一种生物发酵提取物减肥饼干及其制备方法
阅读说明：本技术 一种生物发酵提取物减肥饼干及其制备方法 (Biological fermentation extract weight-losing biscuit and preparation method thereof ) 是由 霍美 于 2021-01-19 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种生物发酵提取物减肥饼干及其制备方法,包括酵母发酵黄花万寿菊提取物、花青素微胶囊、索马甜复合蛋白、面粉和水。利用酿酒酵母发酵黄花万寿菊,将发酵液浓缩,酶解破碎,获得酵母多肽、β-葡聚糖。β-葡聚糖具有良好的抗消化性,不易被人体消化,增强饱腹感；β-葡聚糖在肠道中与花青素在淸除自由基和提高总抗氧化能力方面具有协同效果,从而可提升花青素的生物利用率和生物有效性,并且β-葡聚糖也会提高花青素对油脂和胆酸盐的吸附,去脂排油,健康减肥；用长链脂肪酯化花青素,再结合脂质体,提升花青素的稳定性；酶解法制备微孔淀粉,再利用甲基纤维素对微孔淀粉进行修饰,制成花青素微胶囊保护花青素的活性。(The invention discloses a biological fermentation extract weight-losing biscuit and a preparation method thereof. Fermenting flos Tagetis Erectae with Saccharomyces cerevisiae, concentrating the fermentation liquid, performing enzymolysis and crushing to obtain yeast polypeptide and beta-dextran. The beta-glucan has good anti-digestion performance, is not easy to digest by human bodies, and enhances satiety; the beta-glucan has a synergistic effect with anthocyanin in intestinal tracts in the aspects of cleaning free radicals and improving the total oxidation resistance, so that the bioavailability and the bioavailability of the anthocyanin can be improved, and the beta-glucan can also improve the adsorption of the anthocyanin on grease and cholate, remove fat and discharge oil and reduce weight healthily; the long-chain fat is used for esterifying the anthocyanin, and the liposome is combined, so that the stability of the anthocyanin is improved; preparing microporous starch by an enzymolysis method, and modifying the microporous starch by using methylcellulose to prepare the anthocyanin microcapsules for protecting the activity of the anthocyanin.)
