕鱼蛋白肽粉，按下述方法进行蛋白含量、水分、灰分、脂肪和总糖含量的测定。

1、总蛋白含量测定方法：

采用凯氏定氮法测定总蛋白含量。称取充分混匀的固体试样0.5g(精确至0.001g)至消化管中，再加入0.4g硫酸铜、6g硫酸钾及20mL硫酸于消化炉进行消化。当消化炉温度达到420℃之后，继续消化1h，此时消化管中的液体呈绿色透明状，于自动凯氏定氮仪(使用前加入氢氧化钠溶液，盐酸标准溶液以及含有混合指示剂的硼酸溶液，其中混合指示剂为1份甲基红乙醇溶液与5份溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合)上实现自动加液、蒸馏、滴定和记录滴定数据的过程。

2、水分含量测定方法：

采用恒重法测定水分含量。取洁净玻璃制的扁形称量瓶，置于105℃干燥箱中，瓶盖斜支于瓶边，加热1.0h，取出盖好，置干燥器内冷却0.5h，称量，并重复干燥至前后两次质量差不超过2mg，即为恒重。称取2g试样(精确至0.0001g)，放入此称量瓶中，试样厚度不超过5mm，加盖，精密称量后，置于105℃干燥箱中，瓶盖斜支于瓶边，干燥4h后，盖好取出，放入干燥器内冷却0.5h后称量。然后再放入105℃干燥箱中干燥1h左右，取出，放入干燥器内冷却0.5h后再称量。并重复以上操作至前后两次质量差不超过2mg，即为恒重。

试样中水分含量计算如下：

式中：

X——试样中水分的含量，单位为克每百克(g/100g)；

m₁——称量瓶(加海砂、玻棒)和试样的质量，单位为克(g)；

m₂——称量瓶(加海砂、玻棒)和试样干燥后的质量，单位为克(g)；

m₃——称量瓶(加海砂、玻棒)的质量，单位为克(g)；

100——单位换算系数。

3、灰分含量测定方法：

采用灼烧法测定灰分含量。取大小适宜的坩埚置高温炉中，在550℃±25℃下灼烧30min，冷却至200℃左右取出，放入干燥器中冷却30min，准确称量。重复灼烧至前后两次称量相差不超过0.5mg为恒重。称取试样2g(精确至0.0001g)，将样品均匀分布在坩埚内，不要压紧。在电热板上以小火加热使试样充分炭化至无烟，然后置于高温炉中，在550℃±25℃灼烧4h。冷却至200℃左右，取出，放入干燥器中冷却30min，称量前如发现灼烧残渣有炭粒时，应向试样中滴入少许水湿润，使结块松散，蒸干水分再次灼烧至无炭粒即表示灰化完全，方可称量。重复灼烧至前后两次称量相差不超过0.5mg为恒重。

试样中灰分含量的计算如下：

式中：

X——灰分的含量，单位为克每百克(g/100g)；

m₁——坩埚和灰分的质量，单位为克(g)；

m₂——坩埚的质量，单位为克(g)；

m₃——坩埚和试样的质量，单位为克(g)；

100——单位换算系数。

4、脂肪含量测定方法：

采用索氏抽提法测定脂肪含量。称取充分试样2g，准确至0.001g，全部移入滤纸筒内。将滤纸筒放入索氏抽提器的抽提筒内，连接已干燥至恒重的接收瓶，由抽提器冷凝管上端加入无水***或石油醚至瓶内容积的三分之二处，于水浴上加热，使无水***或石油醚不断回流抽提(6次/h～8次/h)，一般抽提6h～10h。提取结束时，用磨砂玻璃棒接取1滴提取液，磨砂玻璃棒上无油斑表明提取完毕。取下接收瓶，回收无水***，待接收瓶内溶剂剩余1mL～2mL时在水浴上蒸干，再于105℃干燥1h，放干燥器内冷却0.5h后称量。重复以上操作直至恒重(直至两次称量的差不超过2mg)。

试样中脂肪含量的计算如下：

式中：

X——试样中脂肪的含量，单位为克每百克(g/100g)；

m₁——恒重后接收瓶和脂肪的含量，单位为克(g)；

m₀——接收瓶的质量，单位为克(g)；

m₂——试样的质量，单位为克(g)；

100——单位换算系数。

5、总糖含量测定方法：

采用苯酚硫酸法测定总糖含量。标准曲线的制定：分别吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL的葡萄糖标准溶液至10mL具塞试管，用蒸馏水补至1.0mL，向试液中加入1.0mL 5％苯酚溶液，然后快速加入5.0mL浓硫酸(与液面垂直加入，勿接触试管壁，以便于反应液充分充分混合)，反应液静止放置10min，使用涡旋振荡器使反应液混合，然后将试管放置于30℃水浴锅中反应20min.取适量反应液在490nm处测量吸光度。以葡萄糖质量浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，制定标准曲线。