技术领域
本发明涉及食品技术领域，具体为一种生物发酵提取物减肥饼干及其制备方法。
背景技术
饼干是一种常见的点心，作为一种零食或添加饮食，食用方便又便于携带，己成为日常生活中不可或缺的一种食品。目前，市场上的饼干大多都比较注重口感，更深入的比重注重健康，如饼干含有较少的脂肪、含有人体必需的多种营养物质等，但是具有特殊功能的饼干则比较少见，因此其开发潜力巨大。
目前，现有技术中也有减肥饼干的技术，但大多数都是减肥材料的简单组合，对于减肥效果往往不够理想，而且服用减肥药物，常常会伴随一系列的副反应，给患者日常生活带来痛苦。
因此，设计健康抗衰老和减肥效果好的一种生物发酵提取物减肥饼干及其制备方法是很有必要的。
发明内容
本发明的目的在于提供一种生物发酵提取物减肥饼干及其制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：一种生物发酵提取物减肥饼干，包括0.5-2份酵母发酵黄花万寿菊提取物、0.5-2份花青素微胶囊、0.1-1.5份索马甜复合蛋白、20-30份面粉和10-15份水。
根据上述技术方案，所述索马甜复合蛋白是通过基因工程手段构建的复合蛋白，复合了蛋白SUMO。
一种生物发酵提取物减肥饼干的制备方法，包括以下具体步骤：
步骤一：利用酿酒酵母发酵黄花万寿菊，23-28℃，发酵2-4天；
步骤二：将发酵液浓缩，酶解结合超声波破碎，喷雾干燥获得黄花万寿菊发酵提取物；
步骤三：利用基因工程手段制备重组索马甜复合蛋白基因，利用大肠杆菌发酵，提取索马甜复合蛋白；
步骤四：酶法酯化法酯化花青素，再制备脂质体复合物，用酶处理玉米淀粉制备微孔淀粉；再利用甲基纤维素对微孔淀粉进行修饰，然后用甲基纤维素修饰的微孔淀粉对脂质体复合花青素进行包裹，制成花青素微胶囊；
步骤五：将黄花万寿菊提取物、花青素微胶囊、索马甜复合蛋白、面粉和水混合制备面团，添加酵母，20-28℃发酵4h，放入烤箱烘烤15min，获得减肥饼干。
根据上述技术方案，所述黄花万寿菊发酵提取物的制备：将发酵液15-20：1浓缩，调节pH＝6.5，置于恒温水浴60℃中预热30min之后，加入3.5％(w/w)的酵母水解酶进行水解，水解6h后，立即沸水浴加热15min，使酶失活；向水解液中添加2mol/L的氢氧化钠溶液，调节pH至8-9，在温度为50℃的水浴摇床中提取2.0h，其中最后30min置于超声清洗机中，超声功率为80％(200W)。
根据上述技术方案，所述酯化花青素的制备：将花青素和月桂酸混合均匀，在乙醇溶剂中充分溶解后，加入脂肪酶催化反应，在45℃下反应2-6小时，反应完成后，滤纸滤除酶终止反应，旋转蒸发去除溶剂后得到花青素酶法酯化产物。
根据上述技术方案，所述花青素脂质体复合物的制备：称取一定量的卵磷脂、胆固醇、吐温-80加入到无水乙醇中，混匀溶解完全；再置于旋转蒸发仪中在50℃下减压蒸发除去乙醇形成薄膜，提高真空度继续抽干30min；然后加入一定量溶于磷酸盐缓冲溶液(PBS；pH6.8，0.05mol/L)的花青素溶液洗膜得到粗脂质体溶液；超声处理后，采用0.22μm的微孔滤膜将粗脂质体过筛处理，即得到花青素脂质体。
根据上述技术方案，所述微孔淀粉的制备：称取干基玉米原淀粉,置于容器中,加入一定值的醋酸钠缓冲液，于一定温度的水浴锅中预热,同时用电动搅拌机搅拌；称取的复合酶(葡萄糖淀粉酶、α-淀粉酶),按4：1比例用缓冲液配成酶液,将酶液全部转移到淀粉悬液中并计时,搅拌反应4h，将悬浮液在2000-5000rpm下离心5-10min,用蒸馏水洗涤并离心,如此重复2-5次后,将所得淀粉置于真空干燥箱中干燥至恒重,用粉碎机粉碎和过筛后,即得微孔淀粉。
根据上述技术方案，所述花青素微胶囊的制备：取微孔淀粉，加去离子水溶解，搅拌0.5h，取甲基纤维素(质量为微孔淀粉的1/20-30)用少量去离子水溶解并超声5min，加入微孔淀粉溶液中，加热至70℃，持续搅拌2小时；降温至室温，加入花青素脂质体，继续搅拌3h，获得花青素微胶囊。
根据上述技术方案，所述含重组索马甜蛋白基因大肠杆菌的制备：通过PCR扩增得到索马甜蛋白的表达序列，用重叠延伸PCR的方法，在索马甜蛋白启动子前用Linker链接融合蛋白SUMO基因，利用Not I和EcoR I酶切位点分别切割目的蛋白表达序列和pET9a质粒，利用T4连接酶构建大肠杆菌表达质粒，将质粒化转进入大肠杆菌。
根据上述技术方案，所述重组索马甜蛋白的提取：在4℃下，将培养基(100mL)的上清液针用5mM磷酸钠缓冲液(磷酸氢二钠3.55g，磷酸二氢钠3g溶于5L水中)后，将透析液过用5mM磷酸钠缓冲液(pH7.0)平衡的SP-Sephadex C-25(Amersham Bioscience)柱(1.7cm×5cm)，用5mM磷酸钠缓冲液(pH7.0)中的0-500mM NaCl的线性梯度洗脱重组索马甜，将通过SDS-PAGE检测的蛋白质部分用pH7.0的5mM磷酸钠缓冲液进行透析，将透析液(12mL)再次通过SP-Sephadex C-25柱上以进一步纯化；结合的蛋白质用20mM至300mM NaCl在5mM磷酸钠缓冲液(pH7.0)中的线性梯度洗脱；将重组索马甜蛋白合在一起，并用pH5.0的5mM磷酸钠缓冲液进行透析。
与现有技术相比，本发明所达到的有益效果是：本发明，
(1)食用花卉黄色万寿菊，其含有多种营养素、活性蛋白酶和多酚化合物等活性物质，具有祛风降火，化痰止咳，平肝清热的功效，采用酿酒酵母发酵食用花卉黄色万寿菊，将大分子物质降解使其活性成分更易吸收；将其发酵液浓缩，酶解结合超声波破碎，喷雾干燥之后，获得酵母多肽、β-葡聚糖，β-葡聚糖具有良好的抗消化性，不易被人体消化，增强饱腹感；β-葡聚糖在肠道中与花青素在淸除DPPH自由基和提高总抗氧化能力方面具有协同效果，从而可提升花青素的生物利用率和生物有效性，通过改善肠道菌群和上调II相代谢酶表达促进花青素代谢转化；并且β-葡聚糖也会提高花青素对油脂和胆酸盐的吸附，去脂排油，健康减肥；
(2)用长链脂肪酸月桂酸酶法酯化花青素，再结合脂质体，提升花青素的稳定性；α-淀粉酶和葡萄糖淀粉酶组合处理玉米淀粉，形成的微孔淀粉吸水率、吸油率较高；再利用甲基纤维素对微孔淀粉进行修饰，可使颗粒更易吸收脂溶性物质，然后用甲基纤维素修饰的微孔淀粉对脂质体复合花青素进行包裹，制成花青素微胶囊保护花青素的活性，花青素微胶囊使得花青素在胃液中比较稳定，可配合β-葡聚糖起到饱腹作用，当花青素胶囊进入肠道后，花青素在肠液中缓慢释放，可吸附肠道中的油脂和胆酸盐，起到去脂排油，健康减肥的效果；甲基纤维素在体内不能被消化或吸收，能保持数倍水分，造成饱腹感；甲基纤维素也有通便的作用，解决宿便问题；
(3)通过索马甜蛋白是无热量甜味剂，但长期高温会损失甜性。根据Genebank上公布的索马甜蛋白的表达序列为662bp,通过PCR扩增得到索马甜蛋白的表达序列，用重叠延伸PCR的方法，在索马甜蛋白启动子前用Linker链接融合蛋白SUMO，以增加索马甜蛋白的稳定性及表达量，利用Not I和EcoR I酶切位点分别切割目的蛋白表达序列和pET9a质粒，利用T4连接酶构建大肠杆菌表达质粒，将质粒化转进入大肠杆菌，发酵培养得到大量大肠杆菌表达的SUMO-索马甜蛋白,其高温环境下相对于索马甜蛋白稳定性好，不易丢失甜性，适当甜味的摄入也会增加人体多巴胺的分泌，增提升幸福感，又避免了葡萄糖、蔗糖的摄入量。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供技术方案：一种生物发酵提取物减肥饼干，包括酵母发酵黄花万寿菊提取物0.5-2份、花青素微胶囊0.5-2份、索马甜复合蛋白0.1-1.5份、面粉20-30份和水10-15份。