称取约0.25g试样，准确到0.001g，倒入250mL锥形瓶，加蒸馏水溶解，转移至250mL容量瓶，加水定容。此溶液为试样测试液。准确吸取试样测试液0.2mL于10mL具塞试管，用蒸馏水补至1.0mL，向试液中加入1.0mL 5％苯酚溶液，然后快速加入5.0mL浓硫酸(与液面垂直加入，勿接触试管壁，以便于反应液充分充分混合)，反应液静止放置10min，使用涡旋振荡器使反应液混合，然后将试管放置于30℃水浴锅中反应20min.取适量反应液在490nm处测量吸光度。空白试验需与测定平行进行，用同样的方法和试剂但不加试样。以空白溶液调零，测得吸光度，以标准曲线计算总糖含量。

实施例1～3制备的鳕鱼蛋白肽粉，理化检测结果如表1所示：

表1鳕鱼蛋白肽粉的理化指标

二、氨基酸组成

实施例1～3制备的鳕鱼蛋白肽粉的游离氨基酸组成如表2所示：

表2鳕鱼蛋白肽粉的氨基酸组成

单位(g/100g)	实施例1	实施例2	实施例3
				游离氨基酸总量	14.39	16.59	19.27
丙氨酸	1.34	1.54	1.78
				丝氨酸	0.42	0.55	0.72
亮氨酸	2.09	2.25	2.79
				天冬氨酸	0.66	0.92	0.57
异亮氨酸	0.44	0.54	0.86
				甘氨酸	0.18	0.26	0.31
精氨酸	0.79	1.00	1.22
				组氨酸	0.27	0.32	0.39
缬氨酸	0.96	1.06	1.37
				脯氨酸	0.06	0.11	0.03
苏氨酸	0.69	0.93	1.04
				苯丙氨酸	2.25	2.18	2.77
蛋氨酸	1.04	1.14	1.31
				谷氨酸	1.10	1.37	1.13
赖氨酸	0.86	1.19	1.47
				酪氨酸	1.24	1.23	1.51

三、水解度测定方法

采用pH-stat法测定实施例1～3步骤S2所述酶解液的水解度，加入蛋白酶后开始计时，在水解过程中加入1.0mol/L的NaOH维持pH恒定，每10min记录一次耗碱量，直到水解结束。通过下式计算水解度。

DH＝(CV/αMh)×100％

V：耗碱量，ml。

C：NaOH摩尔浓度。

M：蛋白质质量。

α：蛋白氨基酸的平均离解度，

h：蛋白质具有的肽键毫摩尔数。

实施例1～3制备的鳕鱼蛋白酶解液，水解度如表3所示：

表3鳕鱼蛋白酶解物的水解度

	实施例1	实施例2	实施例3
				水解度(％)	24.51	20.06	35.97

四、蛋白肽分子量分布

采用高效液相排阻色谱法测定本发明实施例制备的鳕鱼蛋白肽的相对分子量分布，测试条件如下：Waters e2695高效液相色谱仪，2998检测器，波长214nm，柱温25℃，流速0.5mL/min，色谱柱TSKgel G2000SWXL，流动相为45％乙腈0.1％三氟乙酸的水溶液，标准品选择细胞色素C(12384)、抑肽酶(6511)、八肽(933)、三肽(379)、组氨酸(155)，如图1所示。本发明实施例制备的鳕鱼蛋白肽的相对分子量分布如图2～4所示。由图2～4可知，本发明制备的鳕鱼蛋白肽分子量主要分布在120～1200Da，对色谱图中曲线进行积分，按照峰面积进行比例计算，得相对分子量在1000Da以下的占到蛋白肽总含量的90％以上。

五、体外模拟消化率测定

称取1.0g本发明实施例制备的鳕鱼蛋白肽粉，溶于200ml去离子水，在37℃水浴中预热10min。用1mol/L的HCl溶液调节pH至2.0，加入0.03g胃蛋白酶(500U/mg)，在37℃水浴中不断搅拌水解2h，再用1mol/L的NaOH溶液调节pH至7.0，加入0.03g胰蛋白酶(250NFU/mg)，于37℃水浴中加热搅拌水解4h，沸水浴处理10min终止酶解反应。5000rpm，离心20min，取上清液，利用凯氏定氮法测定蛋白含量。

表4鳕鱼蛋白肽粉消化率

	实施例1	实施例2	实施例3
				消化率％	90.6	92.3	94.8

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。