根据上述技术方案，所述索马甜复合蛋白是通过基因工程手段构建的复合蛋白，复合了蛋白SUMO。
一种生物发酵提取物减肥饼干的制备方法，包括以下具体步骤：
步骤一：利用酿酒酵母发酵黄花万寿菊，23-28℃，发酵2-4天；
步骤二：将发酵液浓缩，酶解结合超声波破碎，喷雾干燥获得黄花万寿菊发酵提取物；
步骤三：利用基因工程手段制备重组索马甜复合蛋白基因，利用大肠杆菌发酵，提取索马甜复合蛋白；
步骤四：酶法酯化法酯化花青素，再制备脂质体复合物，用酶处理玉米淀粉制备微孔淀粉；再利用甲基纤维素对微孔淀粉进行修饰，然后用甲基纤维素修饰的微孔淀粉对脂质体复合花青素进行包裹，制成花青素微胶囊；
步骤五：将黄花万寿菊提取物、花青素微胶囊、索马甜复合蛋白、面粉和水混合制备面团，添加酵母，20-28℃发酵4h，放入烤箱烘烤15min，获得减肥饼干。
根据上述技术方案，所述黄花万寿菊发酵提取物的制备：将发酵液15-20：1浓缩，调节pH＝6.5，置于恒温水浴60℃中预热30min之后，加入3.5％(w/w)的酵母水解酶进行水解，水解6h后，立即沸水浴加热15min，使酶失活；向水解液中添加2mol/L的氢氧化钠溶液，调节pH至8-9，在温度为50℃的水浴摇床中提取2.0h，其中最后30min置于超声清洗机中，超声功率为80％(200W)。
根据上述技术方案，所述酯化花青素的制备：将花青素和月桂酸混合均匀，在乙醇溶剂中充分溶解后，加入脂肪酶催化反应，在45℃下反应2-6小时，反应完成后，滤纸滤除酶终止反应，旋转蒸发去除溶剂后得到花青素酶法酯化产物。
根据上述技术方案，所述花青素脂质体复合物的制备：称取一定量的卵磷脂、胆固醇、吐温-80加入到无水乙醇中，混匀溶解完全；再置于旋转蒸发仪中在50℃下减压蒸发除去乙醇形成薄膜，提高真空度继续抽干30min；然后加入一定量溶于磷酸盐缓冲溶液(PBS；pH6.8，0.05mol/L)的花青素溶液洗膜得到粗脂质体溶液；超声处理后，采用0.22μm的微孔滤膜将粗脂质体过筛处理，即得到花青素脂质体。
根据上述技术方案，所述微孔淀粉的制备：称取干基玉米原淀粉,置于容器中,加入一定值的醋酸钠缓冲液，于一定温度的水浴锅中预热,同时用电动搅拌机搅拌；称取的复合酶(葡萄糖淀粉酶、α-淀粉酶),按4：1比例用缓冲液配成酶液,将酶液全部转移到淀粉悬液中并计时,搅拌反应4h，将悬浮液在2000-5000rpm下离心5-10min,用蒸馏水洗涤并离心,如此重复2-5次后,将所得淀粉置于真空干燥箱中干燥至恒重,用粉碎机粉碎和过筛后,即得微孔淀粉。
根据上述技术方案，所述花青素微胶囊的制备：取微孔淀粉，加去离子水溶解，搅拌0.5h，取甲基纤维素(质量为微孔淀粉的1/20-30)用少量去离子水溶解并超声5min，加入微孔淀粉溶液中，加热至70℃，持续搅拌2小时；降温至室温，加入花青素脂质体，继续搅拌3h，获得花青素微胶囊。
根据上述技术方案，所述含重组索马甜蛋白基因大肠杆菌的制备：通过PCR扩增得到索马甜蛋白的表达序列，用重叠延伸PCR的方法，在索马甜蛋白启动子前用Linker链接融合蛋白SUMO基因，利用Not I和EcoR I酶切位点分别切割目的蛋白表达序列和pET9a质粒，利用T4连接酶构建大肠杆菌表达质粒，将质粒化转进入大肠杆菌。
根据上述技术方案，所述重组索马甜蛋白的提取：在4℃下，将培养基(100mL)的上清液针用5mM磷酸钠缓冲液(磷酸氢二钠3.55g，磷酸二氢钠3g溶于5L水中)后，将透析液过用5mM磷酸钠缓冲液(pH7.0)平衡的SP-Sephadex C-25(Amersham Bioscience)柱(1.7cm×5cm)，用5mM磷酸钠缓冲液(pH7.0)中的0-500mM NaCl的线性梯度洗脱重组索马甜，将通过SDS-PAGE检测的蛋白质部分用pH7.0的5mM磷酸钠缓冲液进行透析，将透析液(12mL)再次通过SP-Sephadex C-25柱上以进一步纯化；结合的蛋白质用20mM至300mM NaCl在5mM磷酸钠缓冲液(pH7.0)中的线性梯度洗脱；将重组索马甜蛋白合在一起，并用pH5.0的5mM磷酸钠缓冲液进行透析。
实施例1
一种生物发酵提取物减肥饼干，包括酵母发酵黄花万寿菊提取物2份、花青素微胶囊1.5份、索马甜复合蛋白0.8份、面粉30份和水12份。
根据上述技术方案，所述索马甜复合蛋白是通过基因工程手段构建的复合蛋白，复合了蛋白SUMO。
一种生物发酵提取物减肥饼干的制备方法，包括以下具体步骤：
步骤一：利用酿酒酵母发酵黄花万寿菊，28℃，发酵2天；
步骤二：将发酵液浓缩，酶解结合超声波破碎，喷雾干燥获得黄花万寿菊发酵提取物；
步骤三：利用基因工程手段制备重组索马甜复合蛋白基因，利用大肠杆菌发酵，提取索马甜复合蛋白；
步骤四：酶法酯化法酯化花青素，再制备脂质体复合物，用酶处理玉米淀粉制备微孔淀粉；再利用甲基纤维素对微孔淀粉进行修饰，然后用甲基纤维素修饰的微孔淀粉对脂质体复合花青素进行包裹，制成花青素微胶囊；
步骤五：将黄花万寿菊提取物、花青素微胶囊、索马甜复合蛋白、面粉和水混合制备面团，添加酵母，25℃发酵4h，放入烤箱烘烤15min，获得减肥饼干。
根据上述技术方案，所述黄花万寿菊发酵提取物的制备：将发酵液15-20：1浓缩，调节pH＝6.5，置于恒温水浴60℃中预热30min之后，加入3.5％(w/w)的酵母水解酶进行水解，水解6h后，立即沸水浴加热15min，使酶失活；向水解液中添加2mol/L的氢氧化钠溶液，调节pH至9，在温度为50℃的水浴摇床中提取2.0h，其中最后30min置于超声清洗机中，超声功率为80％(200W)。
根据上述技术方案，所述酯化花青素的制备：将花青素和月桂酸混合均匀，在乙醇溶剂中充分溶解后，加入脂肪酶催化反应，在45℃下反应3小时，反应完成后，滤纸滤除酶终止反应，旋转蒸发去除溶剂后得到花青素酶法酯化产物。
根据上述技术方案，所述花青素脂质体复合物的制备：称取一定量的卵磷脂、胆固醇、吐温-80加入到无水乙醇中，混匀溶解完全；再置于旋转蒸发仪中在50℃下减压蒸发除去乙醇形成薄膜，提高真空度继续抽干30min；然后加入一定量溶于磷酸盐缓冲溶液(PBS；pH6.8，0.05mol/L)的花青素溶液洗膜得到粗脂质体溶液；超声处理后，采用0.22μm的微孔滤膜将粗脂质体过筛处理，即得到花青素脂质体。
根据上述技术方案，所述微孔淀粉的制备：称取干基玉米原淀粉,置于容器中,加入一定值的醋酸钠缓冲液，于一定温度的水浴锅中预热,同时用电动搅拌机搅拌；称取的复合酶(葡萄糖淀粉酶、α-淀粉酶),按4：1比例用缓冲液配成酶液,将酶液全部转移到淀粉悬液中并计时,搅拌反应4h，将悬浮液在3000rpm下离心8min,用蒸馏水洗涤并离心,如此重复4次后,将所得淀粉置于真空干燥箱中干燥至恒重,用粉碎机粉碎和过筛后,即得微孔淀粉。
根据上述技术方案，所述花青素微胶囊的制备：取微孔淀粉，加去离子水溶解，搅拌0.5h，取甲基纤维素(质量为微孔淀粉的1/30)用少量去离子水溶解并超声5min，加入微孔淀粉溶液中，加热至70℃，持续搅拌2小时；降温至室温，加入花青素脂质体，继续搅拌3h，获得花青素微胶囊。
根据上述技术方案，所述含重组索马甜蛋白基因大肠杆菌的制备：通过PCR扩增得到索马甜蛋白的表达序列，用重叠延伸PCR的方法，在索马甜蛋白启动子前用Linker链接融合蛋白SUMO基因，利用Not I和EcoR I酶切位点分别切割目的蛋白表达序列和pET9a质粒，利用T4连接酶构建大肠杆菌表达质粒，将质粒化转进入大肠杆菌。
根据上述技术方案，所述重组索马甜蛋白的提取：在4℃下，将培养基(100mL)的上清液针用5mM磷酸钠缓冲液(磷酸氢二钠3.55g，磷酸二氢钠3g溶于5L水中)后，将透析液过用5mM磷酸钠缓冲液(pH7.0)平衡的SP-Sephadex C-25(Amersham Bioscience)柱(1.7cm×5cm)，用5mM磷酸钠缓冲液(pH7.0)中的0-500mM NaCl的线性梯度洗脱重组索马甜，将通过SDS-PAGE检测的蛋白质部分用pH7.0的5mM磷酸钠缓冲液进行透析，将透析液(12mL)再次通过SP-Sephadex C-25柱上以进一步纯化；结合的蛋白质用20mM至300mM NaCl在5mM磷酸钠缓冲液(pH7.0)中的线性梯度洗脱；将重组索马甜蛋白合在一起，并用pH5.0的5mM磷酸钠缓冲液进行透析。
实施例2
一种生物发酵提取物减肥饼干，包括酵母发酵黄花万寿菊提取物1份、花青素微胶囊1份、索马甜复合蛋白0.5份、面粉20份和水10份。
根据上述技术方案，所述索马甜复合蛋白是通过基因工程手段构建的复合蛋白，复合了蛋白SUMO。
一种生物发酵提取物减肥饼干的制备方法，包括以下具体步骤：
步骤一：利用酿酒酵母发酵黄花万寿菊，23℃，发酵3天；
步骤二：将发酵液浓缩，酶解结合超声波破碎，喷雾干燥获得黄花万寿菊发酵提取物；
步骤三：利用基因工程手段制备重组索马甜复合蛋白基因，利用大肠杆菌发酵，提取索马甜复合蛋白；
步骤四：酶法酯化法酯化花青素，再制备脂质体复合物，用酶处理玉米淀粉制备微孔淀粉；再利用甲基纤维素对微孔淀粉进行修饰，然后用甲基纤维素修饰的微孔淀粉对脂质体复合花青素进行包裹，制成花青素微胶囊；
步骤五：将黄花万寿菊提取物、花青素微胶囊、索马甜复合蛋白、面粉和水混合制备面团，添加酵母，28℃发酵4h，放入烤箱烘烤15min，获得减肥饼干。
根据上述技术方案，所述黄花万寿菊发酵提取物的制备：将发酵液15：1浓缩，调节pH＝6.5，置于恒温水浴60℃中预热30min之后，加入3.5％(w/w)的酵母水解酶进行水解，水解6h后，立即沸水浴加热15min，使酶失活；向水解液中添加2mol/L的氢氧化钠溶液，调节pH至8，在温度为50℃的水浴摇床中提取2.0h，其中最后30min置于超声清洗机中，超声功率为80％(200W)。
根据上述技术方案，所述酯化花青素的制备：将花青素和月桂酸混合均匀，在乙醇溶剂中充分溶解后，加入脂肪酶催化反应，在45℃下反应5小时，反应完成后，滤纸滤除酶终止反应，旋转蒸发去除溶剂后得到花青素酶法酯化产物。
根据上述技术方案，所述花青素脂质体复合物的制备：称取一定量的卵磷脂、胆固醇、吐温-80加入到无水乙醇中，混匀溶解完全；再置于旋转蒸发仪中在50℃下减压蒸发除去乙醇形成薄膜，提高真空度继续抽干30min；然后加入一定量溶于磷酸盐缓冲溶液(PBS；pH6.8，0.05mol/L)的花青素溶液洗膜得到粗脂质体溶液；超声处理后，采用0.22μm的微孔滤膜将粗脂质体过筛处理，即得到花青素脂质体。
根据上述技术方案，所述微孔淀粉的制备：称取干基玉米原淀粉,置于容器中,加入一定值的醋酸钠缓冲液，于一定温度的水浴锅中预热,同时用电动搅拌机搅拌；称取的复合酶(葡萄糖淀粉酶、α-淀粉酶),按4：1比例用缓冲液配成酶液,将酶液全部转移到淀粉悬液中并计时,搅拌反应4h，将悬浮液在3000rpm下离心5min,用蒸馏水洗涤并离心,如此重复3次后,将所得淀粉置于真空干燥箱中干燥至恒重,用粉碎机粉碎和过筛后,即得微孔淀粉。
根据上述技术方案，所述花青素微胶囊的制备：取微孔淀粉，加去离子水溶解，搅拌0.5h，取甲基纤维素(质量为微孔淀粉的1/20)用少量去离子水溶解并超声5min，加入微孔淀粉溶液中，加热至70℃，持续搅拌2小时；降温至室温，加入花青素脂质体，继续搅拌3h，获得花青素微胶囊。
根据上述技术方案，所述含重组索马甜蛋白基因大肠杆菌的制备：通过PCR扩增得到索马甜蛋白的表达序列，用重叠延伸PCR的方法，在索马甜蛋白启动子前用Linker链接融合蛋白SUMO基因，利用Not I和EcoR I酶切位点分别切割目的蛋白表达序列和pET9a质粒，利用T4连接酶构建大肠杆菌表达质粒，将质粒化转进入大肠杆菌。
根据上述技术方案，所述重组索马甜蛋白的提取：在4℃下，将培养基(100mL)的上清液针用5mM磷酸钠缓冲液(磷酸氢二钠3.55g，磷酸二氢钠3g溶于5L水中)后，将透析液过用5mM磷酸钠缓冲液(pH7.0)平衡的SP-Sephadex C-25(Amersham Bioscience)柱(1.7cm×5cm)，用5mM磷酸钠缓冲液(pH7.0)中的0-500mM NaCl的线性梯度洗脱重组索马甜，将通过SDS-PAGE检测的蛋白质部分用pH7.0的5mM磷酸钠缓冲液进行透析，将透析液(12mL)再次通过SP-Sephadex C-25柱上以进一步纯化；结合的蛋白质用20mM至300mM NaCl在5mM磷酸钠缓冲液(pH7.0)中的线性梯度洗脱；将重组索马甜蛋白合在一起，并用pH5.0的5mM磷酸钠缓冲液进行透析。
为验证本发明的有益效果，特做以下试验：
试验1.花青素与β-葡聚糖混合物对自由基的清除能力测试
羟自由基的清除采用利用Fenton反应
取3支10mL比色管，分别依次加入1.0mL7.5mmol/L硫酸亚铁铁溶液，1.0mL7.5mmol/L水杨酸溶液，1.0mL7.5mmol/L过氧化氢溶液，在2号比色管中依次加入1.0mL的花青素与β-葡聚糖混合物，用去离子水定容至刻度，水浴加热1h后，在3号比色管中依次加入1.0mL的花青素，用去离子水定容至刻度，水浴加热1h后。在510nm波长下测吸光度值，再计算清除率。
清除率公式：清除率(％)＝(A0-As)/A0*100％
式中：A0-未加被测物吸光度值；As-加入被测物后吸光值
表1花青素与β-葡聚糖混合物对自由基清除率统计
由试验结果可见，花青素与β-葡聚糖混合物具有良好的清除自由基能力，比单纯的花青素清除自由基能力强。
试验2.本发明饼干对大鼠体重影响试验
所有大鼠增肥喂养7d后，随机分为2组，分别是减肥饼干组(10只)和空白对照组(10只)。减肥饼干组大鼠饲喂减肥饼干，空白对照组大鼠饲喂相同重量常规饲料，自由饮水，12h光照/12h黑暗，温度为23℃±2℃。喂养28天称重。具体数值如表1：
平均体重(g)
0天
7天
14天
28天
减肥饼干组
375
361
347
326
空白对照组
381
378
369
367
表2大鼠体重统计表
由表2可知，喂食本发明减肥饼干的大鼠体重下降明显，喂食常规饲料的大鼠体重下降不明显，说明本发明的减肥饼干对改善肥胖型大鼠体重有良好的效果。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
- 上一篇：一种医用注射器针头装配设备
- 下一篇：一种爱心形马卡龙的制备工艺